假白榄烷类二萜及其提取方法与应用技术

如式1或式2所示的假白榄烷类二萜化合物及其制备方法与其在制备逆转肿瘤细胞多药耐药性的药物中的应用，具体地说是具有逆转P‑gp介导的肿瘤细胞多药耐药作用的假白榄烷类二萜。化合物1、2无明显细胞毒性，在起到逆转多药耐药作用时，化合物固有毒性甚微，但能显著增强阿霉素对MCF‑7/Adr的抑制，逆转倍数可达3.4至85.9不等。

【技术实现步骤摘要】
假白榄烷类二萜及其提取方法与应用
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及两种新的假白榄烷类二萜及其提取方法与应用。
技术介绍
癌症是影响人类健康的重大疾病之一，随着人口的老龄化趋势及人口快速增长，全球的癌症发病数和死亡数也在快速增长。癌症正在成为人口死亡的重要原因，并且将是人类提高预期寿命的重要障碍。现有的癌症治疗手段中，化学疗法是重要手段之一。然而，在化疗药物使用过程中，一旦肿瘤细胞获得耐药性，则肿瘤化疗的效果将显著降低。根据统计，在癌症化疗过程中，约有90％的患者由于多药耐药性(multidrugresistance,MDR)的产生而不能达到预期的治疗效果。寻找低毒有效逆转肿瘤细胞耐药性，增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，从而达到更好治疗与预后效果的需求显得越来越突出。因此，探索肿瘤MDR抑制剂，显得尤为重要。在抗肿瘤多药耐药机制中，ABC转运蛋白(ATP-bindingcassettetransporterssuperfamily)介导的肿瘤多药耐药最普遍，其中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是产生多药耐药性的主要靶点，也是目前研究热点。以P-gp为靶点的肿瘤多药耐药逆转剂，以发展顺序分为以下几类：以维拉帕米(verapamil)为代表的第一代P-gp抑制剂，这类抑制剂特异性结合率低，对人体毒副作用强；以VX-710等为代表的在一代抑制剂结构基础上改造而来的第二代P-gp抑制剂，该类药物干扰体内正常代谢，限制了临床应用。第三代P-gp抑制剂的代表药物为tariguidar，对P-gp蛋白具有较高的亲和力，但此类药物吸收不良，临床效果较差。因此，针对P-gp的抑制剂亟需一种新结构。
技术实现思路
为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术提供两个假白榄烷类二萜化合物及其制备方法与其在制备逆转肿瘤细胞多药耐药性的药物中的应用，具体地说是具有逆转P-gp介导的肿瘤细胞多药耐药作用的假白榄烷类二萜。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：如式1或式2所示的假白榄烷类二萜化合物，本专利技术的两个假白榄烷类二萜为环上多个位点被乙酰基和苯甲酰基取代的化合物。优选地，所述假白榄烷类二萜化合物为式2所示的化合物。本专利技术还提供上述式1或式2所示的假白榄烷类二萜化合物的提取方法，所述式1或式2所示的假白榄烷类二萜化合物提取自甘遂块根，甘遂采购自安徽省亳州市，经鉴定为Euphorbiakansui，样品标本由浙江工业大学药学院天然药物研究所保藏，编号为No.20160810。所述方法包括乙醇浸提法、萃取、硅胶柱层析、和MCI柱层析等步骤，具体包括如下步骤：(1)取甘遂块根粉碎，室温条件下，用体积分数为95％的乙醇水溶液浸提，合并提取液，减压浓缩，得甘遂块根提取物；(2)将步骤(1)得到的甘遂块根提取物用水A溶解后，用石油醚A萃取两次，合并有机相；所述水A的体积以甘遂块根提取物的质量计为1.95～2mL/g，优选1.95mL/g；每次萃取所用石油醚A与水A的体积比为1:1；水A就是指水，此处用水A表示只是为了方便描述，无特殊含义；石油醚A就是指石油醚，此处用石油醚A表示只是为了方便描述，无特殊含义；(3)取步骤(2)中所得有机相减压浓缩，硅胶柱层析，依次用体积比为20:1、15:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1的石油醚与乙酸乙酯的混合溶液进行梯度洗脱，每个梯度分别洗脱2个柱体积；(4)取步骤(3)中体积比为5:1的石油醚与乙酸乙酯的混合溶液洗脱部分，减压浓缩后以MCI为柱层析填料，依次用体积分数为55％、65％、75％、85％、95％的甲醇水溶液以及甲醇进行第一次梯度洗脱，收集第一次梯度洗脱液以体积比为2:1的石油醚与丙酮的混合溶剂为展开剂进行TLC检测，Rf值为0.4的第一次梯度洗脱液合并并减压蒸干得第一部分，Rf值为0.6的第一次梯度洗脱液合并并减压蒸干得第二部分；(5)取步骤(4)中所述第一部分通过粗硅胶柱层析依次用体积比为6:1、5:1、4:1、3:1、2:1和1:1的石油醚/丙酮混合液进行第二次梯度洗脱，收集第二次梯度洗脱液，以体积比为2:1的石油醚与丙酮的混合溶剂为展开剂进行TLC检测，合并Rf值为0.4的第二次梯度洗脱液，浓缩后析出晶体，即得化合物1；(6)取步骤(4)中所述第二部分通过硅胶柱层析用体积比为10:1的石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂为洗脱剂进行第三次洗脱，收集第三洗脱液，以体积比为2:1的石油醚与丙酮的混合溶剂为展开剂进行TLC检测，合并Rf为0.6的第三次洗脱液，浓缩后析出晶体得到化合物2。优选地，步骤(1)用体积分数为95％的乙醇水溶液浸提3次，每次7天。进一步优选地，步骤(1)每次浸提的乙醇水溶液的体积以所述甘遂块根的质量计为2L/kg。优选地，步骤(3)中所述硅胶柱为100-200目硅胶柱，8cm。优选地，步骤(6)中所述硅胶柱为500目硅胶柱。本专利技术还提供一种上述式1或式2所示的假白榄烷类二萜化合物在制备逆转肿瘤耐药性的药物中的应用。优选地，所述耐药性是肿瘤对阿霉素的耐药性。优选地，所述肿瘤为MCF-7细胞。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是，化合物1、2无明显细胞毒性，在起到逆转多药耐药作用时，化合物固有毒性甚微，但能显著增强阿霉素对MCF-7/Adr的抑制，逆转倍数可达3.4至85.9不等。两种新型二萜化合物1、2能明显逆转耐药肿瘤细胞MCF-7/Adr的耐药性，增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，在抗肿瘤多药耐药中具有较好的应用前景。本专利技术所涉及的化合物不仅为新结构，且对P-gp介导的肿瘤多药耐药性具有良好的抑制作用。涉及的化合物未检测到明显细胞毒性(IC50>20μM)，在与阿霉素联用后，改善了阿霉素耐药的MCF-7肿瘤细胞对阿霉素的敏感性，大幅提高了阿霉素的作用。说明本专利技术所述的化合物具有较好的安全性并表现出对多药耐药肿瘤潜在的治疗价值。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此。实施例1：化合物的制备方法(1)干燥甘遂块根5kg粉碎，粉末用10L体积百分比95％乙醇浸泡，每次浸提的乙醇水溶液的体积以所述甘遂块根的质量计为2L/kg；重复提取3次，每次7天，合并提取液并减压浓缩得到514g提取物；所述的甘遂2016年8月采购自亳州，产地为山西侯马，经鉴定为Euphorbiakansui，样品标本有浙江工业大学药学院天然药物研究所保藏，编号为No.20160810。(2)将所得提取物进行石油醚/水萃取。将步骤(1)所得的甘遂块根提取物514g，加入1L水溶解，用石油醚萃取两次，每次使用1L石油醚，合并有机相，减压浓缩，得到含活性物质的有机相(110g)。(3)取步骤(2)中含活性物质的有机相，以100-200目，柱体积为500mL的硅胶为柱层析填料，用石油醚/乙酸乙酯混合液进行梯度洗脱，所述梯度洗脱的步骤为：体积比20:1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.如式1或式2所示的假白榄烷类二萜化合物，/n

【技术特征摘要】
1.如式1或式2所示的假白榄烷类二萜化合物，





2.一种如权利要求1所述的式1或式2所示的假白榄烷类二萜化合物的提取方法，其特征在于所述方法包括如下步骤：
(1)取甘遂块根粉碎，室温条件下，用体积分数为95％的乙醇水溶液浸提，合并提取液，减压浓缩，得甘遂块根提取物；
(2)将步骤(1)得到的甘遂块根提取物用水A溶解后，用石油醚A萃取两次，合并有机相；所述水A的体积以甘遂块根提取物的质量计为1.95～2mL/g；每次萃取所用石油醚A与水A的体积比为1:1；
(3)取步骤(2)中所得有机相减压浓缩，硅胶柱层析，依次用体积比为20:1、15:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1的石油醚与乙酸乙酯的混合溶液进行梯度洗脱，每个梯度分别洗脱2个柱体积；
(4)取步骤(3)中体积比为5:1的石油醚与乙酸乙酯的混合溶液洗脱部分，减压浓缩后以MCI为柱层析填料，依次用体积分数为55％、65％、75％、85％、95％的甲醇水溶液以及甲醇进行第一次梯度洗脱，收集第一次梯度洗脱液以体积比为2:1的石油醚与丙酮的混合溶剂为展开剂进行TLC检测，Rf值为0.4的第一次梯度洗脱液合并并减压蒸干得第一部分，Rf值为0.6的第一次梯度洗脱液合并并减压蒸干得第二部分；
(5)取步骤(4)中所述第一部分通过粗硅胶柱层析依次用体积比为6:1、5:1、4:1、3:1、2:1和1:1的石油醚/丙酮混合液进行第二次梯度洗脱，收集第二次梯度洗脱液，以体积比为2:1的石油醚与丙酮的混合溶剂为展开剂进行TLC检测，合并Rf值为0.4的第二次梯度洗脱液，浓缩后析...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄瞿阳，章乐，占扎君，马列峰，单伟光，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33