使用胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体及肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的神经病变治疗制造技术

本发明专利技术涉及如下的方法，即，通过给药将人类胰岛素样生长因子1异构体及人类肝细胞生长因子异构体加密的脱氧核糖核酸构建体来治疗神经病变的方法。并且，提供可用于多种脱氧核糖核酸构建体及并用疗法的包含上述脱氧核糖核酸构建体的药学组合物。本发明专利技术提供安全且有效治疗神经病变患者的方式。效治疗神经病变患者的方式。效治疗神经病变患者的方式。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体及肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的神经病变治疗


[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2018年7月17日提交且申请号为62/699,667的美国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
[0003]序列表
[0004]本申请包含通过EFS-Web提出的序列表，由此，其全部内容通过引用结合在本申请中。在2019年7月1日创建的ASCII副本的名称为37536US_CRF_sequencelisting.txt，大小为130163字节。

技术介绍

[0005]神经病变是由神经损伤引起的慢性病理状况。神经病变是糖尿病的常见结果，糖尿病患者的神经病变被明确称为糖尿病性神经病变。神经病变也有可能因感染(infection)(例如，疱疹病毒，与在感染后发生的病变有关的神经病变为疱疹后神经痛；人类免疫缺陷病毒(HIV)/艾滋病(AIDS)；莱姆病；麻风病；梅毒；带状疱疹)；自身免疫病(例如，类风湿关节炎、系统性红斑狼疮及格林巴利综合征)；遗传性或遗传疾病(例如，弗里德里希共济失调(Friedreich
’
s ataxia)及夏科-马里-图斯病(Charcot-Marie-Tooth disease))；淀粉样变性(amyloidosis)；尿毒症；毒素、毒药或药物；外伤；或受伤所引起的神经损伤而导致。在一部分情况下，无法得知原因，在此情况下，将神经病变称为特发性神经病变。
[0006]与原因无关，神经病变为与特定症状有关，其部分依赖如疼痛(神经性疼痛)、其他感觉缺陷(例如，包含部分或完全感觉丧失的麻醉；及包含麻木(numbness)和刺痛感(tingling)的感觉异常)、运动缺陷(例如，虚弱、反射丧失(loss of reflexes)、肌肉质量丧失(loss of muscle mass)、抽筋、灵活性下降(loss of dexterity)等)以及自主神经功能障碍(例如，恶心、呕吐、阳痿(impotence)、头晕、便秘、腹泻等)的神经损伤的解剖学部位(例如，末梢神经病变、颅骨神经病变、自主神经病变、局部(focal)神经病变)。
[0007]对神经病变的治疗通常采用管理相关症状的措施，在已知病因的情况下，通过治疗神经病变的根本原因来进行常规治疗。例如，使用止痛药或对于糖尿病、自身免疫性疾病、感染或维生素缺乏症的药物治疗。但是，这种方法本身不能治疗神经损伤。
[0008]因此，需要对于可以预防及治疗与神经病变有关的神经损伤的有效治疗方法。
[0009]已经提出了各种生长因子作为治疗神经病的可用制剂，Kessler及其同事最近报道了在糖尿病性末梢神经病变中成功进行的非病毒性肝细胞生长因子(肝细胞生长因子)基因治疗的双盲、安慰剂对照、人类2期临床试验。Kessler et al.，Annals Clin.Transl.Neurology 2(5)：465-478(2015)。并且，参照美国专利第9,963,493号，其全部内容通过引用结合在本申请中。
[0010]尽管用肝细胞生长因子表达核酸构建体在治疗糖尿病性末梢神经病变方面取得
了临床成功，但是存在引起神经病变的病因范围广泛以及神经病变的广泛临床表现，因此，仍然需要以包含使用肝细胞生长因子和其他治疗剂的治疗方法为主的其他治疗方法。

技术实现思路

[0011]技术问题
[0012]本专利技术以如下的新发现为基础，若组合可以表达人类胰岛素样生长因子1异构体的胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建及可以表达人类肝细胞生长因子异构体的肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体来给药，则有效治疗与神经病变有关的症状。上述两个脱氧核糖核酸构建体的组合物的治疗效果大于肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体自身的治疗效果(例如，VM202或pCK-HGF
728
)。本专利技术提供可用于并用疗法的将胰岛素样生长因子1异构体或肝细胞生长因子异构体加密的多种脱氧核糖核酸构建体。并且，本专利技术提供给药在生物体内有效治疗与神经病变有关的症状的脱氧核糖核酸构建体的方法。
[0013]因此，本专利技术提供使用胰岛素样生长因子1及肝细胞生长因子异构体来治疗神经病变的新的并用疗法。
[0014]技术方案
[0015]详细地，在一实施方式中，本专利技术提供神经病变治疗方法，上述神经病变治疗方法包括：步骤(1)，向患有神经病变的对象体给药能够表达人类胰岛素样生长因子1异构体的第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的治疗有效量；以及步骤(2)，向上述对象体给药能够表达人类肝细胞生长因子异构体的第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的治疗有效量。
[0016]在一具体例中，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体可表达包含序列14的多肽的I类(Class)IGF-1Ea蛋白质或包含序列16的多肽的I类IGF-1Ec蛋白质。在一具体例中，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体无法表达包含序列18的多肽的II类IGF-1Ea蛋白质及包含序列20的多肽的I类IGF-1Eb蛋白质。
[0017]在一具体例中，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列15的多核苷酸。在一具体例中，上述方法还包括向上述对象体给药第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤，上述第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列17的多核苷酸。
[0018]在一具体例中，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列17的多核苷酸。在一具体例中，上述方法还包括向上述对象体给药第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤，上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列15的多核苷酸。
[0019]在一具体例中，同时执行给药上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤及给药上述第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤。在一具体例中，依次执行给药上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤及给药上述第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤。
[0020]在一具体例中，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体加密一个以上的人类胰岛素样生长因子1异构体。在一具体例中，一个以上的人类胰岛素样生长因子1异构体包含序列14的多肽及序列16的多肽。
[0021]在一具体例中，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含：序列1的第一胰岛素样生长因子多核苷酸(外显子1、3及4)或其的简并物；序列2的第二胰岛素样生长因子多核苷酸(内含子4)或其的片段物；序列3的第三胰岛素样生长因子多核苷酸(外显子5及6-1)或其的简并物；序列4的第四胰岛素样生长因子多核苷酸(内含子5)或其的片段物；以及序列5的第五胰岛素样生长因子多核苷酸(外显子6-2)或其的简并物，上述第一多核苷酸、上述第二本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种神经病变治疗方法，其特征在于，上述方法包括：向患有神经病变的对象体给药能够表达人类胰岛素样生长因子1异构体的第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的治疗有效量的步骤；以及向上述对象体给药能够表达人类肝细胞生长因子异构体的第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的治疗有效量的步骤。2.根据权利要求1所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体能够表达包含序列14的多肽的I类IGF-1Ea蛋白质或包含序列16的多肽的I类IGF-1Ec蛋白质。3.根据权利要求1或2所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体均无法表达包含序列18的多肽的II类IGF-1Ea蛋白质及包含序列20的多肽的I类IGF-1Eb蛋白质。4.根据权利要求1至3中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列15的多核苷酸。5.根据权利要求4所述的神经病变治疗方法，其特征在于，还包括向上述对象体给药第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤，上述第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列17的多核苷酸。6.根据权利要求1至3中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列17的多核苷酸。7.根据权利要求6所述的神经病变治疗方法，其特征在于，还包括向上述对象体给药第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤，上述第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列15的多核苷酸。8.根据权利要求5或7所述的神经病变治疗方法，其特征在于，同时执行给药上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤及给药上述第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤。9.根据权利要求5或7所述的神经病变治疗方法，其特征在于，依次执行给药上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤及给药上述第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤。10.根据权利要求1至9中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体加密一个以上的人类胰岛素样生长因子1异构体。11.根据权利要求10所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述一个以上的人类胰岛素样生长因子1异构体包含序列14的多肽及序列16的多肽。12.根据权利要求10所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含：序列1的第一胰岛素样生长因子多核苷酸(外显子1、3、4)或其的简并物；序列2的第二胰岛素样生长因子多核苷酸(内含子4)或其的片段物；序列3的第三胰岛素样生长因子多核苷酸(外显子5及6-1)或其的简并物；序列4的第四胰岛素样生长因子多核苷酸(内含子5)或其的片段物；以及序列5的第五胰岛素样生长因子多核苷酸(外显子6-2)或其的简并物，
上述第一多核苷酸、上述第二多核苷酸、上述第三多核苷酸、上述第四多核苷酸及上述第五多核苷酸按从5
’
向3
’
顺序依次连接。13.根据权利要求12所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第二胰岛素样生长因子多核苷酸为序列6的多核苷酸。14.根据权利要求12所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第二胰岛素样生长因子多核苷酸为序列7的多核苷酸。15.根据权利要求12所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第四胰岛素样生长因子多核苷酸为序列8的多核苷酸。16.根据权利要求1至5中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含质粒载体。17.根据权利要求16所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述质粒载体为pCK。18.根据权利要求16所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述质粒载体为pTx。19.根据权利要求12至18中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列10的多核苷酸。20.根据权利要求12至18中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列9的多核苷酸。21.根据权利要求1至20中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体及上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体按减少上述对象体的疼痛的充分的量给药。22.根据权利要求1至21中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述对象体患有糖尿病性神经病变。23.根据权利要求1至22中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体及上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体通过多重肌肉内注射给药。24.根据权利要求1至23中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述人类肝细胞生长因子异构体为序列11的flHGF或序列12的dHGF。25.根据权利要求24所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体加密一个以上的人类肝细胞生长因子异构体。26.根据权利要求25所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体加密两种人类肝细胞生长因子异构体，上述两种人类肝细胞生长因子异构体为序列11的flHGF及序列12的dHGF。27.根据权利要求1至26中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体包含质粒载体，选择性地，上述质粒载体为pCK载体或pTx载体。28.根据权利要求1至27中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体包含：序列22的第一肝细胞生长因子多核苷酸(外显子1-4)或其的简并物；序列25的第二肝细胞生长因子多核苷酸(内含子4)或其的功能性片段物；以及序列23的第三肝细胞生长因子多核苷酸(外显子5-18)或其的简并物，
上述第二肝细胞生长因子多核苷酸位于上述第一肝细胞生长因子多核苷酸及上述第三肝细胞生长因子多核苷酸之间，上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体加密两种人类肝细胞生长因子异构体。29.根据权利要求28所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列13的多核苷酸。30.根据权利要求1至29中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体及上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体联合给药。31.根据权利要求30所述的神经病变治疗方法，其特征在于，上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体及上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体通过肌肉内注射联合给药。32.根据权利要求1至29中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，分离执行给药上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤及给药上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤。33.根据权利要求32所述的神经病变治疗方法，其特征在于，给药上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤及给药上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤至少按3周间隔执行。34.根据权利要求1至33中任一项所述的神经病变治疗方法，其特征在于，还包括向上述对象体给药能够表达选自序列11的flHGF及序列12的dHGF的人类肝细胞生长因子异构体的第二肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤。35.一种神经病变治疗方法，其特征在于，包括：向患有神经病变的对象体给药包含序列13的多核苷酸的肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤；以及向上述对象体给药包含序列10的多核苷酸或序列9的多核苷酸的胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤，给药上述肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤及给药上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤至少按3周间隔执行。36.一种神经病变治疗方法，其特征在于，上述方法包括：向患有神经病变的对象体给药包含序列33的多核苷酸的肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤；以及向上述对象体给药包含序列10的多核苷酸或序列9的多核苷酸的胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤，给药上述肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤及给药上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤至少按3周间隔执行。37.一种神经病变治疗方法，其特征在于，上述方法包括：向患有神经病变的对象体给药包含序列13的多核苷酸的肝细胞生长因子-加密脱氧核
糖核酸构建体的步骤；以及向上述对象体给药加密序列15的多核苷酸的第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体及加密序列17的多核苷酸的第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤，给药上述肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤及给药上述第一胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体及上述第二胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体的步骤至少按3周间隔执行。38.一种药学组合物，其特征在于，包含：能够表达至少一个人类胰岛素样生长因子1异构体的胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体；能够表达至少一个人类肝细胞生长因子异构体的肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体；以及药学上可接受的赋形剂。39.根据权利要求38所述的药学组合物，其特征在于，上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体加密包含序列14的多肽的I类IGF-1Ea蛋白质或包含序列16的多肽的I类IGF-1Ec蛋白质。40.根据权利要求38或39所述的药学组合物，其特征在于，上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体加密一个以上的人类胰岛素样生长因子1异构体。41.根据权利要求40所述的药学组合物，其特征在于，上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体加密两种人类胰岛素样生长因子1异构体，上述两种人类胰岛素样生长因子1异构体为包含序列14的多肽及序列16的多肽的I类IGF-1Ec蛋白质。42.根据权利要求41所述的药学组合物，其特征在于，上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含：序列1的第一胰岛素样生长因子多核苷酸(外显子1、3、4)或其的简并物；序列2的第二胰岛素样生长因子多核苷酸(内含子4)或其的片段物；序列3的第三胰岛素样生长因子多核苷酸(外显子5及6-1)或其的简并物；序列4的第四胰岛素样生长因子多核苷酸(内含子5)或其的片段物；以及序列5的第五胰岛素样生长因子多核苷酸(外显子6-2)或其的简并物，上述第一多核苷酸、上述第二多核苷酸、上述第三多核苷酸、上述第四多核苷酸及上述第五多核苷酸按从5
’
向3
’
的顺序依次连接。43.根据权利要求42所述的药学组合物，其特征在于，上述第二胰岛素样生长因子多核苷酸为序列6的多核苷酸。44.根据权利要求42所述的药学组合物，其特征在于，上述第二胰岛素样生长因子多核苷酸为序列7的多核苷酸。45.根据权利要求42所述的药学组合物，其特征在于，上述第四胰岛素样生长因子多核苷酸为序列8的多核苷酸。46.根据权利要求42所述的药学组合物，其特征在于，上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体还包含质粒载体。47.根据权利要求46所述的药学组合物，其特征在于，上述质粒载体为pCK。
48.根据权利要求47所述的药学组合物，其特征在于，上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体选自由pCK-IGF-1X6及pCK-IGF-1X10组成的组中。49.根据权利要求46所述的药学组合物，其特征在于，上述质粒载体为pTx。50.根据权利要求49所述的药学组合物，其特征在于，上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体选自由pTx-IGF-1X6及pTx-IGF-1X10组成的组中。51.根据权利要求48或50所述的药学组合物，其特征在于，上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列9的多核苷酸。52.根据权利要求48或50所述的药学组合物，其特征在于，上述胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列10的多核苷酸。53.根据权利要求38至52中任一项所述的药学组合物，其特征在于，上述至少一个人类肝细胞生长因子异构体为序列11的flHGF或序列12的dHGF。54.根据权利要求53所述的药学组合物，其特征在于，上述肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体均能够表达序列11的flHGF及序列12的dHGF。55.根据权利要求54所述的药学组合物，其特征在于，上述肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体包含：序列22的第一肝细胞生长因子多核苷酸(外显子1-4)或其的简并物；序列25的第二肝细胞生长因子多核苷酸(内含子4)或其的功能性片段物；以及序列23的第三肝细胞生长因子多核苷酸(外显子5-18)或其的简并物，上述第二肝细胞生长因子多核苷酸位于上述第一肝细胞生长因子多核苷酸及上述第三肝细胞生长因子多核苷酸之间，上述第一肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体加密两种人类肝细胞生长因子异构体。56.根据权利要求38至55中任一项所述的药学组合物，其特征在于，上述肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列26-32及13中一个序列的多核苷酸。57.根据权利要求56所述的药学组合物，其特征在于，上述肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体包含序列13的多核苷酸。58.一种药学组合物，其特征在于，包含：序列13的多核苷酸；以及序列9的多核苷酸。59.一种药学组合物，其特征在于，包含：序列13的多核苷酸；以及序列10的多核苷酸。60.一种药学组合物，其特征在于，包含：序列13的多核苷酸；以及序列15的多核苷酸或序列17的多核苷酸。61.一种药学组合物，其特征在于，包含：序列13的多核苷酸；序列15的多核苷酸；以及序列17的多核苷酸。62.一种药学组合物，其特征在于，包含序列33的多核苷酸及序列9、序列10、序列15、序
列17或序列39的多核苷酸。63.一种神经病变治疗用试剂盒，其特征在于，上述试剂盒包含：第一药学组合物，包含能够表达至少一个人类胰岛素样生长因子1异构体的胰岛素样生长因子1-加密脱氧核糖核酸构建体以及第一药学上可接受的赋形剂；以及第二药学组合物，包含能够表达至少一个人类肝细胞生长因子异构体的肝细胞生长因子-加密脱氧核糖核酸构建体以及第二药学上可接受的赋形剂。64.根据权利要求63所述的神...

【专利技术属性】
技术研发人员：李政勳，李那妍，高炅良，
申请(专利权)人：赫利世弥斯株式会社，
类型：发明
国别省市：