基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物及制备方法技术

本发明专利技术涉及一种基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物，其包括腺相关病毒，所述腺相关病毒具有AAV衣壳、包装在AAV衣壳中的ssAAV载体基因组、启动子、以及适于编码可溶性胞外区ACE2的序列；所述序列编码的蛋白质可分泌到胞外，且具有与S蛋白特异结合的功能域。本发明专利技术利用AAV载体将编码可溶性胞外区ACE2蛋白的基因序列导入靶细胞，使靶细胞分泌可溶性ACE2到细胞外以便与冠状病毒的S蛋白结合，达到拮抗SARS‑CoV感染的目的。所述基因序列是在编码ACE2全长蛋白(1‑805)基因序列的基础上通过删减获得的编码可溶性胞外区ACE2(1‑740)和(1‑620)非全长蛋白的基因片段，两种非全长蛋白均保留了与S蛋白特异结合的功能域，可分泌到胞外，用于抑制新冠病毒侵染。

【技术实现步骤摘要】
基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物及制备方法
本专利技术涉及基因工程领域，尤其是涉及一种基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物。
技术介绍
世界卫生组织将SARS-CoV-2引起的疾病正式命名为COVID-19(coronavirusdisease-2019)。COVID-19感染者中约有25％表现为重症，典型特征是严重的病毒性肺炎，极重型危及生命，粗病死率约在0.5％-1％。SARS-CoV-2与SARS相似，具有相似的基因组构成和病毒结构特征，二者都是通过Spike蛋白的RBD(receptorbindingdomain)识别和结合位于靶细胞表面的ACE2(angiotensin-convertingenzyme2)受体，通过膜融合，进入内体/溶酶体途径，脱衣壳，病毒基因组RNA释放，在细胞质中，病毒的全长正链基因组先作为模板翻译少量RNA复制酶，接下来，无论是完整基因组还是亚基因组(部分基因组区域)，都是先复制成负链RNA，再以负链RNA为模板，复制全长或亚基因组正链RNA，全长正链可包装到新的病毒粒子本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物，其特征在于，其包括:/n腺相关病毒，所述腺相关病毒具有AAV衣壳、包装在AAV衣壳中的ssAAV载体基因组、启动子和适于编码可溶性胞外区ACE2的序列；所述序列编码的蛋白质可分泌到胞外，且具有与S蛋白特异结合的功能域。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物，其特征在于，其包括:
腺相关病毒，所述腺相关病毒具有AAV衣壳、包装在AAV衣壳中的ssAAV载体基因组、启动子和适于编码可溶性胞外区ACE2的序列；所述序列编码的蛋白质可分泌到胞外，且具有与S蛋白特异结合的功能域。


2.根据权利要求1所述的基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物，其特征在于，所述适于编码可溶性胞外区ACE2的序列是在编码ACE2全长蛋白1-805的基因序列基础上通过删减获得的编码可溶性胞外区ACE21-740和1-620非全长蛋白的基因片段；所述基因片段编码的蛋白保留了与S蛋白特异结合的功能域。


3.根据权利要求1所述的基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物，其特征在于，所述启动子为组成型启动子CBA。


4.根据权利要求2所述的基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物，其特征在于，所述启动子序列为SEQIDNO:1。


5.根据权利要求1所述的基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物，其特征在于，所述编码可溶性胞外区ACE21-740的片段的基因片段序列为SEQIDNO:4。


6.根据权利要求1所述的基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物，其特征在于，所述编码可溶性胞外区ACE21-620片段的基因片段序列为SEQIDNO:3。


7.一种基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物的制备方法，其特征在于，包括：
S1:构建腺相关病毒表达载体质粒，该质粒包含ssAAV载体基因组、启动子和用于编码可溶性胞外区ACE2的基因序列；
所述基因序列是在编码ACE2全长蛋白1-805的基因序列基础上通过删减获得的编码可溶性胞外区ACE21-740和1-620非全长蛋白的基因片段；所述基因片段编码的蛋白保留了与S蛋白特异结合的功能域；S2:将上述的腺相关病毒表达载体质粒、包装质粒pRC9和辅助质粒pHelper经层析纯化，共转染293T细胞，转染预定时间后，收集细胞并裂解，获得基于AAV载体的冠状病毒感染通用型基因治疗药物。


8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述启动...

【专利技术属性】
技术研发人员：董文吉，张艳君，曹帆，赵忠亮，刘子瑾，程谟斌，李昌锋，
申请(专利权)人：中吉智药天津生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12