玉树无钩蝠蛾的实时荧光PCR检测方法及检测试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种冬虫夏草寄主昆虫玉树无钩蝠蛾的实时荧光PCR检测方法及检测试剂盒，根据玉树无钩蝠蛾的mtDNA中部分基因的序列设计特异性引物YSF3/YSR3和探针YS

【技术实现步骤摘要】
玉树无钩蝠蛾的实时荧光PCR检测方法及检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及中药材和植物检疫
，具体涉及一种玉树无钩蝠蛾的实时荧光PCR检测方法；此外，本专利技术还涉及用于实时荧光PCR检测玉树无钩蝠蛾的试剂盒。

技术介绍

[0002]玉树无钩蝠蛾Ahamus yushuensis（Chu et Wang，1985），隶属于鳞翅目（Lepidoptera）蝙蝠蛾科（Hepialidae）无钩蝠蛾属（Ahamus），是冬虫夏草寄主昆虫，冬虫夏草是我国传统的名贵中药材，被收录入我国药典，被称为“中药三宝”之一，在我国仅在青藏高原的西藏、青海、四川、云南、甘肃五省部分地区有分布。同时，冬虫夏草寄主昆虫具有明显的种类地域分布特征，通常一个产区的冬虫夏草寄主昆虫为一种昆虫，仅有少数优势种类在多个冬虫夏草产区有分布。在中药材领域，不同地区的冬虫夏草品级相差较大，玉树无钩蝠蛾是冬虫夏草寄主昆虫的优势种，真菌寄生在玉树无钩蝠蛾上而产的冬虫夏草质量较好，该虫在四川甘孜州康定县、青海玉树州有分布。因此，区分冬虫夏草的寄主昆虫，能有效的区分冬虫夏草的品级，因此本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种玉树无钩蝠蛾的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1) 设计引物和探针；该引物的序列为：上游引物YSF3为如SEQ ID NO：7 所示序列：5
’-ꢀ
GTTGCAAGAATTGCATCAAATG
ꢀ-3’
；下游引物YSR3为如SEQ ID NO：8 所示序列：5
’-ꢀ
AGATCGTAAAGGCCCATAATTG
ꢀ-3’
；该探针的序列为：玉树无钩蝠蛾探针YS-P3为如SEQ ID NO：9 所示序列：5
’-ꢀ
AAATTTATAATAGCCAAAGCTATT
ꢀ-3’ꢀ
，荧光基团连接在探针的5
’
末端，淬灭基团连接在3
’
末端；(2) 提取玉树无钩蝠蛾DNA；(3) 采用步骤（1）设计的引物和探针进行实时荧光PCR检测，用以区分玉树无钩蝠蛾和其它冬虫夏草寄主昆虫。2.如权利要求1所述的玉树无钩蝠蛾的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤（2）具体为：取玉树无钩蝠蛾虫及虫草样放入研钵，加液氮磨成粉末状，用试剂盒提取样品DNA。3.如权利要求1所述的玉树无钩蝠蛾的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤（3）中，所述实时荧光PCR检测的反应体系为25μL，包括2
×
Premix Ex Taq12.5μL，50
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ROX Reference Dye0.5μL，步骤（1）设计的上下游引物YSF3和YSR3各1.0μL，浓度为5μmol/L，YS-P3探针1.0μL，浓度为5μmol/L，DNA模板2.0μL，超纯水补至25μL。4.如权利要求1或3所述的玉树无钩蝠蛾的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，步骤（...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘静远，印丽萍，张宁，易建平，
申请(专利权)人：上海海关动植物与食品检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：