新型血管生成素2，VEGF双特异性拮抗剂制造技术

本发明专利技术涉及包含两种组分的融合分子和嵌合分子：与VEGF结合部分连接的Ang

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型血管生成素2，VEGF双特异性拮抗剂
交叉引用的申请
[0001]本申请要求2016年5月13日提交的美国临时申请号62/336,552、2017年2月14提交的美国临时申请号62/459,046和2017年1月21日提交的美国临时申请号62/448,998的权益，其每一篇通过引用整体并入本文。本申请还要求于2017年5月11日提交的美国专利申请US20170327569A1的优先权，其全部内容通过引用合并在内。本申请进一步要求于2018年4月10日提交的美国专利申请62/655,436的优先权，其全部内容通过引用合并在内。

技术介绍

[0002]本申请涉及包含与VEGF和Ang2两者结合的结构域的新型分子。
[0003]血管生成与多种疾病的发病机理有关，包括实体瘤，眼内新血管综合征(例如增生性视网膜病或年龄相关性黄斑变性(AMD)，类风湿性关节炎和牛皮癣)(Folkman，J.等，J.Biol.Chem.267(1992)10931-10934；Klagsbrun，M.等，Annu.Rev.Physiol.53(1991)217-239；和Garner，A.，血管疾病，参见：《眼病病理生物学，一种动态方法》，Garner，A.和Klintworth，G.K.(编辑)，第二版，Marcel Dekker，纽约(1994)，页码1625-1710)。在实体瘤的情况下，与正常细胞相比，新血管形成可使肿瘤细胞获得生长优势和增殖自主性。因此，已经观察到肿瘤切片中的微血管密度与多种癌症患者的存活率之间存在相关性(参见，例如，Weidner，N.等，N Engl J Med.324(1991)1-8；Horak，E.R.等，Lancet 340(1992)1120-1124；和Macchiarini，P.等，Lancet 340(1992)145-146)。
[0004]人血管内皮生长因子(VEGF/VEGF-A)描述于，例如，Leung，D.W.等，Science 246(1989)1306-9；Keck，P.J.等，Science 246(1989)1309-12和Connolly，D.T.等，J.Biol.Chem.264(1989)20017-24。应对缺氧VEGF的表达是增强的，通过激活的癌基因和多种细胞因子。血管内皮生长因子参与调节与肿瘤和眼内疾病有关的正常和异常的血管生成和新血管形成(Ferrara，N.等，Endocr.Rev.18(1997)4-25；Berkman，R.A.等，J.Clin.Invest.91(1993)153-159；Brown，L.F.等，人类病理.26(1995)86-91；Brown，L.F.等，Cancer Res.53(1993)4727-4735；Mattem，J.等，Brit.J.Cancer.73(1996)931-934；和Dvorak，HF.等，Am.J.Pathol.146(1995)1029-1039)。
[0005]失调的VEGF表达通过促进肿瘤血管生成而促进实体瘤的发展，并且也是以血管生成异常为特征的其他几种疾病的病因(Kim，K.J.等，1993.自然(伦敦)362，841-844；Millauer，B.等，1994年.自然(伦敦)367，576-579)。因此，抑制VEGF信号传导可以消除多种肿瘤的发展。
[0006]在视网膜病变中，视网膜的局部或普遍缺血伴随着VEGF的过度表达和血管过度增生，可能会导致失明(Aiello，L.P等，1994.N.Engl.J.Med.331，1480-1487；Adamis，A.P.等，Am.J.眼科.118，445-450)。在这种疾病状态下抑制VEGF的表达可以治疗或预防失明的产生。
[0007]在Maisonpierre，PC等，Science 277(1997)55-60和Cheung，AH等，Genomics48(1998)389-91中描述了人血管生成素2(ANG-2或Ang-2或Ang2)(或者缩写ANGPT2或ANG2)。
Ang2在血管生成中起重要作用，其表达水平与癌症和眼部疾病相关(Gerald D等，Cancer Res.2013，73(6)：1649-57；Watanabe等，Am J Ophthalmol.2005，139(3)：476-81)。
[0008]在最近的一项临床试验中，双重拮抗剂RG7716被证实疗效优于VEGF拮抗剂兰尼单抗。然而，考虑到对眼睛的给药量通常较低(例如50微升)，RG7716报道的剂量为每剂6mg已经相当高。这可能需要120mg/ml的浓度，对制剂开发是一个重大挑战。需要对VEGF和/或Ang2具有更强结合亲和力的双重拮抗剂。本专利技术包括具有增强的结合能力的双特异性分子，并且用本专利技术公开的分子治疗的患者的疾病严重性降低。专利技术概述
[0009]本
技术实现思路
涉及新型双特异性嵌合分子，其包含与VEGF和Ang-2两者结合的结构域。进一步还公开了使用所述嵌合分子治疗癌症，增生性视网膜病，新生血管性青光眼，黄斑水肿，湿性年龄相关性黄斑变性(wAMD)，视网膜静脉闭塞后黄斑水肿(RVO)，糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)患者的方法。
[0010]在一些方面，所述嵌合分子包含一个或两个VEGF结合部分和一个或两个Ang-2拮抗剂肽，其中：a)所述Ang-2拮抗剂肽包含选自SEQ ID NO：8-14的氨基酸序列；和b)所述VEGF结合部分是抗体，Fab或scFv；其中所述抗体，Fab或scFv包含衍生自具有SEQ ID NO：4所示氨基酸序列的轻链或衍生自具有SEQ ID NO：6所示氨基酸序列的scFv的轻链CDRs，和衍生自具有SEQ ID NO：5所示氨基酸序列的重链，或衍生自具有SEQ ID NO：6所示氨基酸序列的scFv的重链CDRs。
[0011]在一些实施方案中，所述VEGF结合部分包含具有与SEQ ID NO：4至少有95％同一性氨基酸序列的轻链和与SEQ ID NO：7至少有99％同一性氨基酸序列的重链的抗体。
[0012]在一些实施方案中，所述Ang-2拮抗剂肽可选的通过肽接头与所述抗体的重链的N-末端(HC)之一或两个融合。在一些实施方案中，肽-HC融合多肽包含与选自SEQ ID NO：29、30和33具有至少99％同一性的氨基酸序列。
[0013]在一些实施方案中，所述Ang-2拮抗剂肽通过肽接头与所述抗体重链的C-末端融合。在一些实施方案中，Ang-2拮抗剂肽-重链融合多肽包含与选自SEQ ID NO：31、32和34中之一的氨基酸序列具有至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0014]在一些实施方案中，所述Ang-2拮抗剂多肽通过肽接头与所述抗体重链的N末端或C末端融合；其中Ang-2拮抗肽-重链融合多肽包含与选自SEQ ID NO：37、39、41、43、45、47、49、51和53中之一具有至少99％或100％同一性的氨基酸序列。
[0015]在一些本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合分子，其特征在于，所述嵌合分子包含一个或两个VEGF结合部分和一个或两个Ang-2拮抗剂肽，其中：a)所述Ang-2拮抗剂肽包含选自SEQ ID NO:8-14的氨基酸序列；和b)所述VEGF结合部分是抗体，Fab或scFv；其中所述抗体，Fab或scFv包含衍生自具有SEQ ID NO:4所示氨基酸序列的轻链或衍生自具有SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的scFv轻链的CDRs，以及衍生自具有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的重链或衍生自具有SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的scFv重链的CDRs。2.如权利要求1所述的嵌合分子，其特征在于，所述VEGF结合部分包含具有与SEQ ID NO:4有至少95％同一性的轻链氨基酸序列和与SEQ ID NO:7有至少99％同一性的重链氨基酸序列的抗体。3.如权利要求2所述的嵌合分子，其特征在于，所述Ang-2拮抗剂肽可选地通过肽接头融合到所述抗体重链(HC)的N端。4.如权利要求3所述的嵌合分子，其特征在于，所述Ang-2拮抗剂肽-HC融合多肽包含与选自SEQ ID NO:29、30和33具有至少99％同一性的氨基酸序列。5.如权利要求2所述的嵌合分子，其特征在于，所述Ang-2拮抗剂肽可选地通过肽接头融合到所述抗体重链的C端。6.如权利要求5所述的嵌合分子，其特征在于，所述Ang-2拮抗剂肽-重链融合多肽包含与选自SEQ ID NO:31,32和34中之一的氨基酸序列具有至少99％或100％同一性的氨基酸序列。7.如权利要求2所述的嵌合分子，其特征在于，所述Ang-2拮抗剂多肽通过肽接头融合到所述抗体重链的N端或C端；其中Ang-2拮抗剂肽-重链融合多肽包含与选自SEQ ID NO:37,39,41,43,45,47,49,51和53中之一具有至少99％或100％同一性的氨基酸序列。8.如权利要求1所述的嵌合分子，其特征在于，所述VEGF结合部分是具有与SEQ ID NO:4有至少95％同一性的轻链氨基酸序列和与SEQ ID NO:5有至少95％同一性的重链氨基酸序列的Fab。9.如权利要求8所述的嵌合分子，其特征在于，所述Ang-2拮抗剂肽通过肽接头与所述Fab分子的重链的N-末端融合。10.如权利要求9所述的嵌合分子，其特征在于，所述Ang-2拮抗剂肽-重链融合多肽具有与SEQ ID NO:19或SEQ ID NO:20有至少99％同一性的氨基酸序列。11.如权利要求8所述的嵌合分子，其特征在于，所述Ang-2拮抗剂肽通过肽接头与所述Fab分子...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕越峰，卢建丰，
申请(专利权)人：奥美药业有限公司，
类型：发明
国别省市：