重组人乳头瘤病毒蛋白表达制造技术

本发明专利技术公开了一类密码子优化的人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白

【技术实现步骤摘要】
重组人乳头瘤病毒蛋白表达
本申请是申请日为
2014
年2月
18
日，申请号为
202010040941.3
，专利技术名称为“重组人乳头瘤病毒蛋白表达”的专利技术专利的分案申请
。


[0001]本领域涉及分子生物学领域，具体而言，本专利技术涉及经密码子优化而适于在毕赤酵母中表达的各种人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白
L1
的基因，以及含有该人乳头瘤病毒主要衣壳蛋白
L1
基因的载体，菌株，表达该基因的方法，及其用途
。

技术介绍

[0002]人乳头状瘤病毒
(human papilloma virus
，
HPV)
是乳多空病毒科多瘤病毒亚科的一个无包膜的小型双链环状
DNA
病毒
。HPV
可通过人体间的密切接触传播，引起被感染者的皮肤出现寻常疣和肛门生殖器尖锐湿疣等病变，被列为性传播疾病
。1995
年，国际癌症研究中心公布的研究结果证实，
HPV
与宫颈癌有密切的因果关系
。
由此可见，
HPV
感染已成为严重危害人类健康的病原体
。
因此，研制高效
、
廉价的
HPV
疫苗，对于预防女性宫颈癌和
HPV
感染所引起的性传播疾病具有十分重要的意义
。
[0003]目前已经确定的
HPV
型超过
100
种
。
采用灵敏的检测方法，可以从几乎
100
％的宫颈癌患者病变组织中检测到高危
HPV
‑
DNA。
根据
HPV
亚型与女性生殖道恶性肿瘤的关系，将
HPV
分为低危型和高危型
。HPV6、11、34、40、42
等型多见于良性宫颈病变如宫颈湿疣及宫颈上皮轻度不典型性增生病变中，属
HPV
低危型；而宫颈上皮重度不典型增生及宫颈癌中以
HPV16、18、31、33、35、39、45
，
52
，
58
型感染更为多见，这些亚型为高危型
。
不同人群中一系列的研究已证实生殖道的
HPV 16、18
型感染与宫颈癌的发生高度相关，较其他危险因素更密切
。
宫颈癌患者中，约
50
‑
60
％是由
HPV16
感染引起，
HPV18
约占
14
％，
HPV45
占约8％，
HPV31
占约5％，其余型占
23
％
(Walboomers JM.et al.J Pathol 1999
；
189:12
‑
19)。
[0004]宫颈癌是仅次于乳腺癌的第二大妇科恶性肿瘤，全球每年有超过
50
万的妇女被诊断出患有宫颈癌，
27
万妇女死于此病，年龄标准化感染率达
10.5
％
。
早在
80
年代初，
Harald zur Hausen
就发现人乳头瘤病毒
(human papilloma virus
，
HPV)
的感染与宫颈癌发病有关，后续的大量研究也已证明
HPV
与宫颈癌及其癌前病变有密切联系
。
到目前为止，已发现了百余种
HPV
基因型，其中约
40
种可以感染生殖道粘膜
。
一个正常妇女一生中宫颈至少感染一种
HPV
的终生累计概率约为
40
％
。
[0005]国内目前尚无系统的尖锐湿疣和
HPV
相关调查，但是各地区的分别调查基本可以说明
HPV6、11
在尖锐湿疣中的重要作用
。
近期的深圳地区的流行病学调查结果显示
HPV6、11
型感染者在尖锐湿疣患者中约占
80
％
(
数据来源：深圳市人民医院
352
例尖锐湿疣患者生殖道人乳头状瘤病毒基因亚型的分布及意义，唐敏；戴勇；吕晓萍；李体远；第三军医大学学报
,2007
年
21
期
)
；临沂地区的调查结果
HPV6、11
型感染者在尖锐湿疣患者中占
85.19
％，
(
数据来源：
108
例尖锐湿疣患者
HPV
的基因分型及临床分析，熊瑛；社区医学杂志
,2007
年
17
期
)。
[0006]HPV
是无包膜二十面体对称病毒，其病毒基因组
DNA
为闭合环状，长度约
7200
‑
8000bp
，由早期编码区
(early region)、
晚期编码区
(late region)
和位于两者之间的长调控区
(long control region)
组成
。
其中晚期编码区含两个开放阅读框
(ORF)
，编码病毒衣壳蛋白
L1
和
L2。L1
蛋白分子量约
55kDa
，为主要衣壳蛋白，以
72
个五聚体的形式支撑整个病毒衣壳结构，在不同型别中氨基酸序列高度保守，能够刺激机体产生保护性抗体
。L2
蛋白分子量较小，多位于
L1
蛋白内部
。
[0007]昆虫表达系统
、
酵母表达系统
、
原核表达系统和哺乳动物细胞等多种表达系统都可以通过单独表达主要衣壳蛋白
L1
或联合表达
L1+L2
的方式获得病毒样颗粒
(VLP)。L1
单独表达得到的
VLP
与天然病毒衣壳结构类似，可用于诱导与保护免受病毒侵袭有关的高效价病毒中和抗体应答
。
[0008]因此，鉴于
L1
蛋白于不同基因型别内部高度保守，并且能够单独表达形成
VLP
，以
L1
蛋白作为
HPV
疫苗研发的目标蛋白具有较高的可行性
。
不过，以表达重组病毒蛋白得到的
VLP
作为
HPV
疫苗的商业化开发与生产需要解决许多技术问题，其中首先需要解决的技术问题就是如何提高重组病毒蛋白的表达水平<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种分离的基因，其编码人乳头瘤主要衣壳蛋白
L1
，其特征在于，所述的基因具有毕赤酵母偏爱的密码子，所述的基因具有
SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9
或
SEQ ID NO:10
所示核苷酸序列
。2.
一种表达载体，所述的表达载体中含有权利要求1所述的基因的序列
。3.
一种基因工程化的宿主细胞，所述的细胞含有权利要求2所述的表达载体，或其基因组中整合有权利要求1所述的基因
。4.
如权利要求3所述的宿主细胞，其特征在于，所述的细胞是毕赤酵母细胞
。5.
根据权利要求4所述的宿主细胞，其特征是，所述毕赤酵母选自毕赤酵母
X
‑
33、GS115、KM71
和
SMD1168
菌株
。6.
一种制备具有免疫原性的大分子的方法，该大分子的直径为
50
‑
80nm
，主要由人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白
L1
自我装配而成，其特征在于，所述方法包括：
(1)
培养权利要求3所述的宿主细胞，从而在宿主细胞内表达所述的人乳头状瘤病毒主要衣壳蛋白
L1
，并组装形成具有免疫原性的大分子；
(2)
分离所述的具有免疫原性的大分子
。7.
如权利要求6所述的方法，其特征在于，在步骤
(2)
中包括：

【专利技术属性】
技术研发人员：田平生，仝鑫，许丹，丛薇，刘瑞峰，张梦华，葛方昕，魏健，刘家骅，邬丹丽，曾宪放，王子龙，史力，
申请(专利权)人：上海泽润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：