一种乳酸残留量的检测方法技术

本申请提供一种乳酸残留量的检测方法，包括：利用无水乙醇提取待测样品中的乳酸，制备待测溶液；使用高效液相色谱对待测溶液进行检测；基于检测结果计算所述待测样品中乳酸的残留量。本申请的方法中的色谱柱的柱效高，耐用性好，且流动相中不需要添加有机相，能够有效地检测透明质酸中的乳酸残留。地检测透明质酸中的乳酸残留。

【技术实现步骤摘要】
一种乳酸残留量的检测方法


[0001]本申请涉及透明质酸的检测领域，且更为具体地涉及一种乳酸残留的检测方法。

技术介绍

[0002]透明质酸(Hyaluronic acid，简称HA)又名玻璃酸，是由(1-3)-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖(1-4)-D-葡萄醛酸双糖重复单位所组成的高分子量的直链粘多糖。1934年由Meyer等人从牛玻璃球眼中首次提取获得。透明质酸以其独特的分子结构和理化性质在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。尤为重要的是，透明质酸具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子，由于HA具有良好的保湿性、粘弹性、渗透性和延展性，同时无任何免疫原性和毒性，被广泛应用于化妆品、食品、医药和临床治疗等行业领域。
[0003]HA最初是从鸡冠、眼球等动物组织中提取的，由于这些原料来源有限，且成本高，用提取法生产已不能满足日益增加的HA在医药和化妆品生产方面的需要。为了扩大生产规模，降低生产成本，发酵法生产HA的工艺迅速发展起来。HA发酵使用的菌种为链球菌，其在发酵过程中产生小分子有机酸的总量远大于HA。在现有生产工艺条件下，发酵液中HA的产量达到6～10g/L，而乳酸的含量则为30～40g/L。发酵结束后，一般使用乙醇将HA沉淀并进一步纯化，乳酸做为发酵液中含量最高的有机酸，对成品HA中的乳酸残留量进行检测可反映纯化工艺效果及产品杂质控制程度。
[0004]目前，小分子有机酸的检测分析一般采用RP-C18色谱柱，流动相以pH为2～3的甲醇/乙腈-稀酸溶液为主，色谱填料长期在低pH环境下使用易造成键合相的水解，导致柱效不断下降。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本申请的申请人在日常分析工作中偶然发现一种阳离子交换色谱柱，在较高柱温下对乳酸的分析效果好，柱效高，且耐用性强，流动相中不需要添加有机相，由此建立了上述方法，用于透明质酸相关产品中乳酸残留的检测。
[0006]为了解决上述技术问题，本申请专利采用的技术方案是：
[0007]1、一种乳酸残留量的检测方法，其特征在于，包括：
[0008]利用无水乙醇提取待测样品中的乳酸，制备待测溶液；
[0009]使用高效液相色谱对待测溶液进行检测；
[0010]基于检测结果计算所述待测样品中乳酸的残留量。
[0011]2、根据项1所述的方法，其特征在于，所述待测样品中包含有透明质酸。
[0012]3、根据项1所述的方法，其特征在于，所述待测溶液的制备中，向每10g所述待测样品中加入40～100ml的所述无水乙醇。
[0013]4、根据项1所述的方法，其特征在于，所述待测溶液的制备中，将所述待测样品加
入到所述无水乙醇中，混合均匀，形成混合溶液，然后将混合溶液密封，并进行超声处理，之后将混合溶液转移到容量瓶中，并用无水乙醇定容，然后取上清液挥干，得到固体混合物，之后用弱酸溶液溶解所述固体混合物，并定容，然后过滤，得到的滤液为待测溶液。
[0014]5、根据项4所述的方法，其特征在于，所述超声处理时间为15～40min。
[0015]6、根据项4所述的方法，其特征在于，所述弱酸溶液为磷酸溶液，所述磷酸溶液的浓度为0.5wt％～1.2wt％。
[0016]7、根据项1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的色谱柱为阳离子交换色谱柱。
[0017]8、根据项7所述的方法，其特征在于，所述阳离子交换色谱柱为磺化交联的苯乙烯二乙烯基苯共聚物为填充剂的强阳离子H
+
型交换色谱柱。
[0018]9、根据项7-8任一项所述的方法，其特征在于，所述阳离子交换色谱柱为MCI GEL CK08EH色谱柱。
[0019]10、根据项1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的流动相为弱酸溶液。
[0020]11、根据项10所述的方法，其特征在于，所述流动相为磷酸溶液，所述磷酸溶液的浓度为0.5wt％～1.2wt％，优选为0.8wt％～1.0wt％。
[0021]12、根据项10-11中任一项所述的方法，其中，所述流动相的流速为0.3～1.0ml/min，优选为0.4～0.8ml/min。
[0022]13、根据项1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱中使用的色谱柱的柱温为70℃～95℃，优选为75℃～90℃。
[0023]14、根据项1所述的方法，其特征在于，在高效液相色谱中的检测波长为190～220nm，进样量为5～100μL。
[0024]15、根据项1～14中任一项所述的方法，使用外标法来计算所述待测样品中的乳酸的残留量。
[0025]16、根据项1～15中任一项所述的方法，其特征在于，所述乳酸残留量的检测限为5～8ppm。
[0026]本申请使用无水乙醇对待测样品进行预处理，并结合液相色谱分离技术得到杂质残留量，方法灵敏度高。因采用阳离子交换色谱柱做为分析柱，在较高柱温下对乳酸的分析效果好，柱效高，且耐用性强，流动相仅采用稀酸溶液，不需要使用一定比例的有机相如甲醇乙腈等，可以增加色谱柱的使用寿命，且实验过程安全性更高。运用该色谱条件，所得检测物峰形较好，能提高乳酸的检测灵敏度，可以对极低含量的乳酸含量进行检测。
附图说明
[0027]图1为实施例1的液相色谱图。
[0028]图2为对比例1的液相色谱图。
具体实施方式
[0029]在本说明书的上下文中，色谱法(chromatography)又称“色谱分析”、“色谱分析法”、“层析法”，是一种分离和分析方法，在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着非常广泛的应用。色谱法利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合
物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。
[0030]高效液相色谱法(HPLC)是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的。现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化操作。经典的液相色谱法，流动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9
×
107Pa)；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万)；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。
[0031]无水乙醇为无色澄清液体，有特殊香味，易流动，极易从空气中吸收水分，能与水和氯仿、乙醚等多种有机溶剂以任意比例互溶。能与水形成共沸混合物(含水4.43％)，共沸点78.15℃，熔点-114.1℃，沸点7本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳酸残留量的检测方法，其特征在于，包括：利用无水乙醇提取待测样品中的乳酸，制备待测溶液；使用高效液相色谱对待测溶液进行检测；基于检测结果计算所述待测样品中乳酸的残留量。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品中包含有透明质酸。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测溶液的制备中，向每10g所述待测样品中加入40～100ml的所述无水乙醇。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测溶液的制备中，将所述待测样品加入到所述无水乙醇中，混合均匀，形成混合溶液，然后将混合溶液密封，并进行超声处理，之后将混合溶液转移到容量瓶中，并用无水乙醇定容，然后取上清液挥干，得到固体混合物，之后用弱酸溶液溶解所述固体混合物，并定容，然后过滤...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉娟，陈雯雯，万金玉，邵萌，栾贻宏，郭学平，
申请(专利权)人：山东华熙海御生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：