一种锌转运体8抗体检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，具体公开了一种锌转运体8抗体检测试剂盒，本发明专利技术的试剂盒包括锌转运体8抗原包被磁珠、生物素标记锌转运体8抗原、碱性磷酸酶标记链酶亲和素以及化学发光底物液。本发明专利技术制备的试剂盒组分简单，操作方便，检测快速便捷，灵敏度高，特异性强，质量稳定，并且可以明显提升阳性血清和阴性血清的区分度，降低单一抗原对阳性血清的漏检现象，进而大大减少相关疾病在早期诊断时出现的漏检现象。

【技术实现步骤摘要】
一种锌转运体8抗体检测试剂盒
本专利技术涉及生物检测领域，尤其是涉及一种锌转运体8抗体检测试剂盒。
技术介绍
锌转运蛋白8(ZnT8，又名锌转运体8)为基因SLC30A8(染色体8q24.11)所编码，属锌转蛋白(ZnT)/SLC30家族的成员，仅在胰岛β细胞高表达，分布在胰岛细胞中含有胰岛素颗粒的囊泡膜上，在胰岛素的成熟、储存和分泌过程发挥重要作用。其主要功能是利用囊泡膜上的质子泵形成的H+浓度差将Zn2+转运入囊泡内，使Zn2+积聚在囊泡内参与胰岛素成熟和储存。ZnT8参与糖尿病胰岛细胞功能障碍和胰岛素分泌不足的病理生理过程。锌是胰岛α细胞和β细胞分泌的胰高血糖素以及胰岛素旁分泌和自分泌的调节剂，而ZnT8可以通过影响锌离子浓度进而影响胰岛素的合成及分泌。ZnT8蛋白作为自身抗原引起以β细胞受损为特征的T淋巴细胞介导的自身免疫反应，进而引发自身免疫系统对胰岛β细胞特异性破坏，导致体内胰岛素绝对缺乏，最终引发1型糖尿病(T1DM)。ZnT8A目前被国际公认是继IAA、IA-2A、GADA之后的第四种主要胰岛自身抗体，在诊断T1DM及探讨其发病机制方面有重要应用。有研究表明，ZnT8A青春期1型糖尿病患儿阳性率最高，且随年龄增长阳性率降低。另有研究表明，在新发的T1DM患者中的阳性率高达60％～80％，且在IA-2A、IAA、GADA均阴性的T1DM患者中尚存在26％的阳性率，表明ZnT8A联合IA-2A、IAA、GADA抗体能提高T1DM的阳性检出率，亦可在IA-2A、IAA、GADA阳性患者中区分出胰岛素缺乏更严重的人群，可使对病患诊断更准确，对病患的治疗更有针对性。目前，临床上检测锌转运体8抗体的常见方法有酶联免疫吸附法(双抗原夹心法)、间接磁微粒化学发光法等，这些检测方法在临床应用上都存在一些不足。锌转运体8抗体酶联免疫吸附(双抗原夹心法)在临床运用上存在一些缺陷。首先，该方法将抗原固定到特种微孔板上，使用时仅能按照板孔的规格使用，无法实现独立的、单人份的检测。其次，该种试剂盒组分复杂，操作步骤繁琐，不利于临床检验操作者准确、快速地获得检验结果。此外，该方法的检测过程处于开放的空间，容易引起试剂的交叉污染而影响检测结果的准确性。间接磁微粒化学发光法采用酶标或者化学发光物质标记的抗人抗体，该抗体除了能和磁珠上锌转运体8和锌转运体8抗体的免疫复合物结合外，还可能与吸附在磁珠上的人IgG等类型的抗体结合造成假阳性。此外，间接磁微粒化学法检测锌转运体8抗体检测的抗体类型有局限性，无法检测血液中所有类型锌转运体8抗体，不利于疾病的早筛查、早诊断、早治疗。因此，亟需提供一种质量稳定，检测快速便捷，灵敏度高，特异性强的用于检测血液中锌转运体8抗体的试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种锌转运体8抗体检测试剂盒，本专利技术的试剂盒组分简单，操作方便，检测快速便捷，灵敏度高，特异性强，质量稳定，且本专利技术制备的试剂盒还可以明显提升阳性血清和阴性血清的区分度，降低单一抗原对阳性血清的漏检现象。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种锌转运体8抗体检测试剂盒，包括锌转运体8抗原包被磁珠、生物素标记锌转运体8抗原、碱性磷酸酶标记链酶亲和素以及化学发光底物液。在本专利技术的技术方案中，本专利技术人首次采用磁珠双抗原夹心法，将锌转运体8抗原包被磁珠、生物素标记锌转运体8抗原和血液样本中锌转运体8抗体形成抗原-抗体-抗原复合物，检测阳性血清样本与阴性血清样本，其阳性血清样本与阴性血清样本均有良好的区分度，且采用本专利技术的方法可以准确检测血清中多种类型的锌转运体8抗体，同时克服了间接法测定锌转运体8抗体的假阳性高的问题，大大减少相关疾病在早期诊断时出现的漏检和假阳性现象，从而有利于临床医生更加准确地制定临床方案。作为本专利技术所述锌转运体8抗体检测试剂盒的优选实施方式，所述锌转运体8抗原包被磁珠的浓度为50-200mg/L，所述生物素标记锌转运体8抗原的浓度为20-100μg/L，所述碱性磷酸酶标记链酶亲和素的浓度为2-10μg/L。作为本专利技术所述锌转运体8抗体检测试剂盒的优选实施方式，所述锌转运体8包括锌转运体8(R325)和锌转运体8(W325)。作为本专利技术所述锌转运体8抗体检测试剂盒的优选实施方式，所述锌转运体8抗原包被磁珠的制备方法包括以下步骤：取羧基化的磁珠，磁分离后去上清，加入缓冲液洗涤，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液和含有N-羟基琥珀酰亚胺的2-(N-吗啡林)乙磺酸水溶液，室温活化磁珠表面羧基，洗涤重悬，然后加入锌转运体8，磁分离去除上清液，加入含牛血清白蛋白的缓冲液，得锌转运体8抗原包被磁珠。本专利技术制备得锌转运体8抗原包被磁珠，可以结合所有种类的锌转运体8抗体，避免了以往试剂的漏检现象。作为本专利技术所述锌转运体8抗体检测试剂盒的优选实施方式，所述羧基化的纳米磁珠粒径为0.5-1.5μm。作为本专利技术所述锌转运体8抗体检测试剂盒的优选实施方式，所述生物素标记锌转运体8抗原的制备方法包括以下步骤：取锌转运体8水溶液加入缓冲液混匀，再加入含有生物素标记的二甲基甲酰胺溶液混匀，加入乙醇胺得反应液，使用G-25脱盐柱对反应液进行纯化，即得。作为本专利技术所述锌转运体8抗体检测试剂盒的优选实施方式，所述碱性磷酸酶标记链酶亲和素的制备方法包括以下步骤：S1.碱性磷酸酶的活化：取碱性磷酸酶和缓冲液混合制备得到碱性磷酸酶溶液，加入SATA溶液反应后脱盐，再加入盐酸羟胺溶液，室温反应后脱盐；S2.链霉亲和素的活化：取链霉亲和素溶液加入4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸-N-琥珀酰亚胺酯，室温反应1-2h；S3.碱性磷酸酶标记链霉亲和素：将活化后的碱性磷酸酶与链霉亲和素混合，室温反应1-3h后取出纯化，即得。作为本专利技术所述锌转运体8抗体检测试剂盒的优选实施方式，所述试剂盒还包括处理剂。作为本专利技术所述锌转运体8抗体检测试剂盒的优选实施方式，所述处理剂包括表面活性剂、Proclin300、氯化盐和含有2％BSA的Tris-HCl缓冲液。另外，本专利技术的另一目的在于提供一种利用上述试剂盒检测锌转运体8抗体的方法。为实现此目的，本专利技术采取的技术方案为：采用锌转运体8抗原包被磁珠、生物素标记锌转运体8抗原和血液样本中锌转运体8抗体在室温下孵育，磁分离洗涤后，加入碱性磷酸酶标记链酶亲和素，再次磁分离洗涤，最后加入化学发光底物液，检测发光值。通过采用上述方法测定发光值，与标准曲线对比，可推算出样品中锌转运体8抗体的含量，发现锌转运体8抗体的含量与发光值成正相关；本专利技术采用复合锌转运体8抗原，该种复合抗原可以与血液样本中的绝大部分抗体结合，避免了以往试剂的漏检现象，同时该种方法采用双抗原夹心可以检测血液样本中的所有种类的抗体，能更准确的反映疾病的发展情况。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1)本专利技术提供了一种锌转运体8抗体检测试剂盒，该试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种锌转运体8抗体检测试剂盒，其特征在于，包括锌转运体8抗原包被磁珠、生物素标记锌转运体8抗原、碱性磷酸酶标记链酶亲和素以及化学发光底物液。/n

【技术特征摘要】
1.一种锌转运体8抗体检测试剂盒，其特征在于，包括锌转运体8抗原包被磁珠、生物素标记锌转运体8抗原、碱性磷酸酶标记链酶亲和素以及化学发光底物液。


2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述锌转运体8抗原包被磁珠的浓度为50-200mg/L，所述生物素标记锌转运体8抗原的浓度为20-100μg/L，所述碱性磷酸酶标记链酶亲和素的浓度为2-10μg/L。


3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述锌转运体8包括锌转运体8(R325)和锌转运体8(W325)。


4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述锌转运体8抗原包被磁珠的制备方法包括以下步骤：取羧基化的磁珠，磁分离后去上清，加入缓冲液洗涤，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液和含有N-羟基琥珀酰亚胺的2-(N-吗啡林)乙磺酸水溶液，室温活化磁珠表面羧基，洗涤重悬，然后加入锌转运体8，磁分离去除上清液，加入含牛血清白蛋白的缓冲液，得锌转运体8抗原包被磁珠。


5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述羧基化的磁珠粒径为0.5-1.5μm...

【专利技术属性】
技术研发人员：林伟荣，曾华宁，郑盛武，齐宗献，张玲，李民友，
申请(专利权)人：广州市进德生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44