一种重组新型冠状病毒疫苗组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种重组新型冠状病毒（SARS‑CoV‑2）疫苗组合物，该疫苗组合物包含具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的重组刺突蛋白。所述疫苗组合物进一步包含药学上可接受的载体，例如铝佐剂联合CpG ODN佐剂。该疫苗组合物在小鼠中显示优异的免疫原性，能诱导机体产生高滴度的偏向于Th1的抗体反应和高水平的细胞免疫反应。动物模型实验显示，该疫苗组合物可以诱导高滴度的中和抗体，并显著降低肺和鼻甲组织内部的病毒载量。

【技术实现步骤摘要】
一种重组新型冠状病毒疫苗组合物
本专利技术属于生物医药领域，具体而言，本专利技术涉及一种重组新型冠状病毒疫苗组合物。
技术介绍
新冠肺炎（COVID-19）是由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染引起的呼吸道疾病。截止到2020年10月20日，全球范围内已有超过4000万人感染，超过110万人因感染SARS-CoV-2病毒而死亡。新冠肺炎在全球范围内的大流行已经对人类的健康和经济发展带来了巨大的影响。因此，迫切需要寻求一种途径遏制病毒的传播。疫苗是一种有效且经济的消灭SARS-CoV-2病毒的方式。根据世界卫生组织（WHO）统计，目前已经有多达42种不同类型的候选疫苗成功地进入了临床试验。SARS-CoV-2属于β属B亚群，是一种有包膜的单股正链RNA病毒。该病毒属还包含SARS-CoV和MERS-CoV，它们都是通过病毒颗粒表面的刺突蛋白（Spike，S蛋白）与宿主细胞表面受体结合而感染宿主。刺突蛋白作为病毒颗粒表面唯一的蛋白，最易受到免疫系统产生的特异性中和性抗体的攻击。目前研究表明，人体感染SARS-CoV-2后，可以诱导出大量的针对刺突蛋白的中和性抗体，并且体外实验证明这些中和性抗体可以阻止病毒侵染宿主细胞。这也是前期针对SARS-CoV和MERS-CoV的疫苗研发中，选择刺突蛋白作为抗原的主要原因。通常，单独蛋白作为疫苗的抗原成分时，其免疫原性较弱，需要辅加佐剂以增强疫苗的效果。铝佐剂是一种安全的传统佐剂，已有的研究结果认为铝佐剂的主要作用为抗原仓储缓释作用、增强抗原的递呈、增强2型辅助性T细胞（Thelpercells2，Th2）介导的适应性免疫应答、增强机体固有免疫应答和激活补体作用等。针对SARS-CoV-2疫苗，诱导机体产生倾向于Th2的免疫应答有引起疫苗诱导的病情加重（Vaccine-associatedenhancedrespiratorydisease,VAERD）的潜在风险。CpGODN作为一种Toll样受体9（TLR9）的激动剂，通过激活下游天然免疫反应通路，诱导I型干扰素和炎症因子表达，从而增强体液免疫和细胞免疫反应。研究表明，CpGODN主要诱导机体产生倾向于Th1的免疫应答，因此在疫苗中联合使用CpGODN可能有助于降低潜在的VAERD风险。CpGODN作为疫苗佐剂的安全性已在临床上得到验证。CpG1018用于Dynavax公司的乙肝疫苗（Heplisav-B），已经于2017年在美国获批上市。
技术实现思路
因此，本专利技术提供了一种重组新型冠状病毒疫苗组合物，该疫苗组合物含有重组刺突蛋白。为了还原自然条件下刺突蛋白在病毒表面的三聚体结构，同时通过三聚体化增加抗原免疫原性，本专利技术通过基因工程改造，去除了刺突蛋白的跨膜区和C端囊膜内段，同时在蛋白C端加入了一个有助于蛋白三聚体化的结构域，因此也称该重组刺突蛋白为SΔTM蛋白（以下简称“rS蛋白”）。在一些优选的实施方式中，所述rS蛋白具有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列。本专利技术提供的重组新型冠状病毒疫苗组合物还包含药学上可接受的载体。在一些优选的实施方式中，所述载体为铝佐剂联合CpGODN佐剂。在进一步的实施方式中，所述铝佐剂为氢氧化铝。在进一步的实施方式中，所述CpGODN佐剂为CpG7909。在进一步的实施方式中，所述载体为氢氧化铝联合CpG7909。在一些优选的实施方式中，本专利技术的疫苗组合物含有5μg-100μg/0.5ml的重组刺突蛋白（即rS蛋白）。在一个优选的实施方式中，rS蛋白的含量为25μg-100μg/0.5ml。在一些优选的实施方式中，铝佐剂的含量在100μg-600μg/0.5ml之间。在一个优选的实施方式中，铝佐剂的含量在250μg-500μg/0.5ml之间。在一个优选的实施方式中，本专利技术的疫苗组合物含有250μg-500μg/0.5ml的氢氧化铝。在一些优选的实施方式中，CpGODN佐剂的含量在50μg-1200μg/0.5ml之间。在一个优选的实施方式中，CpGODN佐剂的含量在125μg-500μg/0.5ml之间。在一个优选的实施方式中，本专利技术的疫苗组合物含有125μg-500μg/0.5ml的CpG7909。有益效果：本专利技术提供的重组新型冠状病毒疫苗可以在小鼠模型中诱导出高滴度的偏向于Th1的抗体反应和高水平的细胞免疫反应。同时，包含联合佐剂的疫苗诱导的免疫反应显著优于不加佐剂的重组刺突蛋白以及只加铝佐剂或者只加CpGODN佐剂的疫苗诱导的免疫反应。除此之外，叙利亚黄金仓鼠上的保护效力研究显示，该疫苗可以诱导高滴度的中和抗体，并且明显降低肺和鼻甲组织内部的病毒载量，说明该疫苗对新型冠状病毒具有良好的免疫保护效果。本专利技术的其它方面根据本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1.不同佐剂组合的疫苗诱导的血清IgG抗体水平比较图；图2.不同佐剂组合的疫苗诱导的基于野生型活病毒的中和抗体水平比较图；图3.不同佐剂组合的疫苗诱导的IgG抗体亚型的分布比较图；图4.不同佐剂组合的疫苗诱导的细胞免疫反应水平比较图；图5.剂量配比实验各组疫苗诱导的血清IgG抗体水平比较图；图6.剂量配比实验各组疫苗诱导的基于假病毒的中和抗体水平比较图；图7.叙利亚黄金仓鼠第二次免疫后14天中和抗体滴度水平；图8.叙利亚黄金仓鼠攻毒7天后肺和鼻甲组织的病毒载量。具体实施方式下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术。需要指出的是以下实施例仅是范例性的，并不对本专利技术的权利要求所限定的保护范围构成任何限制。实施例1：疫苗组合物的制备为了研究本专利技术所提供的疫苗组合物的技术效果，本专利技术人制成了以下多种疫苗组合物制剂（0.5ml/剂），每种组合物均含有rS蛋白、氢氧化铝佐剂和／或CpG7909。具体配制方法为：先将CpG7909样品吸附到氢氧化铝佐剂上，制备成不同比例的CpG7909/氢氧化铝佐剂（w/w）吸附样品（此处氢氧化铝佐剂的含量实质上为铝元素的含量）；然后向该CpG7909／氢氧化铝佐剂样品中加入不同浓度的rS蛋白原液。上述制剂充分混合后，如果不立即施用，则储存于2-8°C。具体比例如表1所示。表1：各疫苗组合物的组成成分实施例2：比较不同佐剂组合的新型冠状病毒疫苗在BALB/c小鼠模型上的免疫学评价1.小鼠分组以及动物免疫策略对48只SPF级雌性BALB/c小鼠（6-8周龄）进行分组。每组8只或10只小鼠，共5组。组别信息具体见表2。根据表2分组情况对小鼠进行免疫，免疫方式为肌肉注射小鼠大腿内侧，注射体积为50μl／剂／只（1/10人拟用剂量）。每只小鼠共免疫2次，免疫间隔为3周。表2：比较不同佐剂组合实验中BALB/c小鼠分组情况2．疫苗诱导的抗体反应检测在第二次免疫后两周分别对各组小鼠进行采血，分离血清。通过ELISA检测血清中针对rS蛋白的IgG抗体滴度（图1）；通过基于野生型活病毒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组新型冠状病毒疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包含具有SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的重组刺突蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组新型冠状病毒疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包含具有SEQIDNO：1所示的氨基酸序列的重组刺突蛋白。


2.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物含有5-100μg/0.5ml，优选地25-100μg/0.5ml的重组刺突蛋白。


3.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物进一步包含药学上可接受的载体。


4.如权利要求3所述的疫苗组合物，其特征在于，所述药学上可接受的载体为铝佐剂联合CpGODN佐剂。
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘海涛，宋玉娇，李佳黛，周晨亮，张玲莉，刘革，
申请(专利权)人：上海泽润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31