活化剂制造技术

本发明专利技术涉及用于活化Lck的组合物和方法，包括体内、体外和离体用途。体外和离体用途。体外和离体用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】活化剂


[0001]本专利技术涉及Lck(淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶)活性的刺激并且涉及用于防治或治疗各种疾病或病状的Lck活化剂。

技术介绍

[0002]在分子生物学中，CD4(分化簇4)是在免疫细胞(诸如T辅助细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突细胞)的表面发现的一种糖蛋白。CD4+T辅助细胞是白细胞，其是免疫系统的重要部分并且可将信号发送到其它免疫细胞(诸如CD8杀伤细胞)以破坏感染性颗粒。当T细胞受体(TCR)和共受体结合抗原肽：主要组织相容性复合物(MHC)时，T细胞被活化，这会导致TCR复合物聚集并触发细胞内级联反应。在T细胞活化中，共受体CD4和CD8分别与II类或I类MHC分子结合，增加了T细胞对抗原的敏感性。
[0003]Lck是Src家族激酶的成员并且对于T细胞效应子潜能(即，发育中的胸腺细胞和成熟T细胞的增殖和分化以及有效的细胞因子转录)的形成至关重要(Lovatt M等人，Mol&Cell Biology,2006,26(22):8655-8665)。
[0004]Lck对TCR的磷酸化通过创建结合位点来启动下游信号传导，所述结合位点将细胞溶质激酶ZAP70(ζ链相关蛋白激酶70)募集到细胞膜上(Iwashima M等人，Science,1994,263:1136-1139)。更特别地，Lck受C-末端Src激酶(Csk)调节，该C-末端激酶使Tyr 505磷酸化，从而导致Lck失活，通过活性位点重新排列而激活Lck的激酶活性的Lck活化环Tyr 394的反式自体磷酸化，以及通过磷酸酶去磷酸化(Fulop T等人，Longevity&Healthspan,2012,1:6)。
[0005]在TCR刺激后，与CD4/CD8相关的Lck与TCR/CD3复合物接近，并且使CD3分子的基于免疫受体酪氨酸的活化基序(ITAM)磷酸化。然后ZAP70激酶被募集到磷酸化的ITAM上，随后被Lck活化。这导致多个途径的活化，多个途径的活化最终导致T细胞活化和IL-2产生(Wang G等人，BioMed Research International,2014,doi.org/10.1155/2014/682010)。
[0006]另外，树突细胞(DC)介导的Lck活化导致“TCR许可”，这一过程极大地提高了TCR对同源肽-MHC II类抗原复合物的反应的敏感性和幅度(Meraner P等人，2007,J Immunol,178(4):2262-2271)。此类上皮内DETC细胞(树突状表皮T细胞)或γ/δT细胞在体内稳态、组织修复、炎症和防御恶性肿瘤方面起关键作用(Witherden DA和Havran WL,J Leukoc Biol,2013,94(1):69-76)。

技术实现思路

[0007]在一个实施方案中，本专利技术提供了用于活化Lck的肽，其中所述肽包含具有超过6个邻接阳离子氨基酸的Lck活化阳离子氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述阳离子氨基酸序列包含8至10个邻接阳离子氨基酸。
[0008]在另一个实施方案中，所述阳离子氨基酸独立地选自由精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸组成的组。在另一个实施方案中，所述阳离子氨基酸序列选自由RRRRRRRR、rrrrrrrr、
RRRRRRRRR和rrrrrrrrr组成的组。
[0009]在另一个实施方案中，所述肽由所述阳离子氨基酸序列组成。
[0010]在另一个实施方案中，所述肽进一步包含式I的Lck活化多肽部分或其反向序列：
[0011]R/K
’-
x
1-R/K-x
2-R/K-x
3-x
4-x
5-x
6-R/K”式I
[0012]其中：
[0013]每个R/K独立地为精氨酸或赖氨酸氨基酸残基；
[0014]R/K
’
为精氨酸或赖氨酸氨基酸残基并且存在或不存在；
[0015]R/K”为精氨酸或赖氨酸氨基酸残基并且存在或不存在；
[0016]x1至x6各自独立地为氨基酸；并且
[0017]其中氨基酸x3至x6集体地存在或不存在，并且当氨基酸x3至x6不存在时，R/K”不存在。
[0018]在另一个实施方案中，氨基酸x1至x6中的一者或多者为疏水性氨基酸。
[0019]在另一个实施方案中，所述Lck活化多肽部分与所述阳离子氨基酸序列的N-末端或C-末端偶联。
[0020]在另一个实施方案中，所述肽氨基酸序列包含L氨基酸残基。在另一个实施方案中，所述肽氨基酸序列包含D氨基酸残基。
[0021]在另一个实施方案中，所述肽氨基酸序列选自由以下组成的组：RSKAKNPLYRRRRRRRRR、rskaknplyrrrrrrrrr、RVKVKVVVVRRRRRRRRR和rvkvkvvvvrrrrrrrrr、RSKAK-RRRRRRRRR、r r r r r r r rr-ylpnkaksr、IAGQ-RSKAKNPLY-RRRRRRRRR、RSKAKNPLY-RRRRRRRRR-GPLG、RRRRRRRRR-SKAKNPLYR、RRRRRRRRR-YLPNKAKSR、RSKAKNPLY、RRRRRRRRR-HHHHH、RSKAKNPLY-RRRRRRRRR-HHHHHHHHHH、支化的<RSKAKNPLY-RRRRRRRRR-HHHHHHHHHH、RSKAKNPLY-RRRRRRRRR-HHHHHHHHHHHH、HHHHH-RSKAKNPLY-RRRRRRRRR、HHHHH-RRRRRRRRR-HHHHH-RSKAKNPLYR、RRRRRRRR-HHHHHHHHHH-RSKAKNPLYR、HHHHH-RSKAKNPLY-RRRRRRRRR-HHHHH、RSKAKNPLY-RKRKRKRKRK、RVKVKVVVV-RRRRR、RVKVKVVVV-RRRRRRRR、RRRRRRRR-RVKVKVVVV-R、RVKVKVVVV-RRRRRRRRR-HHHHHHHHHH、RVKVKVVVV-RHRHRHRHRHRHRHRH-HH、KEKLKNPLFK-RRRRRRRR-HHHHHHHHHH、RVKVKVVVV-RHRHRHRHRHRHRHRHRH和KEKLKNPLFK-RRRRRRRR-HHHHHHHHHH。在另一个实施方案中，所述肽包含氨基酸序列RSKAKNPLY-RRRRR或RSKAKNPLY-RRRRRR。
[0022]在另一个实施方案中，所述氨基酸序列在所述肽的C-末端被酰胺化。
[0023]在另一个实施方案中，用于活化Lck的肽进一步包含与所述阳离子氨基酸序列的N-末端或C-末端偶联的式II的化合物；
[0024][0025]其中：
[0026]n为所述化合物的单体单元的数目并且是1至5的整数；
[0027]每个m独立地为0至18的整数；并且
[0028]每个R基团独立地为H或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于活化Lck的肽，其中所述肽包含具有超过6个邻接阳离子氨基酸的Lck活化阳离子氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的肽，其中所述阳离子氨基酸序列包含8至10个邻接阳离子氨基酸。3.根据权利要求1或权利要求2所述的肽，其中所述阳离子氨基酸独立地选自由精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸组成的组。4.根据权利要求1所述的肽，其中所述阳离子氨基酸序列选自由RRRRRRRR、rrrrrrrr、RRRRRRRRR和rrrrrrrrr组成的组。5.根据权利要求1至4中任一项所述的肽，其中所述肽由所述阳离子氨基酸序列组成。6.根据权利要求1至4中任一项所述的肽，其中所述肽进一步包含式I的Lck活化多肽部分或其反向序列：R/K
’-
x
1-R/K-x
2-R/K-x
3-x
4-x
5-x
6-R/K
”ꢀꢀꢀ
式I其中：每个R/K独立地为精氨酸或赖氨酸氨基酸残基；R/K
’
为精氨酸或赖氨酸氨基酸残基并且存在或不存在；R/K”为精氨酸或赖氨酸氨基酸残基并且存在或不存在；x1至x6各自独立地为氨基酸；并且其中氨基酸x3至x6集体地存在或不存在，并且当氨基酸x3至x6不存在时，R/K”不存在。7.根据权利要求6所述的肽，其中氨基酸x1至x6中的一者或多者为疏水性氨基酸。8.根据权利要求6或权利要求7所述的肽，其中所述Lck活化多肽部分与所述阳离子氨基酸序列的N-末端或C-末端偶联。9.根据权利要求1至8中任一项所述的肽，其中所述肽氨基酸序列包含L氨基酸残基。10.根据权利要求1至8中任一项所述的肽，其中所述肽氨基酸序列包含D氨基酸残基。11.根据权利要求1至8中任一项所述的肽，其中所述肽氨基酸序列选自由以下组成的组：RSKAKNPLYRRRRRRRRR、rskaknplyrrrrrrrrr、RVKVKVVVVRRRRRRRRR和rvkvkvvvvrrrrrrrrr、RSKAK-RRRRRRRRR、rrrrrrrrr-ylpnkaksr、IAGQ-RSKAKNPLY-RRRRRRRRR、RSKAKNPLY-RRRRRRRRR-GPLG、RRRRRRRRR-SKAKNPLYR、RRRRRRRRR-YLPNKAKSR、RSKAKNPLY、RRRRRRRRR-HHHHH、RSKAKNPLY-RRRRRRRRR-HHHHHHHHHH、支化的<RSKAKNPLY-RRRRRRRRR-HHHHHHHHHH、RSKAKNPLY-RRRRRRRRR-HHHHHHHHHHHH、HHHHH-RSKAKNPLY-RRRRRRRRR、HHHHH-RRRRRRRRR-HHHHH-RSKAKNPLYR、RRRRRRRR-HHHHHHHHHH-RSKAKNPLYR、HHHHH-RSKAKNPLY-RRRRRRRRR-HHHHH、RSKAKNPLY-RKRKRKRKRK、RVKVKVVVV-RRRRR、RVKVKVVVV-RRRRRRRR、RRRRRRRR-RVKVKVVVV-R、RVKVKVVVV-RRRRRRRRR-HHHHHHHHHH、RVKVKVVVV-RHRHRHRHRHRHRHRH-HH、KEKLKNPLFK-RRRRRRRR-HHHHHHHHHH、RVKVKVVVV-RHRHRHRHRHRHRHRHRH和KEKLKNPLFK-RRRRRRRR-HHHHHHHHHH。12.一种用于活化Lck的肽，其中所述肽包含氨基酸序列RSKAKNPLY-RRRRR或RSKAKNPLY-RRRRRR。13.根据权利要求1至12中任一项所述的肽，其中所述氨基酸序列在所述肽的C-末端被酰胺化。14.根据权利要求1至13中任一项所述的肽，所述肽进一步包含与所述阳离子氨基酸序
列的N-末端或C-末端偶联的式II的化合物；其中：n为所述化合物的单体单元的数目并且是1至5的整数；每个m独立地为0至18的整数；并且每个R基团独立地为H或C1至C
18
侧链。15.根据权利要求14所述的肽，其中每个单体单元的R基团独立地为C1至C
18
侧链。16.根据权利要求15所述的肽，其中每个R基团的长度独立地为18-m个碳原子，其中m的值为0至17。17.根据权利要求1至13中任一项所述的肽，所述肽进一步包含与所述阳离子氨基酸序列的N-末端或C-末端偶联的化合物，其中所述化合物为至少一个脂肪酸。18.根据权利要求17所述的肽，其中至少四个脂肪酸与所述阳离子氨基酸序列的C-末端偶联。19.根据权利要求18所述的肽，其中最远端的脂肪酸被酰胺化。20.根据权利要求18或权利要求19所述的肽，其中多于一个脂肪酸的偶联是线性的。21.根据权利要求19所述的肽，其中多于一个脂肪酸的偶联是支化的。22.根据权利要求17至21中任一项所述的肽，其中所述脂肪酸是饱和的。23.根据权利要求17至22中任一项所述的肽，其中所述脂肪酸选自由羊油酸、羊脂酸、羊蜡酸(癸酸)和月桂酸(十二烷酸)组成的组。24.一种包含选自由以下组成的组的氨基酸序列的肽：RSKAKNPLYRRRRRRRRR、rskaknplyrrrrrrrrr、RVKVKVVVVRRRRRRRRR和rvkvkvvvvrrrrrrrrr。25.一种由选自由以下组成的组的氨基酸序列组成的肽：RSKAKNPLYRRRRRRRRR、rskaknplyrrrrrrrrr、RVKVKVVVVRRRRRRRRR和rvkvkvvvvrrrrrrrrr。26.一种药物组合物，所述药物组合物包含作为活性成分的根据权利要求1至25中任一项所述的肽以及药学上可接受的稀释剂或载剂。27.一种增加Lck激酶活性的方法，所述方法包括使Lck激酶与包含根据权利要求1至25中任一项所述的肽的组合物或根据权利要求26所述的药物组合物接触。28.一种增加Lck激酶的Y394磷酸化的方法，所述方法包括使Lck激酶与包含根据权利要求1至25中任一项所述的肽的组合物或根据权利要求26所述的药物组合物接触。29.一种增加细胞或细胞群体的IL-2分泌的方法，所述方法包括使细胞或细胞群体与包含根据权利要求1至25中任一项所述的肽的组合物或根据权利要求26所述的药物组合物接触。20.一种增加细胞上或细胞群体中的IL-2Ra(CD25)表达的方法，所述方法包括使细胞或细胞群体与包含根据权利要求1至25中任一项所述的肽的组合物或根据权利要求26所述的药物组合物接触。
31.一种增加细胞上或细胞群体中的IL-2RB(CD122)表达的方法，所述方法包括使细胞或细胞群体与包含根据权利要求1至25中任一项所述的肽的组合物或根据权利要求26所述的药物组合物接触。32.一种增加细胞的或细胞群体中的IL-2反应性的方法，所述方法包括使细胞或细胞群体与包含根据权利要求1至25中任一项所述的肽的组合物或根据权利要求26所述的药物组合物接触。33.一种增加细胞上或细胞群体中的CD28表达的方法，所述方法包括使细胞或细胞群体与包含根据权利要求1至25中任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：英特肽治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：