【技术实现步骤摘要】
一种提高梭菌中蛋白表达效率的方法
本专利技术属于基因工程
，具体涉及到一种提高梭菌中蛋白表达效率的方法。
技术介绍
梭菌(Clostridiumacetobutylicum)属革兰氏阳性菌，作为发酵生产ABE(丙酮-丁醇-乙醇)的传统菌株，目前广泛应用于生物能源的生产工艺研发和代谢工程改造中。在该菌株中利用基因工程手段表达目标蛋白的技术已经非常成熟。在大肠杆菌等模式菌株中，研究者可以通过融合一些熟知的蛋白标签、分子伴侣或者其他辅助蛋白的方法来提高目标蛋白的可溶性、稳定性或表达水平，从而提高目标蛋白的表达效率。但是在梭菌中，以往的研究无论是表达单个蛋白还是表达多个蛋白，其蛋白本身的基因只是被简单地进行独自表达，并没有融合辅助蛋白提高表达效率的报道。根据实验室前期的研究以及相关文献的报道表明，梭菌具有在很多介质表面形成生物被膜的特性，生物被膜是以胞外蛋白质和多糖等为主体的大分子聚合基质，其形成表明细胞具有大量合成、分泌胞外蛋白质的能力。大多数分泌到细胞外环境中的蛋白质都包含有信号肽分泌序列，但是在细胞外培养...
【技术保护点】
1.一种提高梭菌中蛋白表达效率的方法，其特征在于，将目标蛋白与非经典分泌蛋白融合，在梭菌中进行蛋白表达；其中，所述的非经典分泌蛋白的编码基因位点选自CA_C2703、CA_C3597、CA_C2710、CA_C0709、CA_C2452、CA_C1555、CA_C1747、CA_C3136、CA_C2990、CA_C1834、CA_C3125、CA_C2712、CA_C1807、CA_C3211、CA_P0164、CA_C2704、CA_C3145、CA_C3076、CA_C1281、CA_C1282、CA_C2229、CA_C2641、CA_C3075、CA_C2873、...
【技术特征摘要】
1.一种提高梭菌中蛋白表达效率的方法，其特征在于，将目标蛋白与非经典分泌蛋白融合，在梭菌中进行蛋白表达；其中，所述的非经典分泌蛋白的编码基因位点选自CA_C2703、CA_C3597、CA_C2710、CA_C0709、CA_C2452、CA_C1555、CA_C1747、CA_C3136、CA_C2990、CA_C1834、CA_C3125、CA_C2712、CA_C1807、CA_C3211、CA_P0164、CA_C2704、CA_C3145、CA_C3076、CA_C1281、CA_C1282、CA_C2229、CA_C2641、CA_C3075、CA_C2873、CA_P0165、CA_P0162、CA_C0711、CA_C0940、CA_C1023、CA_C2565、CA_C3083、CA_C0662、CA_C2449、CA_C2575、CA_C0022、CA_C3713、CA_C0568、CA_C3018、CA_C3600、CA_C2658、CA_C2203、CA_C3314、CA_C3334、CA_C1775、CA_C3309或CA_C0827。
2.根据权利要求1所述的提高梭菌中蛋白表达效率的方法，其特征在于，所述的目标蛋白为绿色荧光蛋白。
3.根据权利要求2所述的提高梭菌中蛋白表达效率的方法，其特征在于，将绿色荧光蛋白优化后再与非经典分泌蛋白进行融合表达；其中，优化后的绿色荧光蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。
4.根据权利要求1所述的提高梭菌中蛋白表达效率的方法，其特征在于，所述的融合表达为将非经典分泌蛋白融合于目的蛋白的N端或C端。
5.根据权利要求1所述的提高梭菌中蛋白表达效率的方法，其特征在于，所述的梭菌为丙酮丁醇梭菌。
6.根据权利要求2所述的提高梭菌中蛋白表达效率的方法，其特征在于，所述的丙酮丁醇梭菌的保藏编号为CGMCCNo.5234。
7.根据权利要求6所述的提高梭菌中蛋白表达效率的方法，其特征在于，将绿色荧光蛋白与非经典分泌蛋白融合，在丙酮丁醇梭菌中表达，得到重组丙酮丁醇梭菌；其中，所述的非经典分泌蛋白的编码基因位点选自CA_C2703...
【专利技术属性】
技术研发人员：应汉杰，柳东，曹幸园，王振宇，葛士凯，陈勇，牛欢青，刘庆国，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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