一种沙棘枝条中5-羟色胺的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种沙棘枝条中5

【技术实现步骤摘要】
一种沙棘枝条中5-羟色胺的检测方法


[0001]本专利技术涉及沙棘枝条中5-羟色胺检测技术方法的领域，具体涉及一种利用柱前衍生化特征离子定量气相色谱质谱联用技术检测沙棘枝条中5-羟色胺的方法。

技术介绍

[0002]5-羟色胺(5-HT)，又名血清素(serotonin)，是一种单胺类神经递质，由色氨酸合成，并且是体内合成褪黑素的前体物质。其分子式为C
10
H
12
N2O。5-HT可与酸作用生成结晶盐，其盐酸盐熔点167-168℃；苦味酸盐熔点185-189℃。5-HT在动物体内存在于中枢和外周神经系统中，其中肠嗜铬细胞合成和储存的5-HT占体内总量的90％，仅有5％在中枢系统分泌。同时也有报道称，5-HT在20科42种植物中存在，主要在果实、种子和营养器官中积累。
[0003]5-羟色胺参与人体内许多生理活动的调节，如情绪行为、睡眠、血压、体温、摄食和肠道功能等方面调节，同时，也有助于造血、免疫调节和胚胎发育，这些功能的实现发现与体内不同类型的5-HT受体有关。5-HT也参与植物中许多生理变化的调控，如植物开花、形态建成、保护和适应环境变化。
[0004]沙棘作为药食同源植物，于1977年被列入《中国药典》。沙棘以其独特的生物学、生态学等特征，受到人们的广泛关注。沙棘除具有水土保持、减少泥沙和绿化沙漠的生态学价值外，其果实、叶片等含有丰富的维生素、多糖、甾醇、类胡萝卜素、酚类化合物以及脂肪酸等生物活性成分。但沙棘的相关产品和研究多集中于沙棘果实，沙棘叶片和枝条则通常作为废料被处理，造成资源浪费。近年来有研究表明，沙棘中含有单胺类神经递质——5-羟色胺。
[0005]目前，对沙棘枝条中5-羟色胺的研究主要集中在提取条件的优化，对于沙棘枝条中5-羟色胺的检测技术方法研究鲜有报道。且在开发利用沙棘枝条中5-羟色胺之前，需要对目标成分进行检测。因此，开发一种具有高灵敏度、准确定量、快速检测的测试方法，在有效提高工作效率和对沙棘枝条的综合利用和深度开发等方面有指导意义。本专利技术利用柱前衍生化特征离子定量气相色谱质谱联用技术检测沙棘枝条中的5-羟色胺，具有高灵敏度、定量准确、检测速度快等优点，并且相较于常用的液相色谱质谱联用技术成本更为低廉，更适合应用于实际中。

技术实现思路

[0006]本专利技术旨在提供一种沙棘枝条中5-羟色胺的检测方法，能够快速检测、准确定量，用于解决上述技术问题。
[0007]本专利技术是通过如下技术方案实现的：一种沙棘枝条中5-羟色胺的检测方法，其特征在于，以沙棘枝条为原料，采用超声提取法提取沙棘枝条中5-羟色胺并初步纯化后，对样品进行硅烷化处理，利用全扫描模式下特征离子定量气相色谱质谱联用技术(GC-MS)进行测定。
[0008]本专利技术中，优选的，采用Rtx-5MS(0.25mmx30mx0.25μm)毛细管色谱柱进行检测；载
气为高纯氦气，流速为0.8mL/min，分流比为25:1，进样口温度为280℃；质谱接口温度为280℃，电离方式为电子轰击源(EI)，离子能量70eV，离子源温度200℃。
[0009]本专利技术中，优选的，GC-MS的升温程序：初温180℃，保持2min，以每分钟6℃升到200℃，保持6min，以每分钟25℃升到280℃，保持16min。监测方式选取全扫描模式(Full Scan)，质核比33-500，通过选择离子定量，5-羟色胺硅烷化物质用于定量的特征离子为m/z248。
[0010]本专利技术中，优选的，采用外标法，分别吸取5-羟色胺标准品溶液和样品注入气相色谱质谱联用仪，以峰面积计算相应样品中5-羟色胺的含量。
[0011]本专利技术中，优选的，所述样品的提取制备步骤如下：
[0012](1)将沙棘枝条烘干粉碎后，加入乙醇水溶液室温放置一段时间，使沙棘枝条粉充分浸泡；
[0013](2)将沙棘枝条粉溶液超声提取，得到超声提取物后过滤，得到沙棘枝条提取液；
[0014](3)将沙棘枝条提取液进行减压浓缩，加入乙酸乙酯和蒸馏水进行萃取，得到沙棘枝条萃取液；
[0015](4)将沙棘枝条萃取液减压浓缩，得到沙棘枝条提取物；
[0016](5)向沙棘枝条提取物加入吡啶溶解，再加入硅烷化试剂进行衍生化处理后，离心，取上清液，得到最终沙棘枝条样品；
[0017]本专利技术中，优选的，
[0018]步骤(1)中，所述沙棘枝条与乙醇水溶液体积比值为1:100-1:200，所述沙棘枝条质量单位为克，所述乙醇水溶液体积分数为70-90％，所述室温放置一段时间为8-12小时。
[0019]步骤(2)中超声提取次数为两次。
[0020]步骤(3)、(4)中所述减压浓缩的条件为40-45℃，0.05MPa～0.1MPa。
[0021]步骤(5)中所述硅烷试剂为六甲基二硅胺烷和三甲基氯硅烷；衍生化具体为：加入1mL吡啶溶解沙棘枝条提取物，超声5min使其溶解，置于冰水浴中，依次加入0.4mL六甲基二硅胺烷、0.2mL三甲基氯硅烷(总体积1.6mL)，20℃静置30min；离心具体操作为8000rpm离心10min，取上清液用于GC-MS分析。
[0022]本专利技术的有益效果是
[0023]第一，具有高灵敏度，检测准确，样品无需经过树脂纯化，即可检测到样品中含有的5-羟色胺，不受其他物质干扰，达到了高灵敏度、检测准确的目的。
[0024]第二，定量准确，采用的监测方式为全扫描模式，通过5-羟色胺硅烷化物质的特征离子m/z248进行定量，不受其他物质的干扰，达到了定量准确的目的。
[0025]第三，成本低廉，在保证较高的灵敏度和定量准确的前提下，利用气相色谱质谱联用技术进行检测的成本远低于利用液相色谱质谱联用技术进行检测，成本更低廉。
附图说明
[0026]图1为本专利技术的含量测定流程图。
[0027]图2为5-羟色胺标准品经硅烷化处理后在特征离子m/z248定量下的质量色谱图。
[0028]图3为沙棘枝条样品经硅烷化处理后在特征离子m/z248定量下的质量色谱图。
[0029]图4为5-羟色胺标准曲线。
具体实施方式
[0030]以下结合附图和具体实施方式，对本专利技术沙棘枝条中5-羟色胺的检测方法进一步说明，但本专利技术的保护范围不仅限于所述内容。
[0031]实施例：
[0032]本实施例所述沙棘枝条中5-羟色胺的提取方法，具体包括以下步骤：
[0033](1)准确称取0.5克烘干后的沙棘枝条，粉碎后置于三角瓶中，分2次加入70-90％乙醇水溶液是料液比在1:100-1:200，在60℃下超声60min，抽滤，取上清液。在制备过程中，保持处于黑暗或者避光条件下。将收集到的提取液在4℃下保存用于后续的含量测定。
[0034](2)在40℃下使用旋转浓缩仪将提取液浓缩至1mL。向浓溶液中加入蒸馏水和乙酸乙酯，萃取15min。使用旋转浓缩仪在40℃的条件本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种沙棘枝条中5-羟色胺的检测方法，其特征在于，以沙棘枝条为原料，采用超声提取法提取沙棘枝条中5-羟色胺并初步纯化后，对样品进行硅烷化处理，利用全扫描模式下特征离子定量气相色谱质谱联用技术(GC-MS)进行测定。2.根据权利要求1所述的一种沙棘枝条中5-羟色胺的检测方法，其特征在于，采用Rtx-5MS(0.25mmx30mx0.25μm)毛细管色谱柱进行检测；载气为高纯氦气，流速为0.8mL/min，分流比为25:1，进样口温度为280℃；质谱接口温度为280℃，电离方式为电子轰击源(EI)，离子能量70eV，离子源温度200℃。3.根据权利要求1所述的一种沙棘枝条中5-羟色胺的检测方法，其特征在于，GC-MS的升温程序：初温180℃，保持2min，以每分钟6℃升到200℃，保持6min，以每分钟25℃升到280℃，保持16min；监测方式选取全扫描模式(Full Scan)，质核比33-500，通过选择离子定量，5-羟色胺硅烷化物质用于定量的特征离子为m/z248。4.根据权利要求1所述的一种沙棘枝条中5-羟色胺的检测方法，其特征在于，采用外标法，分别吸取5-羟色胺标准品溶液和样品注入气相色谱质谱联用仪，以峰面积计算相应样品中5-羟色胺的含量。5.根据权利要求1所述的一种沙棘枝条中5-羟色胺的检测方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕兆林，孟德豪，袁玮琼，牟一晗，颜子曦，李永慧，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：