一种用于预防SARS-CoV-2感染的Ad35载体疫苗制造技术

本发明专利技术公开了一种用于预防SARS‑CoV‑2感染的Ad35载体疫苗，包括Ad35载体，所述Ad35载体中负载有SEQ ID NO：1所示的核酸序列。本发明专利技术的一些实例，具有较好的安全性，使用方便。实验表明其在人体细胞中可以产生更多的S蛋白。有望开发为用于预防SARS‑CoV‑2感染的疫苗。本发明专利技术的一些实例，可以和其他疫苗联用，也可作为新冠肺炎的治疗性疫苗，在患者被感染初期接种，快速诱导人体内免疫反应，达到治疗效果。

【技术实现步骤摘要】
一种用于预防SARS-CoV-2感染的Ad35载体疫苗
本专利技术涉及一种用于预防SARS-CoV-2感染的Ad35载体疫苗。
技术介绍
新冠肺炎疫情非常严峻，已在全球多国蔓延。截至2020年3月6日，全球新冠肺炎确诊病例超过10万例。然而，针对新型冠状病毒，目前国内外尚无明确验证的特效抗病毒药物和预防性疫苗。因此做好预防，阻断病毒的传播是控制疫情的关键。疫苗是预防和控制新型冠状病毒感染最经济有效的干预措施。已公布的一百多个SARS-CoV-2病毒基因组比对的结果显示病毒整体突变程度较低，未发生重组现象。因此，如果SARS-CoV-2疫苗研发成功，必将能够保护人群免受新冠病毒的感染，从而抑制新疫情的暴发。SARS-CoV-2冠状病毒的病毒颗粒结构中，组成“皇冠”的S-蛋白是一个明显的靶点，成为大多数研究团队研究的重点。SARS-CoV-2的全序列如NC_045512.2所示，该序列的21563..25384核酸为刺突蛋白(Spikeprotein，S)的编码序列，S蛋白全长1273aa。已有研究团队通过对S蛋白三维结构计算机模拟，成功地揭示了S蛋白与其侵入细胞过程中的受体ACE2的关系。S蛋白在介导病毒粒子与宿主细胞受体的结合以及诱导中和抗体中起重要作用。因此，以S蛋白为抗原的疫苗，包括核酸疫苗，亚单位疫苗和病毒载体疫苗是非常有希望预防SARS-CoV-2感染的，但是这些疫苗中S蛋白的表达水平、蛋白结构决定了疫苗的有效性。然而实验表明，天然的SARS-CoV-2的刺突蛋白S基因在人肾细胞HEK293表达水平很低，因此如果以原始的S密码子来表达为抗原，其疫苗可能无效或是效价很低，不足以抵抗病毒的感染。腺病毒是疫苗研发与基因治疗中常用的载体，被广泛应用于生物医学领域。与其它病毒载体比，腺病毒低毒性，感染腺病毒只引起轻微的感冒症状。目前大多数研究团队开发的腺病毒载体疫苗都是基于5型腺病毒。人群中针对5型腺病毒载体的预存抗体比例很高，一定程度影响5型腺病毒载体疫苗效价。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种有望用于预防SARS-CoV-2感染的Ad35载体疫苗。本专利技术通过将优化的S基因整合到复制缺陷型Ad35载体上，通过腺病毒感染细胞，呈递新冠病毒抗原，免疫后使机体产生特异性免疫反应，从而阻断新冠病毒的感染。Ad35在人群中预存抗体的比例低于Ad5，因此可避免载体被人体内预存抗体中和，免疫效果有望高于Ad5载体疫苗。同时Ad35复制能力高于Ad5，在疫苗生产方面，Ad35载体疫苗的成本有望低于Ad5载体疫苗。本专利技术所采取的技术方案是：一种用于预防SARS-CoV-2感染的Ad35载体疫苗，包括Ad35载体，所述Ad35载体中负载有SEQIDNO：1所示的核酸序列。在一些实例中，所述Ad35载体为复制缺陷型Ad35载体。在一些实例中，所述复制缺陷型Ad35载体为缺失E1和E3区基因的复制缺陷型Ad35载体。通过使用复制复制缺陷型Ad35载体，可以有效避免Ad35载体在细胞内的复制，提高产品的安全性。在一些实例中，SEQIDNO：1所示核酸序列的转录方向与所述Ad35载体其它基因的转录方向相反。这样可以更好地表达SEQIDNO：1所示核酸序列，有利于提高产品的安全性的效价。这样可以使载体更为专一地表达SEQIDNO：1所示核酸序列，提高疫苗的效价同时提高其安全性。在一些实例中，所述Ad35载体具有调控SEQIDNO：1所示核酸序列表达的元件。这样可以更为人为调控SEQIDNO：1所示核酸序列表达，以获得更佳的安全性。在一些实例中，所述核酸序列可在人源细胞或人体内表达蛋白。在一些实例中，所述蛋白可在人体内：诱导免疫应答；或产生生物报告分子；或用于检测的追踪分子；或调节基因功能；或作为治疗性分子。在一些实例中，所述的Ad35载体疫苗还包括药学上可接受的佐剂、载体、稀释剂或赋形剂中的至少一种。佐剂、载体、稀释剂或赋形剂可以根据疫苗的具体剂型进行相应的选择。在一些实例中，所述的Ad35载体疫苗的剂型包括但不限于注射剂、口服剂、气雾吸入剂等常见的疫苗剂型。在一些实例中，所述腺病毒载体疫苗还可以和其他疫苗联用。在一些实例中，所述的Ad35载体疫苗还包括至少一种对COVID-19有治疗作用的药物。本专利技术的有益效果是：本专利技术的一些实例，具有较好的安全性，使用方便。实验表明其在人体细胞中可以产生更多的S蛋白。有望开发为用于预防SARS-CoV-2感染的疫苗。本专利技术的一些实例，可以和其他疫苗联用，也可作为新冠肺炎的治疗性疫苗，在患者被感染初期接种，快速诱导人体内免疫反应，达到治疗效果。附图说明图1是S蛋白表达的检测结果。图2是猕猴免疫后不同时间血清中结合抗体检测结果。图3是猕猴免疫18天后外周血PBMCs细胞ELISpot检测结果。具体实施方式SARS-CoV-2的刺突蛋白(Spikeprotein，S)的氨基酸序列如YP_009724390.1所示，全长1273aa，记为NB1。真核细胞转录的mRNA前体能够通过不同剪接方式(选择不同的剪接位点组合)产生不同的mRNA剪接异构体的过程，最终导致同一个基因序列产生的不同的蛋白质。这对蛋白的表达是非常不利的。专利技术人通过对野生型的天然核酸序列进行密码子优化，同时基于自有技术去除潜在的可变剪切位点，保证了蛋白表达的唯一性，减少了蛋白后续纯化的难度。优化得到的核酸序列记为NB2，其具体序列如SEQIDNO：1所示：ATGTTCGTGTTTCTGGTGCTGCTGCCTCTGGTGAGCTCCCAGTGCGTGAACCTGACCACAAGGACCCAGCTGCCACCTGCCTATACCAATAGCTTCACACGGGGCGTGTACTATCCCGACAAGGTGTTTAGATCTAGCGTGCTGCACTCCACCCAGGATCTGTTTCTGCCTTTCTTTTCTAACGTGACATGGTTCCACGCCATCCACGTGTCCGGCACCAATGGCACAAAGCGGTTCGACAATCCAGTGCTGCCCTTTAACGATGGCGTGTACTTCGCCTCCACCGAGAAGTCTAACATCATCAGAGGCTGGATCTTTGGCACCACACTGGACAGCAAGACCCAGTCCCTGCTGATCGTGAACAATGCCACAAACGTGGTCATCAAGGTGTGCGAGTTCCAGTTTTGTAATGATCCCTTCCTGGGCGTGTACTATCACAAGAACAATAAGTCTTGGATGGAGAGCGAGTTTAGGGTGTATTCCTCTGCCAACAATTGCACCTTTGAGTACGTGAGCCAGCCTTTCCTGATGGACCTGGAGGGCAAGCAGGGCAATTTCAAGAACCTG本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于预防SARS-CoV-2感染的Ad35载体疫苗，包括Ad35载体，所述Ad35载体中负载有SEQ ID NO：1所示的核酸序列。/n

【技术特征摘要】
20200316 CN 20201018210631.一种用于预防SARS-CoV-2感染的Ad35载体疫苗，包括Ad35载体，所述Ad35载体中负载有SEQIDNO：1所示的核酸序列。


2.根据权利要求1所述的Ad35载体疫苗，其特征在于：所述Ad35载体为复制缺陷型Ad35载体。


3.根据权利要求2所述的Ad35载体疫苗，其特征在于：所述复制缺陷型Ad35载体为缺失E1和E3区基因的复制缺陷型Ad35载体。


4.根据权利要求1～3任一项所述的Ad35载体疫苗，其特征在于：所述Ad35载体具有调控SEQIDNO：1所示核酸序列表达的元件。


5.根据权利要求1～3任一项所述的Ad35载体疫苗，...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈凌，关素华，杨臣臣，汪乾，
申请(专利权)人：广州恩宝生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44