一种探针引物组合及其检测试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种探针引物组合及其检测试剂盒，探针引物组合包括可与靶核苷酸序列杂交的探针寡核苷酸、用于扩增包含靶核苷酸序列的核酸区域的第一引物寡核苷酸、第二引物寡核苷酸，所述探针寡核苷酸连接有第一标记分子，所述第一引物寡核苷酸或所述第二引物寡核苷酸连接有第二标记分子，所述探针寡核苷酸互补于所述靶核苷酸序列的一条单链，连接有所述第二标记分子的引物寡核苷酸互补于所述靶核苷酸序列的另一条单链，所述第一标记分子、第二标记分子提供不同的可检测信号，所述第一标记分子、第二标记分子靠近时发生荧光能量共振转移。本发明专利技术设计的单标记探针，不会因构象变化产生非特异的荧光信号，背景更低。背景更低。背景更低。

【技术实现步骤摘要】
一种探针引物组合及其检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及核酸检测
，具体涉及一种探针引物组合及其检测试剂盒。

技术介绍

[0002]实时荧光PCR技术已广泛应用于检测和定量靶核酸序列。目前最常用的是TaqMan探针技术。在荧光PCR方法应用的诸多领域中，DNA基因分型检测是目前发展较快的一个重要领域。基因分型检测包含了基因型多态性和稀有突变检测，如病理样本的基因突变检测、遗传相关疾病的基因突变检测以及病毒基因分型检测等等。目前应用于基因分型检测的荧光PCR技术主要有以下几种：1、荧光探针分型检测。该方法针对不同的基因型设计不同的荧光标记探针，如TaqMan探针、分子信标等。2、熔解曲线分析法。此类方法通过探针与扩增产物的杂交温度差异来区分不同的基因型。例如邻近杂交探针，以及基于双标记TaqMan探针或分子信标的熔解曲线分析方法。
[0003]然而，这些方法均有一定的局限性。TaqMan探针或分子信标的熔解曲线分析方法的应用较为广泛，而且，TaqMan探针在杂交状态和游离状态下的信号差异较小，尤其是当探针长度较长时，这种信号差异更本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种探针引物组合，其特征在于，包括可与靶核苷酸序列杂交的探针寡核苷酸、用于扩增包含靶核苷酸序列的核酸区域的第一引物寡核苷酸、第二引物寡核苷酸，所述探针寡核苷酸连接有第一标记分子，所述第一引物寡核苷酸或所述第二引物寡核苷酸连接有第二标记分子，所述探针寡核苷酸互补于所述靶核苷酸序列的一条单链，连接有所述第二标记分子的引物寡核苷酸互补于所述靶核苷酸序列的另一条单链，所述第一标记分子、第二标记分子提供不同的可检测信号，所述第一标记分子、第二标记分子物理靠近时发生荧光能量共振转移。2.如权利要求1所述的探针引物组合，其特征在于，所述第一标记分子连接至所述探针寡核苷酸的3
’
端；任选地，所述第二标记分子所连接的碱基靠近该碱基所在的引物寡核苷酸的3
’
端；任选地，所述第二标记分子所连接的碱基距离其所在引物寡核苷酸的3
’
端8个碱基以内；任选地，所述第二标记分子所连接的碱基为A、T、C、G碱基中的任一种。3.如权利要求1所述的探针引物组合，其特征在于，所述探针寡核苷酸的序列长度为40nt以内，优选为15-30nt；任选地，所述探针寡核苷酸的Tm值为55℃-90℃，优选为60℃-80℃；任选地，所述第一引物寡核苷酸、第二引物寡核苷酸的序列长度均为30nt以内，优选为20-25nt。4.如权利要求1所述的探针引物组合，其特征在于，所述靶核苷酸序列为单链核苷酸、双链核苷酸中的至少一种；任选地，所述靶核苷酸序列为DNA序列、RNA序列中的至少一种；任选地，所述靶核苷酸序列为单链核苷酸时，连接有所述第二标记分子的引物寡核苷酸互补于所述靶核苷酸序列的互补序列。5.如权利要求1所述的探针引物组合，其特征在于，所述第一标记分子为荧光报告基团，所述第二标记分子为荧光淬灭基团，或，所述第一标记分子为荧光淬灭基团，所述第二标记分子为荧光报告基团；任选地，当连接有所述第一标记分子的所述探针寡核苷酸杂交于连接有所述第二标记分子的扩增产物，且所述探针寡核苷酸的3
’
段连接有第一标记分子时，所述探针寡核苷酸的杂交位置的3
’

【专利技术属性】
技术研发人员：翟建新，刘春森，丁宁，张利，
申请(专利权)人：深圳澳东检验检测科技有限公司，
类型：发明
国别省市：