【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请涉及il-12的新型嵌合分子或前药。本申请进一步包含制备和使用所述新型嵌合分子或前药的方法。
技术介绍
1、il-12包括p40和p35两个亚基，并且在免疫学中发挥重要作用(watford wt等人,《细胞因子与生长因子评论(cytokine growth factor rev.)》2003年10月；14(5):361-8)。il-12刺激干扰素γ释放并且刺激t细胞和nk细胞(del vecchio m,《临床癌症研究(clincancer res.)》2007年8月15日；13(16):4677-85)。il-12受体由两个亚基，il-12受体β1(il12rβ1)和β2(il12rβ2)组成。il12rβ1缺陷损害il-12信号通路，并且可能导致细菌感染并且在一种情况下导致舍格伦综合征(sjogren's syndrome)(sogkas等人,《免疫学前沿(front immunol.)》2017；8:885)。
2、il-12也已经作为用于癌症治疗的潜在药物被探索(colombo mp和trinchierig.2002,《细胞因子与生长因子评论》13(2):155—168；del vecchio m,《临床癌症研究》2007年8月15日；13(16):4677-85；lasek等人,《癌症免疫学与免疫疗法(cancer immunolimmunother.)》2014；63(5):419-435)。
3、需要开发基于il-12的癌症治疗剂，所述癌症治疗剂更具肿瘤位点选择性、具有较不严重的副作用
4、本文所提及的所有出版物、专利和专利申请的公开内容各自特此通过引用整体并入本文。
技术实现思路
1、此处描述了新型嵌合分子，所述新型嵌合分子包括il-12激动剂分子，其包括il-12p40亚基(p40)、il-12p35亚基(p35)、掩蔽部分(mm)和载体(c)。在一些实施例中，所述嵌合分子包括p40突变蛋白，其中所述p40亚基包括一个或多个氨基酸的突变、一个或多个氨基酸的缺失。在一些实施例中，所述嵌合分子包括p35突变蛋白，其中所述p35亚基包括一个或多个点突变。在一些实施例中，所述嵌合分子的所述p40亚基和所述p35亚基两者均含有和/或具有一个或多个突变。在一些实施例中，与具有野生型p40和p35亚基的嵌合分子相比，所述p40亚基和/或所述p35亚基中的所述一个或多个突变降低所述嵌合分子的生物活性。在一些实施例中，所述p40亚基包括突变lys260ala和arg261ala(根据seq id no:5进行编号)。在一些实施例中，所述p35亚基包括tyr40处的突变(根据seq id no:6进行编号)。在一实施例中，p35亚基包括突变tyr40ala(根据seq id no:6进行编号)。
2、在一方面，嵌合分子包括掩蔽部分(mm)，所述mm抑制il-12细胞因子部分与il-12受体β1亚基的结合，而所述p35亚基包括降低细胞因子部分和il-12受体β2亚基的结合亲和力的一个或多个突变。在另一个实施例中，所述p35亚基包括tyr40处的突变(根据seq idno:6进行编号)。在一实施例中，所述p35亚基包括突变tyr40ala(根据seq id no:6进行编号)。
3、在一方面，嵌合分子是前药，所述前药在肿瘤部位处、在肿瘤微环境中或在肿瘤附近是可激活的。在一些实施例中，所述嵌合分子的载体部分包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与在免疫细胞上表达的抗原结合。在另一个实施例中，免疫细胞渗入肿瘤或肿瘤微环境中或位于肿瘤附近。在一些实施例中，与不表达所述抗原的免疫细胞相比，对于表达由抗原结合部分靶向的所述抗原的免疫细胞，所述嵌合分子具有更高的刺激活性。在一些实施例中，所述嵌合分子刺激表达靶向抗原的免疫细胞的ec50是刺激不表达所述抗原的免疫细胞的ec50的至多1/2、至多1/5或至多1/10。在另一个实施例中，所述嵌合分子被激活，即使所述嵌合分子不包括可切割肽连接子或所述嵌合分子包括可切割肽连接子但所述可切割连接子未被切割。在一些实施例中，所述嵌合分子：(a)包括il-12细胞因子部分、掩蔽部分和载体，所述载体包括与在免疫细胞上表达的抗原结合的抗原结合部分；(b)不包括任何可切割肽连接子；并且(c)能够激活表达由所述载体靶向的抗原的免疫细胞。在一些实施例中，所述抗原选自pd-1、tim-3、tigit、lag-3、cd16a、nkg2a、nkg2d、kir、sirpα和nkp46。在一些实施例中，所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与pd-1结合，其中所述抗原结合部分包括与帕博利珠单抗或纳武利尤单抗的重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(vl)相同的vh和相同的vl。在一些实施例中，所述vh结构域包括seq id no:101的氨基酸序列或与seq id no:101的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列，并且所述vl结构域包括seq id no:102的氨基酸序列或与seq id no:102的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。在一实施例中，所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与lag-3结合，其中所述lag-3结合部分包括选自seq id no:69-77的氨基酸序列或与选自seq id no:69-77的氨基酸序列至少90％相同的氨基酸序列。
4、在另一个实施例中，所述嵌合分子包括il-12p40亚基(p40)、il-12p35亚基(p35)、掩蔽部分(mm)、载体(c)和可切割肽连接子，所述可切割肽连接子可被在肿瘤部位处、在肿瘤微环境中或在肿瘤附近优先表达的蛋白酶切割。在一些实施例中，所述载体包括igg的fc结构域，其中所述掩蔽部分通过不可切割肽连接子直接或间接地与所述载体连接，并且其中所述il-12的p40亚基通过可切割肽连接子直接或间接地与所述载体连接。在一些实施例中，所述载体包括抗原结合部分，其中所述掩蔽部分通过可切割肽连接子直接或间接地与所述载体连接，并且其中所述il-12的p40亚基任选地通过不可切割肽连接子直接或间接地与所述载体连接。
5、在一方面，嵌合分子包括il-12p40亚基(p40)、il-12p35亚基(p35)、掩蔽部分(mm)和载体(c)，其中所述掩蔽部分任选地通过可切割或不可切割肽连接子直接与所述载体融合，其中所述p40亚基任选地通过可切割或不可切割肽连接子直接与所述载体融合，并且其中所述p35亚基通过具有3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个氨基酸的肽连接子与所述p40亚基融合。在一些实施例中，所述p35亚基通过包括ggggs或ggggsggggs的肽连接子与所述p40亚基融合。
6、在另一方面，嵌合分子包括il-12p40亚基(p40)、il-12p35亚基(p35)、掩蔽部分(mm)和载体(c)，其中：
7、a.所述il-12亚基p40具有seq id no:5的氨基酸序列或与seq id no:5的氨基酸序本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种嵌合分子，其包括IL-12p40亚基(p40)、IL-12p35亚基(p35)、掩蔽部分(MM)和载体(C)，其中：
2.一种嵌合分子，其包括IL-12p40亚基(p40)、IL-12p35亚基(p35)、掩蔽部分(MM)和载体(C)，其中：
3.一种嵌合分子，其包括IL-12p40亚基(p40)、IL-12p35亚基(p35)、掩蔽部分(MM)和载体(C)，其中：
4.根据权利要求1至3中任一项所述的嵌合分子，其中：
5.一种嵌合分子，其包括第一多肽链和第二多肽链，其中所述第一多肽链包括SEQ IDNO:80的氨基酸序列或与SEQ ID NO:80的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述第二多肽链包括SEQ ID NO:81的氨基酸序列或与SEQ ID NO:81的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的嵌合分子，其中所述嵌合分子进一步包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与一种或多种选自以下的抗原结合：CD40、OX40、GITR、4-1BB、CD16A、NKG
7.根据权利要求1至5中任一项所述的嵌合分子，其中所述嵌合分子进一步包括CD40配体(CD40L)、OX40配体(OX40L)、GITR配体(GITRL)、4-1BB配体(4-1BBL)、NKG2D的配体或其类似物、CD47或SIRPα的胞外域或胞外结构域(ECD)的一个或多个拷贝。
8.根据权利要求6所述的嵌合分子，其进一步包括CD40L的胞外域，所述胞外域包括SEQID NO:7的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
9.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合分子，其中所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与在肿瘤细胞、癌细胞或免疫细胞的表面上表达的抗原结合。
10.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合分子，其中所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与选自以下的抗原结合：PD-1、PD-L1、CD47、CD16a、NKG2D、NKG2A、SIRPα、Siglec-10、TIGIT、TIM-3、LAG-3、5T4、FAP、EGFR、CMET、HER2、Trop-2、VEGFR2、ROR1、间皮素、GPC-3、CD20、CD38和BCMA。
11.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合分子，其中载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与LAG-3结合，其中所述LAG-3结合部分是单域抗体，所述单域抗体包括选自SEQID NO:69-77的氨基酸序列或与选自SEQ ID NO:69-77的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
12.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合分子，其中所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与PD-1结合，其中所述PD-1结合部分包括VH结构域和VL结构域，所述VH结构域具有SEQ ID NO:101的氨基酸序列或与SEQ ID NO:101的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述VL结构域包括SEQ ID NO:102的氨基酸序列或与SEQ ID NO:102的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的嵌合分子，其中所述p35亚基包括一个或多个选自以下的突变：K128A、F166K、E38A、F39A、Y40A、T43A、S44G、E45A、E46A、D48A、H49A、E50A、E79A、T80A、F82A和N71Q。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的嵌合分子，其中所述p35亚基包括选自以下的双突变：E38A/F39A、T43A/S44G、E45A/E46A、D48A/H49A和E79A/T80A。
15.一种嵌合分子，其包括IL-12p40亚基(p40)、IL-12p35亚基(p35)和载体(C)，其中所述p35包括一个或多个选自以下的突变：K128A、F166K、T36A、L37E、E38A、F39A、E38A、F39A、Y40A、P41G、T43A、S44G、E45A、E46A、D48A、H49A、E50A、E79A、T80A、F82A和N71Q，并且其中所述载体选自白蛋白、白蛋白片段、Fc结构域以及抗体或其结合片段。
16.一种嵌合分子，其包括IL-12p40亚基(p40)、IL-12p35亚基(p35)和载体(C)，其中所述p35包括选自以下的双突变：E38A/F39A、T43A/S44G、E45A/E46A、D48A/H49A和E79A/T80A，并且...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种嵌合分子，其包括il-12p40亚基(p40)、il-12p35亚基(p35)、掩蔽部分(mm)和载体(c)，其中：
2.一种嵌合分子，其包括il-12p40亚基(p40)、il-12p35亚基(p35)、掩蔽部分(mm)和载体(c)，其中：
3.一种嵌合分子，其包括il-12p40亚基(p40)、il-12p35亚基(p35)、掩蔽部分(mm)和载体(c)，其中：
4.根据权利要求1至3中任一项所述的嵌合分子，其中：
5.一种嵌合分子，其包括第一多肽链和第二多肽链，其中所述第一多肽链包括seq idno:80的氨基酸序列或与seq id no:80的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列，所述第二多肽链包括seq id no:81的氨基酸序列或与seq id no:81的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的嵌合分子，其中所述嵌合分子进一步包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与一种或多种选自以下的抗原结合：cd40、ox40、gitr、4-1bb、cd16a、nkg2a或nkg2d。
7.根据权利要求1至5中任一项所述的嵌合分子，其中所述嵌合分子进一步包括cd40配体(cd40l)、ox40配体(ox40l)、gitr配体(gitrl)、4-1bb配体(4-1bbl)、nkg2d的配体或其类似物、cd47或sirpα的胞外域或胞外结构域(ecd)的一个或多个拷贝。
8.根据权利要求6所述的嵌合分子，其进一步包括cd40l的胞外域，所述胞外域包括seqid no:7的氨基酸序列或与seq id no:7的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
9.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合分子，其中所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与在肿瘤细胞、癌细胞或免疫细胞的表面上表达的抗原结合。
10.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合分子，其中所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与选自以下的抗原结合：pd-1、pd-l1、cd47、cd16a、nkg2d、nkg2a、sirpα、siglec-10、tigit、tim-3、lag-3、5t4、fap、egfr、cmet、her2、trop-2、vegfr2、ror1、间皮素、gpc-3、cd20、cd38和bcma。
11.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合分子，其中载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与lag-3结合，其中所述lag-3结合部分是单域抗体，所述单域抗体包括选自seqid no:69-77的氨基酸序列或与选自seq id no:69-77的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
12.根据权利要求1至4中任一项所述的嵌合分子，其中所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与pd-1结合，其中所述pd-1结合部分包括vh结构域和vl结构域，所述vh结构域具有seq id no:101的氨基酸序列或与seq id no:101的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述vl结构域包括seq id no:102的氨基酸序列或与seq id no:102的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的嵌合分子，其中所述p35亚基包括一个或多个选自以下的突变：k128a、f166k、e38a、f39a、y40a、t43a、s44g、e45a、e46a、d48a、h49a、e50a、e79a、t80a、f82a和n71q。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的嵌合分子，其中所述p35亚基包括选自以下的双突变：e38a/f39a、t43a/s44g、e45a/e46a、d48a/h49a和e79a/t80a。
15.一种嵌合分子，其包括il-12p40亚基(p40)、il-12p35亚基(p35)和载体(c)，其中所述p35包括一个或多个选自以下的突变：k128a、f166k、t36a、l37e、e38a、f39a、e38a、f39a、y40a、p41g、t43a、s44g、e45a、e46a、d48a、h49a、e50a、e79a、t80a、f82a和n71q，并且其中所述载体选自白蛋白、白蛋白片段、fc结构域以及抗体或其结合片段。
16.一种嵌合分子，其包括il-12p40亚基(p40)、il-12p35亚基(p35)和载体(c)，其中所述p35包括选自以下的双突变：e38a/f39a、t43a/s44g、e45a/e46a、d48a/h49a和e79a/t80a，并且其中所述载体选自白蛋白、白蛋白片段、fc结构域以及抗体或其结合片段。
17.根据权利要求15或16所述的嵌合分子，其进一步包括掩蔽部分(mm)，其中：
18.根据权利要求17所述的嵌合分子，其中：
19.根据权利要求17和18中任一项所述的嵌合分子，其中所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与选自以下的抗原结合：pd-1、pd-l1、cd47、cd16a、nkg2d、kir、sirpα、siglet-10、tigit、tim-3、lag-3、5t4、fap、egfr、cmet、her2、trop-2、vegfr2、ror1、间皮素、gpc-3、cd20、cd38和bcma。
20.根据权利要求17和18中任一项所述的嵌合分子，其中所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与lag-3结合，其中所述lag-3结合部分是单域抗体，所述单域抗体包括选自seq id no:69-77的氨基酸序列或与选自seq id no:69-77的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列。
21.根据权利要求17和18中任一项所述的嵌合分子，其中所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与pd-1结合，其中所述pd-1结合部分是抗体或其结合片段，所述抗体或其结合片段包括vh结构域和vl结构域，所述vh结构域包括seq id no:101的氨基酸序列或与seq id no:101的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述vl结构域包括seqid no:102的氨基酸序列或与seq id no:102的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。
22.根据权利要求1至12、17和18中任一项所述的嵌合分子，其中所述载体包括抗原结合部分，所述抗原结合部分与5t4结合，其中所述5t4结合部分是抗体或其结合片段，所述抗体或其结合片段包括vh结构域和vl结构域，所述vh结构域包括seq id no:78的氨基酸序列或与seq id no:78的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，所述vl结构...
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