一种前列腺素E2的高收率分离纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种高收率分离纯化前列腺素E2的方法，包括以下步骤，将前列腺素粗品进行溶解、过滤；将上述过滤后的溶液上样到装有均粒反相硅胶的层析柱中进行层析；采用乙酸水溶液和有机溶剂作为流动相对目标产物进行洗脱；分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总。本发明专利技术采用单分散的UniSil C18或UniSil C8作为固定相，分离方法简单，可规模化生产，回收率高且稳定。

【技术实现步骤摘要】
一种前列腺素E2的高收率分离纯化方法
本专利技术涉及药物纯化领域，特别是一种高收率分离纯化前列腺素E2的方法。
技术介绍
前列腺素E2，也称地诺前列酮，英文名称简写为PGE2，前列腺素E2(PGE2)是一种重要的细胞生长和调节因子，是花生四烯酸环氧合酶代谢产物，为二十碳不饱和脂肪酸。PGE2可引起强烈子宫收缩，影响胎盘血液供应和胎盘功能，而发生流产。收缩子宫平滑肌的机制，可能与前列腺素使子宫平滑肌细胞内游离钙释放增加有关。PGE2不同于催产素，它对各期妊娠子宫均有兴奋作用，且比较温和，其缩宫作用较PGE2α强10～40倍。PGE2对子宫颈有转化及扩张作用，可用于人流手术前扩张宫颈。这可能是由于前列腺素刺激宫颈纤维细胞，是胶原纤维排列改变所致。PGE2可使支气管平滑肌舒张，对下丘脑体温调节中枢有升温作用，用药后体温可升高1～2℃。前列腺素E2英文名称：prostaglandinE2；PGE2；Cerviprost；(Z)-7-((1R，2R，3R)-3-Hydroxy-2-((S，E)-3-hydroxyoct-l-en-l-yl)-5-oxocyclopentyl)hept-5-enoicacid；ProstaglandinE2；prostin；ProstaglandinE2；Propess；Prepidil；MCH(human，mouse，rat)；Cervidil；prostine2；l-pge2；Prostenon；Cervidil(R)化学结构式如下：目前国内外专利、科研文献等对前列腺素E2的报道多为生产方法及产品应用专利，分离纯化方法鲜有报道。CN111394289A主要是基因工程生产方法，其获得的样品纯度极低，仅2.547％，远远不能达到合格标准。因此有必要对前列腺素E2的分离、纯化和制备做更进一步的研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高收率分离纯化前列腺素E2的方法，仅需一步层析纯化即可满足前列腺素E2纯度大于98.5％、收率大于99％的要求，纯化收率高而稳定，同时本专利技术分离方法简单方便，可用于规模化生产，大大降低生产成本。为达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种前列腺素E2的高收率分离纯化方法，包括以下步骤：1)将前列腺素E2粗提取物溶解并过滤；2)将上述过滤后的前列腺素E2溶液上样到装有反相硅胶微球的层析柱中进行层析；3)采用酸性水溶液和有机溶剂作为流动相对前列腺素E2溶液进行梯度洗脱；4)分段收集目的峰值的前列腺素E2溶液，对符合要求的组份液进行汇总；所述前列腺素E2的高收率分离纯化方法，洗脱液中前列腺素E2的纯度大于98.5％，收率大于99％。优选的，所述反相硅胶为单分散的、具有孔道结构的微球。优选的，所述反相硅胶微球的型号是UniSilC18或UniSilC8。优选的，所述1)中前列腺素E2粗提取物溶解于酸性溶液中。优选的，所述3)中酸性水溶液为乙酸水溶液。优选的，所述3)中有机溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮、异丙醇。优选的，上样前，对层析柱进行平衡，先用高浓度所述有机溶剂进行再生，后用浓度低于30％的所述有机溶剂进行平衡。所述高浓度指浓度在30％-70％之间。优选的，所述洗脱过程为，以0.2％的乙酸水溶液为A相，以乙腈为B相，先用乙腈含量占A+B总量10％～30％的流动相冲洗1-12个柱体积，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总分析测试，再用乙腈含量占A+B总量30-70％的流动相对层析柱进行再生。UniSilC18或UniSilC8是粒径均为10μm，孔径的高分子微球，该类微球严格控制的粒径大小和孔径结构(如图1)，使其作为色谱填料时具有很好的针对性，用于分离纯化前列腺素E2时有很好的效果。本专利技术采用有机溶剂和含0.2％醋酸的水溶液作为流动相，仅用6-12个柱体积就可完成前列腺素E2主峰的洗脱，所用流动相安全、无污染且成本较低，并且使用的流动相量较少，纯化周期比较短。本专利技术采用单分散的UniSilC18或UniSilC8作为固定相，仅需一步层析即可使前列腺素E2纯度高于98.5％，收率可达99％。因此，本专利技术方法分离纯化前列腺素E2，不仅纯度高、收率高且稳定，而且操作简单方便，所用固定相可重复利用，所用流动相量少节约，大大降低成本。附图说明图1为实施例1使用的UniSilC18或UniSilC8微球的的扫描电镜照片。图2为实施例1提纯前的前列腺素E2粗品的高效液相色谱分析。图3为实施例1纯化后前列腺素E2的高效液相色谱分析。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术的技术方案作进一步的描述，但本专利技术并不限于这些实施例。实施例1取样品，粗品前列腺素E2溶于酸性溶液中，含量为2mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。采用4.6×250mm的色谱柱，UniSilC18或C8微球(苏州纳微科技有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为4.2ml。对层析柱进行柱前预处理，采用0.2％的醋酸水溶液(A相)和乙腈(B相)作为流动相进行梯度洗脱，流速控制在0.7ml/min。等度洗脱过程为，用含量30％的B相冲洗72分钟，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中前列腺素E2的纯度大于98.5％，收率大于99％。图2是提纯前的前列腺素E2粗品的高效液相色谱分析，可见有一定的杂质。图3是提纯后的前列腺素E2高效液相色谱分析，可见杂质非常少。实施例2取样品，粗品前列腺素E2溶于酸性水溶液中，含量为2mg/mL。待溶液澄清后，用孔径为0.45μm滤膜过滤，收集滤液待用。采用DAC50×250mm的色谱柱，UniSilC18或C8微球(苏州纳微科技有限公司生产)作为层析柱填料，装柱体积为490.6ml。对层析柱进行柱前预处理，采用0.2％的醋酸水溶液(A相)和乙腈(B相)作为流动相进行梯度洗脱，流速控制在50ml/min。等度洗脱过程为，用含量30％的B相冲洗80分钟，分段收集目的峰值的溶液，对符合要求的组份液进行汇总，经高效液相色谱分析，洗脱液中前列腺素E2的纯度大于98.5％，收率大于99％。实施例2已经达到中试规模，分离纯化前列腺素E2的纯度和收率依然稳定，表明本专利技术方法稳定性高，可适用于规模化生产。本专利技术采用有机溶剂和含0.2％醋酸的水溶液作为流动相，仅用6-12个柱体积就可完成前列腺素E2主峰的洗脱，所用流动相安全、无污染且成本较低，并且使用的流动相量较少，纯化周期比较短。以上所述的仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种前列腺素E2的高收率分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括以下步骤：1)将前列腺素E2粗提取物溶解并过滤；2)将上述过滤后的前列腺素E2溶液上样到装有反相硅胶微球的层析柱中进行层析；3)采用酸性水溶液和有机溶剂作为流动相对前列腺素E2溶液进行洗脱；4)分段收集目的峰值的前列腺素E2溶液，对符合要求的组份液进行汇总；/n所述前列腺素E2的高收率分离纯化方法，洗脱液中前列腺素E2的纯度大于98.5％，收率大于99％。/n

【技术特征摘要】
1.一种前列腺素E2的高收率分离纯化方法，其特征在于，所述分离纯化方法包括以下步骤：1)将前列腺素E2粗提取物溶解并过滤；2)将上述过滤后的前列腺素E2溶液上样到装有反相硅胶微球的层析柱中进行层析；3)采用酸性水溶液和有机溶剂作为流动相对前列腺素E2溶液进行洗脱；4)分段收集目的峰值的前列腺素E2溶液，对符合要求的组份液进行汇总；
所述前列腺素E2的高收率分离纯化方法，洗脱液中前列腺素E2的纯度大于98.5％，收率大于99％。


2.如权利要求1所述的前列腺素E2的高收率分离纯化方法，其特征在于，所述1)中前列腺素E2粗提取物溶解于酸性溶液中。


3.如权利要求1所述的前列腺素E2的高收率分离纯化方法，其特征在于，所述反相硅胶微球的型号是UniSilC18或UniSilC8。


4.如权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：王希，邓杰，李建文，
申请(专利权)人：苏州纳微科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32