使用来自螟蛾属的转座酶将核酸构建体转座入真核基因组制造技术

本发明专利技术提供了用于异源基因的高表达的多核苷酸载体。一些载体还包含进一步改善表达的新型转座子和转座酶。进一步公开了可在基因转移系统中使用，以将核酸稳定地引入细胞DNA中的载体。基因转移系统可以用于例如基因表达、生物加工、基因治疗、插入诱变，或基因发现等方法中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用来自螟蛾属的转座酶将核酸构建体转座入真核基因组相关申请的交叉引用本申请要求于2019年4月8日提交的美国临时申请号62/831,097、2019年7月12日提交的美国临时申请号62/873,342，以及2020年3月17日提交的美国临时申请号62/990,568号的优先权；出于所有目的通过引用将每一篇的全部内容整体并入本文。对序列表的引用本申请涉及名为546917SEQLST.TXT的txt文件中公开的序列，该文件创建于2020年4月6日，为2,392,133字节，通过引用并入。专利
本专利技术的领域涉及用于对靶细胞的基因组进行稳定修饰的DNA载体的配置，以及非天然转座子和转座酶的用途。
技术介绍
整合到细胞基因组中的多核苷酸上编码的基因的表达水平取决于多核苷酸内序列元件的构型。整合的效率及从而整合到每个基因组中的多核苷酸的拷贝数，以及发生整合的基因组基因座也影响在多核苷酸上编码的基因的表达水平。通常可以通过将多核苷酸置于转座子中来提高多核苷酸整合到靶细胞基因组中的效率。转座子包含被转座酶识别的两个末本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多核苷酸，其包含编码转座酶的开放阅读框，所述转座酶的氨基酸序列与SEQID NO：18至少90％相同，可操作地连接至异源启动子。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20190408 US 62/831,097;20190712 US 62/873,342;20201.一种多核苷酸，其包含编码转座酶的开放阅读框，所述转座酶的氨基酸序列与SEQIDNO：18至少90％相同，可操作地连接至异源启动子。


2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述转座酶相对于SEQIDNO：18的序列包含表1的C列和D列中所示的突变。


3.根据权利要求2所述的多核苷酸，其中所述转座酶相对于SEQIDNO：18的序列在选自79、95、115、116、121、139、166、179、187、198、203、211、238、273、304、329、345、362、366、408、416、435、458、475、483、491、529、540、560和563的氨基酸位置处包含突变。


4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其中所述转座酶相对于SEQIDNO：18包含选自以下的突变：D79N、R95S、L115D、E116P、H121Q、K139E、V166F、G179N、W187F、P198R、L203R、N211R、E238D、L273M、L273I、D304R、D304K、Q329G、T345L、K362R、T366R、L408M、S416E、S435G、L458M、V475I、N483K、I491M、A529P、K540R、S560K和S563K，所述转座酶可选地包括选自选自所述组的至少2个、3个、4个，或5个。


5.根据权利要求2所述的多核苷酸，其中所述转座酶的所述氨基酸序列选自SEQIDNO：96-170。


6.根据前述权利要求中任意一项所述的多核苷酸，其中所述转座酶可以从SEQIDNO：192切除或转座转座子。


7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述转座酶的切除活性或转座活性比SEQIDNO：39的活性至少高2倍，可选地高2-50倍。


8.根据前述权利要求中任意一项所述的多核苷酸，其中所述启动子在体外转录反应中具有活性。


9.根据权利要求1-7中任意一项所述的多核苷酸，其中所述启动子在真核细胞中具有活性。


10.根据权利要求9所述的多核苷酸，其中所述真核细胞是哺乳动物细胞，可选地，选择所述开放阅读框的密码子用于哺乳动物细胞表达。


11.一种编码多肽的分离的mRNA，所述多肽的氨基酸序列与SEQIDNO：18至少90％相同，并且其中所述mRNA序列在所述mRNA和SEQIDNO:781之间的相应位置处相对于SEQIDNO：929包含至少10个同义密码子差异，可选地，其中选择所述mRNA中在所述相应位置处的密码子用于哺乳动物细胞表达。


12.根据权利要求1-11中任意一项所述的多核苷酸，其中所述开放阅读框进一步编码与所述转座酶融合的核定位序列。


13.根据权利要求1-12中任意一项所述的多核苷酸，其中所述开放阅读框进一步编码与所述转座酶融合的异源DNA结合域。


14.根据权利要求13所述的多核苷酸，其中所述DNA结合结构域衍生自CRISPRCas系统，或锌指蛋白，或TALE蛋白。


15.一种编码多肽的非天然存在的多核苷酸，所述多肽的序列与SEQIDNO：18至少90％相同，其中所述多核苷酸序列在所述多核苷酸和SEQIDNO:929之间的相应位置处相对于SEQIDNO：929具有至少10个同义密码子差异，可选地，其中选择所述多核苷酸中在所述相应位置处的密码子用于哺乳动物细胞表达。


16.由前述权利要求中的任意一项所述的多核苷酸编码的非天然存在的多肽。


17.一种包含侧接异源多核苷酸的SEQIDNO：9和SEQIDNO：10的转座子。


18.根据权利要求17所述的转座子，其在所述异源多核苷酸的一侧还包含与SEQIDNO：13至少90％相同的序列，在所述异源多核苷酸的另一侧包含与SEQIDNO：16至少90％相同的序列。


19.根据权利要求17或18所述的转座子，其中所述异源多核苷酸包含在真核细胞中有活性的异源启动子。


20.根据权利要求19所述的转...

【专利技术属性】
技术研发人员：杰里米·米舒尔，斯瑞达·戈文达拉詹，玛吉·李，
申请(专利权)人：DNA二零股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US