水麦冬酸的对照品的制备方法技术

本发明专利技术提供一种水麦冬酸的对照品的制备方法，包括色谱柱提纯工序，将虎掌药材粉碎物的萃取物浓缩液上样至反相色谱柱，以压力为0.05～0.5Mpa进行梯度洗脱，洗脱过程为，用以体积比计含0.1～0.6%的甲酸或者三氟乙酸和1～3%乙腈的水洗脱去除杂质，再以含0.3～0.6%的甲酸或者三氟乙酸的4～7%乙腈的洗脱，收集该洗脱液进行浓缩，得到第二粗品浓缩液；将第二粗品浓缩液冷冻干燥除去水分，得到含有水麦冬酸的半成品，精制处理工序，将水麦冬酸的半成品研磨成粉末，对该粉末进行重复进行2～4次溶剂清洗后，干燥得到水麦冬酸的成品，所述溶剂清洗，为在所述粉末中加入乙酸乙酯：丙酮=8～12：1的溶剂，使粉末均匀分散1～20分钟，过滤取得沉淀部分，将沉淀干燥。

【技术实现步骤摘要】
水麦冬酸的对照品的制备方法
本专利技术涉及一种水麦冬酸的制备方法，尤其涉及能够大量的制备高纯度的水麦冬酸的固体对照品的制备方法。
技术介绍
中药半夏为天南星科植物半夏（Pinelliaternata(Thunb.)Breit.）的干燥块茎。夏、秋二季采挖，洗净，除去外皮和须根，晒干。东北、华北以及长江流域诸地均有分布。具有燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结的功效。用于湿痰寒痰，咳喘痰多，痰饮眩悸，风痰眩晕，痰厥头痛，呕吐反胃，胸脘痞闷，梅核气；外治痈肿痰核。市场上半夏的伪品较多，其中虎掌（PinelliaePedatisectaSchott）是半夏中常见的掺伪品，半夏与虎掌药材的鉴别方法主要是性状鉴别，但鉴别难度非常大。半夏与虎掌属同科同属植物，虎掌因有较多小块茎，形似“虎掌”而得名。不乏商贩为了谋取利益，将虎掌加工后经过筛选、打磨，原有的子块茎特征不明显，与半夏非常相似，难以鉴别；如果炮制成饮片，几乎无法通过外形和粉末的性状进行鉴别。目前唯一可靠的两者鉴别方法是化学鉴别。研究发现半夏中不含有水麦冬酸，但是虎掌中大量含有，通过鉴别药材中水麦冬酸成分的有无，即可鉴别半夏是否是伪品，或者是否有虎掌掺伪。鉴别过程简单快捷有效，即使是虎掌经炮制后依旧可以鉴别。水麦冬酸的结构式如下，作为半夏、虎掌药材的鉴别及药材质量标准能够实施的重要物质基础，具有非常高的经济价值。然而，市场上目前能购买的水麦冬酸的对照品、标注品的纯度并不高，最高的只有98%左右的产品。而且目前没有水麦冬酸的提取分离方法的报道。专利CN106831404A利用高压制备色谱，从虎掌提取物制备水麦冬酸的方法，其获得了少量的98%左右的纯品，但是本专利技术的专利技术人基于CN106831404A公开的方法，试图放大制备量，却发现其无法大量获得纯度达到98%的产品，并非成本的原因，而是该方法直接放大之后，无法获得水麦冬酸高纯度纯品。令人惊讶的是，从化学结构来看，水麦冬酸本身的合成工艺也并不复杂，市场上确也并没有98%以上的高纯度的对照品出售。现状是，对于水麦冬酸这种在中药质量控制至关重要的化合物，迄今为止尚无高效、成本合理的制备方法。如何能提供一种纯度达到98.5%以上的水麦冬酸的固体对照品的制备方法，特别是能容易的进行10g级别以上的水麦冬酸的固体对照品的制备方法是业界迫切需要解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高纯度水麦冬酸（以下，有时也称为目标物）的对照品的制备方法。如果并未特殊说明，本专利技术中目标物的纯度和含量的百分数，为以质量比计的含量。如果并未特殊说明，本专利技术中液体与液体含量配比的百分数，例如甲酸在乙腈水溶液中的含量配比，以体积分数计量。本专利技术通过简单高效的操作流程，能够分离得到纯度很高的水麦冬酸。本专利技术的制备分离方法依次包括以下步骤：色谱柱提纯工序，将虎掌药材粉碎物的萃取物浓缩液上样至反相色谱柱，以压力为0.05～0.5Mpa进行梯度洗脱，洗脱过程为，用以体积比计含0.1～0.6%的甲酸或者三氟乙酸和1～3%乙腈的水洗脱去除杂质，再以含0.3～0.6%的甲酸或者三氟乙酸的4～7%乙腈的洗脱，收集该洗脱液进行浓缩，得到第二粗品浓缩液；将第二粗品浓缩液冷冻干燥除去水分，得到含有水麦冬酸的半成品，精制处理工序，将水麦冬酸的半成品研磨成粉末，对该粉末进行重复进行2～4次溶剂清洗后，干燥得到水麦冬酸的成品，所述溶剂清洗，为在所述粉末中加入乙酸乙酯：丙酮=8～12：1的溶剂，使粉末均匀分散1～20分钟，过滤取得沉淀部分并干燥。在优选的本专利技术的制备方法中，精制处理工序中，所述溶剂清洗中使用的乙酸乙酯：丙酮的比例，为9.5～10.5:1。在优选的本专利技术的制备方法中，色谱柱提纯工序中，洗脱过程为，用以体积比计含0.4～0.5%的甲酸和2～3%乙腈的水洗脱去除杂质，再以含0.4～0.5%的甲酸5～6%乙腈的洗脱。在优选的本专利技术的制备方法中，反相色谱柱的填料为粒径为40～60μm的十八烷基硅烷键合硅胶。在优选的本专利技术的制备方法中，色谱柱提纯工序中，得到第二粗品浓缩液的浓缩过程，在60℃以下的温度进行。在优选的本专利技术的制备方法中，精制处理工序，将水麦冬酸的半成品研磨至能够通过100目孔筛的粒度以下。在优选的本专利技术的制备方法中，所述虎掌药材粉碎物的萃取物浓缩液为，将虎掌药材用酸化水提取，再利用有机溶剂进行萃取得到萃取物，将萃取物浓缩得到的液体。具体而言，可以将虎掌药材粉碎为粉末，利用水或者极性溶剂进行浸泡，将浸泡液浓缩得到第一原料浓缩液，将第一原料浓缩液上样至活性碳，静态吸附10～30小时，用水洗脱去除杂质，再利用以体积比计含有10～30%的乙醇或甲醇的水洗脱获得含目标物的溶液，浓缩得到第二原料浓缩液，将第二原料浓缩液调节至PH为3～4的酸性，利用有机溶剂进行萃取，将有机溶剂萃取液浓缩得到浓缩液。在优选的本专利技术的制备方法中，利用乙酸乙酯或者正丁醇对调节至PH为3～4的酸性的第二原料浓缩液进行萃取。在优选的本专利技术的制备方法中，精制处理工序中，所述溶剂清洗中的干燥，在60℃以下的温度下进行干燥。本专利技术具有以下特点：本专利技术通过上述方法得到水麦冬酸的固体粉末纯度可以达到98.5%以上甚至更高，是简便可行，成本合理的水麦冬酸的对照品的制备方案的首次披露，该方法简便易行，而且所有的步骤都适合进行工艺放大，可以进行工业化的制备生产。后续的实施例中制备的水麦冬酸纯度甚至超过了99%，特别适合作为标准品分发，贩卖。本专利技术的开发过程中，对水麦冬酸的稳定性进行了验证，发现其几乎无法以在常见溶剂的溶液中稳定存在，这提示其难以用色谱法进行高纯度的精制提纯。附图说明图1为利用本专利技术的实施例1获得固体水麦冬酸纯品的HPLC图谱；图2为利用本专利技术的比较例1获得固体水麦冬酸的HPLC图谱；图3为实施例2中水麦冬酸纯品的水溶液放置不同时长后的HPLC图谱汇总图；图4为实施例2中水麦冬酸纯品的甲醇溶液放置不同时长后的HPLC图谱汇总图；图5为实施例2中水麦冬酸纯品的5%乙腈水放置不同时长后的HPLC图谱汇总图；图6为实施例2中水麦冬酸纯品的0.1%磷酸水的溶液放置不同时长后的HPLC图谱汇总图；图7为实施例2中水麦冬酸纯品的水溶液连续多次进样后的HPLC图谱汇总图；图8为水麦冬酸纯品的H-NMR图谱；图9为水麦冬酸纯品的C-NMR图谱；图10为水麦冬酸纯品的质谱图。具体实施方式以下记载本专利技术的具体实施方式。本专利技术的制备分离方法依次包括以下步骤：色谱柱提纯工序，将虎掌药材粉碎物的萃取物浓缩液上样至反相色谱柱，以压力为0.05～0.5Mpa进行梯度洗脱，洗脱过程为，用以体积比计含0.1～0.6%的甲酸或者三氟乙酸和1～3%乙腈的水洗脱去除杂质，再以含0.3～0.6%的甲酸或者三氟乙酸的4～7%乙腈的洗脱，收集该洗脱液进行浓缩，得到第二粗品浓缩本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种水麦冬酸的对照品的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：/n色谱柱提纯工序，将虎掌药材粉碎物的萃取物浓缩液上样至反相色谱柱，以压力为0.05～0.5Mpa进行梯度洗脱，洗脱过程为，用以体积比计含0.1～0.6%的甲酸或者三氟乙酸和1～3%乙腈的水洗脱去除杂质，再以含0.3～0.6%的甲酸或者三氟乙酸的4～7%乙腈的洗脱，收集洗脱液进行浓缩，得到第二粗品浓缩液；将第二粗品浓缩液冷冻干燥除去水分，得到含有水麦冬酸的半成品，/n精制处理工序，将水麦冬酸的半成品研磨成粉末，对该粉末进行重复进行2～4次溶剂清洗后，干燥得到水麦冬酸的成品，所述溶剂清洗，为在所述粉末中加入乙酸乙酯：丙酮=8～12：1的溶剂，使粉末均匀分散1～20分钟，过滤取得沉淀部分并干燥。/n

【技术特征摘要】
1.一种水麦冬酸的对照品的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：
色谱柱提纯工序，将虎掌药材粉碎物的萃取物浓缩液上样至反相色谱柱，以压力为0.05～0.5Mpa进行梯度洗脱，洗脱过程为，用以体积比计含0.1～0.6%的甲酸或者三氟乙酸和1～3%乙腈的水洗脱去除杂质，再以含0.3～0.6%的甲酸或者三氟乙酸的4～7%乙腈的洗脱，收集洗脱液进行浓缩，得到第二粗品浓缩液；将第二粗品浓缩液冷冻干燥除去水分，得到含有水麦冬酸的半成品，
精制处理工序，将水麦冬酸的半成品研磨成粉末，对该粉末进行重复进行2～4次溶剂清洗后，干燥得到水麦冬酸的成品，所述溶剂清洗，为在所述粉末中加入乙酸乙酯：丙酮=8～12：1的溶剂，使粉末均匀分散1～20分钟，过滤取得沉淀部分并干燥。


2.根据权利要求1所述的水麦冬酸的对照品的制备方法，其特征在于，精制处理工序中，所述溶剂清洗中使用的乙酸乙酯：丙酮的比例，为9.5～10.5:1。


3.根据权利要求1所述的水麦冬酸的对照品的制备方法，其特征在于，色谱柱提纯工序中，洗脱过程为，用以体积比计含0.4～0.5%的甲酸和2～3%乙腈的水洗脱去除杂质，再以含0.4～0.5%的甲酸5～6%乙腈的洗脱。


4.根据权利要求1所述的水麦冬酸的对照品的制备方法，其特征在于，反相色谱柱的填料为粒径为40～60μm的十八烷基硅烷键合硅胶。


5.根据权利要求1所述的水麦冬酸的对照品的制备方法，其特征在于，色谱柱提纯工序中，得到第二粗品...

【专利技术属性】
技术研发人员：辛振强，杨双名，李雪松，诸晨，钱勇，谢天培，
申请(专利权)人：上海诗丹德标准技术服务有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31