一种组合物及其抗菌应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，特别涉及一种组合物及其抗菌应用。该组合物，包括甘露糖、半乳糖和葡萄糖，其中甘露糖、半乳糖和葡萄糖的摩尔比为7:1.7～4.7:1～2或9:2.7:1。本发明专利技术的组合物制备简单，可以直接复配得到，也可以从细菌胞外多糖中提取得到，方法简单，利于大规模生产。本发明专利技术的组合物能够诱导DmPGRP

【技术实现步骤摘要】
一种组合物及其抗菌应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种组合物及其抗菌应用。

技术介绍

[0002]先天免疫响应是后生生物应对微生物侵染的重要防御机制，而起始先天免疫响应的主要生物过程依赖于宿主的模式识别受体对微生物配体的识别。肽聚糖识别蛋白(Peptidoglycan recognition protein，PGRP)是一种重要的模式识别受体，能够识别病原生物表面的病原相关分子识别模式，实现对外来病原体的识别，进而启动先天免疫反应，激活Toll途径、Imd(Immune Deficiency)途径、JAK-STAT等途径来产生抗菌肽以及细胞免疫等途径清除病原物达到免疫的目的。
[0003]肽聚糖是大多数细菌细胞壁的必需成分，是由双糖单位、四肽尾还有肽桥聚合而成的多层网状大分子结构。肽聚糖识别蛋白是高度保守的识别肽聚糖的关键模式识别受体。有研究发现，昆虫中的一些PGRPs具有抗菌作用，例如杨青泰等学者(杨青泰.肽聚糖识别蛋白参与埃及伊蚊的抗细菌免疫反应[D].山西农业大学,2018)发现AaPGRP-LC参与埃及伊蚊的抗细菌免疫反应。这可以为一些特种经济昆虫养殖过程中的疾病防治，提供重要的科学依据，并有望代替抗生素，作为新的抑菌药物。
[0004]目前，还没有胞外多糖、多糖组合物等影响肽聚糖识别蛋白基因表达的相关报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提供了一种组合物及其抗菌应用。
[0006]本专利技术的技术方案如下文所示。
[0007]本专利技术一方面提供了一种组合物，包括甘露糖、半乳糖和葡萄糖，其中甘露糖、半乳糖和葡萄糖的摩尔比为7:1.7～4.7:1～2或9:2.7:1。
[0008]根据本专利技术的一些实施方式，甘露糖、半乳糖和葡萄糖的摩尔比为7:1.7:1、7:2.7:1、7:3.7:1、7:4.7:1、7:2.7:2、7:2.7:1.5、6:2.7:1或9:2.7:1。优选为7:2.7:1。
[0009]根据本专利技术的一些实施方式，所述组合物来源于胞外多糖。
[0010]根据本专利技术的一些实施方式，所述胞外多糖由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成，其中甘露糖、半乳糖和葡萄糖的摩尔比为7:1.7～4.7:1～2或9:2.7:1；优选为7:1.7:1、7:2.7:1、7:3.7:1、7:4.7:1、7:2.7:2、7:2.7:1.5、6:2.7:1或9:2.7:1；更优选为7:2.7:1。
[0011]根据本专利技术的一些实施方式，所述胞外多糖是由肠炎沙门氏杆菌(Salmonella Enteritidis)产生。
[0012]根据本专利技术的一些实施方式，所述胞外多糖的制备方法，包括以下步骤：
[0013]1)将活化后的肠炎沙门氏杆菌在LB液体培养基中培养16～18h，离心，取发酵液；
[0014]2)向步骤1)的发酵液中加入变性剂，混匀后，离心，取上清液；
[0015]3)将步骤2)的上清液浓缩，并加入预冷的醇类溶剂，静置，取沉淀，即为所述胞外
多糖的粗品。
[0016]根据本专利技术的一些实施方式，所述胞外多糖的制备方法，还包括采用阴离子交换柱对步骤3)得到的胞外多糖的粗品进行纯化的步骤；优选的，根据在纯化过程中，取分离峰最高的组分进行浓缩、脱盐和冻干。
[0017]根据本专利技术的一些实施方式，纯化过程中，使用的洗脱液为0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L的NaCl溶液。
[0018]根据本专利技术的一些实施方式，所述阴离子交换柱为DEAE-52纤维素阴离子交换柱。
[0019]根据本专利技术的一些实施方式，所述醇类溶剂为无水乙醇。
[0020]本专利技术的又一方面提供了上述组合物在制备肽聚糖识别蛋白基因表达的诱导剂中的应用。
[0021]本专利技术的又一方面提供了上述组合物在制备抗菌药物、免疫增强剂中的应用。
[0022]根据本专利技术的一些实施方式，所述抗菌药物为抗革兰氏阴性菌药物，更进一步地，所述药物为抗肠炎沙门氏杆菌药物。
[0023]本专利技术人研究发现，肠炎沙门氏杆菌分泌的胞外多糖的主要成分EPS5可以显著诱导果蝇S2细胞DmPGRP-LD的表达，从而激活DmPGRP-LD相关联的免疫反应，最终起到抵御细菌的作用。通过对EPS5成分分析，发现其由甘露糖、半乳糖和葡萄糖以7:2.7:1的比例复合而成，在此基础上，改变甘露糖、半乳糖和葡萄糖的复合比例，发现在一定范围内的配比，也可以诱导DmPGRP-LD的表达。本专利技术虽然是在肠炎沙门氏菌胞外多糖的基础上进行研究的，但配制的不同比例化学品甘露糖、半乳糖和葡萄糖的溶液也能诱导PGRP-LD表达，说明只要是满足本专利技术请求保护的单糖组成和配比范围就可以诱导PGRP-LD的表达。
[0024]在昆虫的先天免疫中，有些肽聚糖识别蛋白能够利用细菌独有的肽聚糖识别入侵细菌，并将细菌入侵信号传递给下游的抗菌肽合成途径，启动抗菌肽基因的转录和合成；本专利技术的组合物能够使肽聚糖识别蛋白基因的表达上调，因此，有望成为提高机体免疫的药物或代替抗生素成为新的抗菌药物。
[0025]本专利技术的组合物制备简单，可以直接复配得到，也可以从细菌胞外多糖中提取得到。方法简单，利于大规模生产。
附图说明
[0026]图1为sgRNA1和sgRNA2敲除PGRP-LD对果蝇DmPGRP-LD蛋白的影响；
[0027]图2为敲除果蝇S2细胞DmPGRP-LD后肠炎沙门氏杆菌的增殖情况图；
[0028]图3为在果蝇S2细胞中过表达DmPGRP-LD后肠炎沙门氏杆菌的增殖情况图；
[0029]图4为肠炎沙门氏杆菌胞外粗多糖的柱层析洗脱结果图；
[0030]图5为肠炎沙门氏杆菌胞外多糖EPS5的气相色谱-质谱联用分析结果图；
[0031]图6为肠炎沙门氏杆菌胞外多糖EPS5的高效凝胶渗透色谱分析结果图；
[0032]图7不同浓度的肠炎沙门氏杆菌胞外多糖EPS5对果蝇S2细胞DmPGRP-LD表达量的影响图；
[0033]图8为不同比例化学品甘露糖、半乳糖和葡萄糖溶液对果蝇S2细胞DmPGRP-LD表达量的影响图。
具体实施方式
[0034]以下结合具体的实施例对本专利技术的技术方案和技术效果做进一步说明和阐释，但本专利技术并不限于这些具体实施方式。实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到的试剂和材料。
[0035]实施例1 DmPGRP-LD基因对肠炎沙门氏杆菌的增殖情况的影响
[0036]1、构建pAc-DmPGRP-LD sgRNA-Cas9质粒
[0037](1)设计2对果蝇DmPGRP-LD的sgRNA，在正向sgRNA的5
’
端加上TTCG之后，将sgRNA引物退火合成双链。sgRNA的引物序本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种组合物，其特征在于，包括甘露糖、半乳糖和葡萄糖，其中甘露糖、半乳糖和葡萄糖的摩尔比为7:1.7～4.7:1～2或9:2.7:1。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，甘露糖、半乳糖和葡萄糖的摩尔比为7:1.7:1、7:2.7:1、7:3.7:1、7:4.7:1、7:2.7:2、7:2.7:1.5、6:2.7:1或9:2.7:1；优选为7:2.7:1。3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物来源于胞外多糖。4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述胞外多糖由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成，其中甘露糖、半乳糖和葡萄糖的摩尔比为7:1.7～4.7:1～2或9:2.7:1；优选为7:1.7:1、7:2.7:1、7:3.7:1、7:4.7:1、7:2.7:2、7:2.7:1.5、6:2.7:1或9:2.7:1；更优选为7:2.7:1。5.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：田铃，李荣松，吴坤钟，邓健浩，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：