化合物myrothecineH和I及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了化合物myrothecine H和I及其制备方法和应用。本发明专利技术从广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697的液体发酵培养物中分离出具有抗肿瘤活性的myrothecine H和I，分别如式(I)和式(II)所示。myrothecine H和I为单端孢霉烯类新化合物，对肝癌细胞HepG

【技术实现步骤摘要】
化合物myrothecine H和I及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于医药生物
，具体涉及化合物myrothecine H和I及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]癌症是目前危害人类健康的主要疾病之一。国际抗癌联盟发布的数据表明，2008年，全球有1270万人患癌，死亡人数高达760万。世界范围内因癌症死亡的人数，比艾滋病、疟疾和结核病加起来还要多。如果不采取有效的措施，预计到2030年，每年将出现2600万新增癌症病例，癌症死亡人数将达1700万。我国癌症发生率正处于快速上升时期，每年癌症发病人数约260万，死亡180万。癌症已成为中国城市和农村居民的第一死因，癌症带来的经济负担和对社会发展的不良影响也日益突显。在癌症的三大疗法中，药物治疗占有主要位置。
[0003]植物内生真菌(endophytic fungi)是指生活史的一定阶段或全部阶段生活在健康植物组织内，但不对植物组织引起明显病害症状的真菌(Tan RX and Zou WX,2001)。内生真菌物种丰富多样，它们处于植物内部的特殊环境中，能够产生各种结构的次生代谢产物，其化合物的结构类型远远超出其植物代谢产物的范围，容易从中发现新颖结构的化合物，并且具有多种生物活性，因此内生真菌已成为发现新天然活性物质的重要资源，在农业和医药工业中具有重要的应用潜力(施琦渊等，2007)。
[0004]广藿香(Pogostemon cablin)为唇形科刺蕊草属植物，是多年生草本，全草药用，是临床上常用的芳香化湿中药。广藿香的梗、或叶供药用，主用于妊娠呕吐、胃气痛及预防流感，为芳香健胃、解热、镇吐剂。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是针对现有技术的不足，提供广藿香内生真菌发现的具有抗肿瘤活性作用的新化合物myrothecine H和I及其制备方法和应用。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供式(I)所示的化合物myrothecine H和式(II)所示的化合物 myrothecine I，
[0007][0008]本专利技术的第二个目的是提供化合物myrothecine H和myrothecine I的制备方法，是从广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697的发酵培养物中分离制备得到的。
[0009]优选，所述的制备方法，包括以下步骤：
[0010]a.制备广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697的发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后得浸膏；
[0011]b、浸膏经C
18
反相柱层析，用甲醇-水作为洗脱剂，从体积比60:40至100:0梯度洗脱，收集甲醇-水体积比为70:30洗脱下来的馏分Fr3，Fr3经凝胶柱层析Sephadex LH-20，以氯仿
ꢀ-
甲醇体积比1:3作为洗脱剂洗脱，收集流份，然后用TLC薄层层析进行合并，收集TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝1:1v/v展开得Rf＝0.3-0.5的组分Fr3.3，组分Fr3.3再经硅胶柱层析，用正己烷-乙酸乙酯做洗脱剂，从体积比5:1，2:1，1:1，1:2，1:3进行梯度洗脱，收集流份，然后用TLC薄层层析进行合并，收集经TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝1:1v/v展开得Rf＝0.4-0.5的组分Fr3.1.1，组分Fr3.1.1经进一步的半制备HPLC，获得化合物myrothecineH和myrothecine I。
[0012]优选，所述的组分Fr3.1.1经进一步的半制备HPLC，获得化合物myrothecine H和 myrothecine I是使用YMCpack ODS-A/AQ柱，流动相为体积比50:50的乙腈/水，流速为3 mL/min，得到化合物myrothecine H，t
R 12.6min和myrothecine I，t
R 13.4min。
[0013]优选，所述的步骤a的制备广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697的发酵培养物，包括以下步骤：挑取广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697的菌丝接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，在28℃、120r/min条件下培养5天，制得种子液；然后将种子液按 10％的接种量接种于马铃薯葡萄糖液体培养基中，28℃、120r/min条件下培养7天，制得 Paramyrothecium roridum A697的发酵培养物；所述的马铃薯葡萄糖液体培养基，每升是通过以下方法配制的：用500mL的纯水煮200g的马铃薯，煮沸20min，过滤得马铃薯汁；再加入葡萄糖20g、KH2PO
4 3g、MgSO
4 1.5g、维生素B1 10mg，用水补足至1000mL。
[0014]本专利技术的第三个目的是提供所述的化合物myrothecine H和/或myrothecine I，或其药用盐在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0015]优选，所述的抗肿瘤药物为抗肝癌、乳腺癌、神经胶质瘤或大细胞肺癌的药物。本专利技术的第四个目的是提供一种抗肿瘤药物，其包含有效量的作为活性成分的所述的化合物 myrothecine H和/或myrothecine I，或其药用盐，和药学上可接受的载体。
[0016]优选，所述的抗肿瘤药物为抗肝癌、乳腺癌、神经胶质瘤或大细胞肺癌的药物。
[0017]本专利技术还提供广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697在制备化合物myrothecineH和myrothecine I中的应用。
[0018]本专利技术通过实验发现，化合物myrothecine H和I对肝癌细胞HepG-2、乳腺癌细胞MCF-7、神经胶质瘤细胞SF-268和大细胞肺癌细胞NCI-H460的IC
50
值范围为0.09～9.72μM，阳性对照物顺铂对上述四种肿瘤细胞株的IC
50
值分别为2.65、3.02、3.25和2.31μM。此结果表明：本专利技术的化合物myrothecine H和I具有比较显著的抗肿瘤活性。
[0019]本专利技术从广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697中制备分离得到化合物 myrothecine H和I，该化合物myrothecine H和I具有抗肿瘤活性，可以用于制备抗肿瘤药物，为研究与开发新的抗肿瘤药物提供了候选化合物，为开发利用药用植物内生真菌的天然活性物质提供了科学依据。
[0020]本专利技术的广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697还于2016年7月25日公开于非专利文献中(网页)，其网址为：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/KU529828.1，该菌种申请人本人也持有，并保证自申请日起20年内向公众提供。
附图说明
[0021]图1是化合物1(my本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.式(I)所示的化合物myrothecine H或式(II)所示的化合物myrothecine I，2.一种化合物myrothecine H和myrothecine I的制备方法，其特征在于，是从广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697的发酵培养物中分离制备得到的。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：a.制备广藿香内生真菌Paramyrothecium roridum A697的发酵培养物，分离菌丝体和发酵液，发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经浓缩后得浸膏；b.浸膏经C
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反相柱层析，用甲醇-水作为洗脱剂，从体积比60:40至100:0梯度洗脱，收集甲醇-水体积比为70:30洗脱下来的馏分Fr3，Fr3经凝胶柱层析Sephadex LH-20，以氯仿-甲醇体积比1:3作为洗脱剂洗脱，收集流份，然后用TLC薄层层析进行合并，收集TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝1:1v/v展开得Rf＝0.3-0.5的组分Fr3.3，组分Fr3.3再经硅胶柱层析，用正己烷-乙酸乙酯做洗脱剂，从体积比5:1，2:1，1:1，1:2，1:3进行梯度洗脱，收集流份，然后用TLC薄层层析进行合并，收集经TLC薄层层析以正己烷:乙酸乙酯＝1:1v/v展开得Rf＝0.4-0.5的组分Fr3.1.1，组分Fr3.1.1经进一步的半制备HPLC，获得化合物myrothecine H和myrothecine I。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的组分Fr3.1.1经进一步的半制备HPLC，获得化合物myrothecine H和myrothecine I是使用YMCpack ODS-A/AQ柱，流动相为体积比50:50的乙腈/水，流速为3mL/min，得到化合物myrothecin...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘洪新，陈玉婵，章卫民，李赛妮，钟晋谦，刘昭明，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：