一种卡贝缩宫素的制备方法技术

本发明专利技术涉及多肽合成技术领域，特别涉及一种卡贝缩宫素的制备方法。该制备方法包括以下步骤：依次将Gly、Leu、Pro、Cys(CH2CH2CH2CO2R1)、Asn(R2)、Gln(R3)、Ile、Tyr(Me)偶联至氨基树脂上，得到Fmoc-全保护肽树脂；脱除Fmoc保护基和R1，将多肽树脂进行缩合，得到环化的卡贝缩宫素肽树脂；裂解，沉淀，得到粗肽；将粗肽进行分离纯化，冷冻干燥。本发明专利技术R1基团可以在温和的条件下脱除，使肽链不会在脱除R1的时候从树脂上脱落。本发明专利技术成功的在树脂上通过形成酰胺键而成环，成环的效率高，速度快，收率高，有利于规模化工业生产。有利于规模化工业生产。

【技术实现步骤摘要】
一种卡贝缩宫素的制备方法


[0001]本专利技术涉及多肽合成
，特别涉及一种卡贝缩宫素的制备方法。

技术介绍

[0002]醋酸卡贝缩宫素(Acatate Carbetocin)，商品名：巧特欣，化学名称：(2S)-N-[(2S)-1-[(2-amino-2-oxoethyl)amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]-1-[(3R,6S,9S,12S,15S)-6-(2-amino-2-oxoethyl)-9-(3-amino-3-oxopropyl)-12-[(2S)-butan-2-yl]-15-[(4-methoxyphenyl)methyl]-5,8,11,14,17-pentaoxo-1-thia-4,7,10,13,16-pe ntazacycloicosane-3-carbonyl]pyrrolidine-2-carboxamide，氨基酸序列为：[Butyry-Tyr(Me)-Ile-Gln-Asn-Cys]-Pro-Leu-Gly-NH2，分子式：C
45
H
69
N
11
O
12
S，分子量：988.16，CAS：37025-55-1，化学结构式：
[0003][0004]卡贝缩宫素(Carbetocin)是一种合成的具有激动剂性质的长效催产素九肽类似物。硬膜外或腰麻下剖腹产术后可以立即单剂量静脉给药，以预防子宫张力不足和产后出血。不论是静脉注射还是肌肉注射卡贝缩宫素后，子宫迅速收缩，可在2分钟内达到一个明确强度。单剂量静脉注射卡贝缩宫素对子宫的活性作用可持续大约1个小时，因此足以预防刚生产后的产后出血。产后给予卡贝缩宫素后，在收缩的频率与幅度方面都比催产素为长。卡贝缩宫素还有很好的安全性，在非妊娠状态下，子宫的催产素受体含量很低，在妊娠期间增加，分娩时达高峰，因此卡贝缩宫素对非妊娠的子宫没有作用，但是对妊娠的子宫和刚生产的子宫具有有效的子宫收缩作用。
[0005]卡贝缩宫素结构与天然缩宫素的结构不同之处是其N-端的环状结构：天然缩宫素是通过两个半胱氨酸的侧链巯基形成二硫键成环，而卡贝缩宫素将N-末端的半胱酸用丁酸替代后与另一个半胱氨酸的侧链巯基形成硫醚键成环，因为硫醚键比二硫键更稳定，不易被酶降解，所以卡贝缩宫素比缩宫素更稳定性，生物活性更强。
[0006]由于卡贝缩宫素的化学结构独特，导致其合成难度大。目前报道的卡贝缩宫素合成方法收率低或采用的试剂昂贵，生产成本高。卡贝缩宫素及其类似物的制备方法早期主要是液相合成法，这些方法的操作复杂，不利于工业生产、应用价值不高。
[0007]欧洲专利ES2115543，该专利公开了固液相结合的合成方法，这个方法主要是：通过常规的固相多肽合成法，采用HOBt/DIC体系得到4-氯丁基-Tyr(OMe)-Ile-Gln-Asn-Cys(Trt)-Pro-Leu-Gly-PAL-Nle-pMBHA，然后用比例为8:1:1(v/v)的三氟乙酸/十二硫醇/H2O裂解2小时，得到线性肽4-氯丁基-Tyr(OMe)-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2，线性肽用1：1(v/v)的乙腈和水作溶剂，用1MNaOH调pH＝9，环化得到卡贝缩宫素。它所用的碱还包括LiOH，NaHCO3，DIEA，DMAP。但是在液相氧化的过程中，分子内的硫醚键形成难度大，分子间的二硫键却极易形成，导致粗品收率极低，不利于工业化生产。
[0008]捷克专利CS8605461，先用固相多肽合成法合成Z-Ile-Gln-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Leu-Gly-O-树脂，然后裂解得到Z-Ile-Gln-Asn-Cys(Bzl)-Pro-Leu-Gly-NH2,再将其氢化，得到Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2，再跟4-溴丁酸反应，得到Ile-Gln-Asn-Cys(C3H6COOH)-Pro-Leu-Gly-NH2，再跟X-Tyr(OMe)-OH反应，脱保护，环化得到卡贝缩宫素。该方法涉及氢化反应脱除Cys侧链的Bzl保护基，需要在高压条件下进行，危险系数高，不利于放大生产。
[0009]中国专利CN200910106889.0公布了一种固相制备卡贝缩宫素的方法，该方案通过固相合成法依次连接具有Fmoc保护基团的氨基酸，得到卡贝缩宫素前体肽-氨基树脂；用三苯基膦钯脱掉半胱氨酸侧链烯丙基保护基，加入有机碱，氯化锂，环化，裂解，纯化、冻干得到精卡贝缩宫素，该方法中脱侧链烯丙基保护基的试剂价格昂贵，不利于大规模生产。
[0010]中国专利CN201110151928.6公布了一种卡贝缩宫素的制备方法，其采用新型的巯基保护氨基酸Fmoc-Cys((CH2)3COOAll)，该方法中脱侧链烯丙基保护基的试剂价格也很昂贵，不利于大规模生产。
[0011]中国专利CN201110001400.0公布了一种多肽合成卡贝缩宫素的制备方法，该方法采用固相合成法合成线性卡贝缩宫素前体肽，然后将其液相环化，该方法中的环化需要在极稀溶剂(10-4-10-5
mol/L)中进行，产生大量废液，同时易产生多聚物，具有环化效率不高，后续处理复杂等缺点。
[0012]中国专利CN102796178A公布了一种卡贝缩宫素的制备方法，该方法采用新型的巯基保护氨基酸Fmoc-Cys((CH2)3COOCH2CH2CN)作为原料，该原料价格昂贵，并且Fmoc-Cys((CH2)3COOCH2CH2CN)保护副反应多，不利于大规模生产。
[0013]中国专利CN 104592362 A公布了一种卡贝缩宫素的合成工艺，将Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Tyr(Me)-OH及四氯丁酸依次Rink Amide-AM Resin偶联反应，直至合成卡贝缩宫素线性肽树脂；裂解后获得的卡贝缩宫素线性粗肽，液相环化成卡贝缩宫素粗品，分离纯化制得卡贝缩宫素。在液相氧化的过程中加入巯基还原剂TCEP
·
HCl，以防止分子间形成二硫键，但是该方法液相氧化的时间较长，易生成杂质，且TCEP
·
HCl价格昂贵，过量投料，成本高昂，不利于规模化生产。
[0014]综合研究以往的专利文献的，可以发现其中有诸多的技术问题，比如卡贝缩宫素固相成环中，使用昂贵的催化剂或脱保护试剂。卡贝缩宫素的液相成环中，容易生成分子间
聚合物，反应体积大，杂质多，后处理复杂等缺点。这些问题都不利于卡贝缩宫素的大规模工业化生产。

技术实现思路

[0015]有鉴于此，本专利技术提供了一种卡贝缩宫素的制备方法。该制备方法成本低廉、步骤精简，收率大且纯度高。
[0016]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0017]本专利技术提供了本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种卡贝缩宫素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用Fmoc固相合成策略，依次将Gly、Leu、Pro、Cys(CH2CH2CH2CO2R1)、Asn(R2)、Gln(R3)、Ile、Tyr(Me)偶联至氨基树脂上，得到Fmoc-全保护肽树脂，即Fmoc-Tyr(Me)-Ile-Gln(R3)-Asn(R2)-Cys(CH2CH2CH2CO2R1)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂；(2)脱除Fmoc-全保护肽树脂的Fmoc保护基和R1，得到H-Tyr(Me)-Ile-Gln(R3)-Asn(R2)-Cys(CH2CH2CH2COOH)-Pro-Leu-Gly-氨基树脂；(3)将步骤(2)所得多肽树脂进行缩合，得到环化的卡贝缩宫素肽树脂；(4)将环化的卡贝缩宫素肽树脂采用切割液进行裂解，再在乙醚或叔丁基甲醚中沉淀，得到卡贝缩宫素粗肽；(5)采用制备型反相高效液相色谱系统将卡贝缩宫素粗肽进行分离纯化，冷冻干燥，获得卡贝缩宫素。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述氨基树脂选自Rink Amide-AM树脂、Sieber Amide树脂、PAL Amide树脂、Knorr树脂、Knorr-2-Chlorotrityl树脂或Rink Amide-MBHA树脂；所述氨基树脂的取代值为0.05～5.0mmol/g，树脂的颗粒大小为5～500目。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述R1为2-...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜绪邦，尹传龙，宓鹏程，陶安进，袁建成，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：