【技术实现步骤摘要】
一种用于肺癌早期诊断的外泌体ecDNA生物标志物检测试剂及其用途
本专利技术涉及疾病早期检测
,尤其涉及一种用于肺癌早期诊断的外泌体ecDNA生物标志物检测试剂。
技术介绍
肺癌是世界范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。肺癌早期病情隐匿,通常无任何症状,但大部分患者在初诊时已处于中晚期,失去了手术切除的机会。晚期肺癌患者的五年生存率不足5%,而早期肺癌患者的五年生存率可达90%以上。因此,早期诊断是肺癌患者获得良好预后的一个重要机会。外泌体(exosome)是一种30-150nm大小、极低密度的细胞外纳米级囊状结构,由细胞经过“内吞-融合-外排”等一系列调控过程而形成。几乎所有细胞都会分泌外泌体,细胞分泌的外泌体携带了来源细胞的诸多生物学信息,因此,外泌体也被认为是重要的潜在生物标记物,可以及时的反映来源细胞的生理与病理状态。ecDNA是近期肿瘤学领域的研究热点,ecDNA指的是从染色体上脱落以环状结构存在的DNA。研究表明ecDNA普遍存在于肿瘤细胞中,是生物标志物的载体,是肿瘤异质性的驱动力 ...
【技术保护点】
1.一种用于肺癌早期诊断的外泌体ecDNA生物标志物检测试剂,其特征在于,所述检测试剂针对性检测的生物标志物包括外泌体ecDNA生物标志物,所述外泌体ecDNA生物标志物为C-myc、EGFR和CyclinD1的组合。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于肺癌早期诊断的外泌体ecDNA生物标志物检测试剂,其特征在于,所述检测试剂针对性检测的生物标志物包括外泌体ecDNA生物标志物,所述外泌体ecDNA生物标志物为C-myc、EGFR和CyclinD1的组合。
2.如权利要求1所述的检测试剂,其特征在于,所述C-myc、EGFR和CyclinD1的外泌体ecDNA组合生物标志物在肺癌患者的外泌体中的表达值与在对照样本中的表达值相比具有统计学上的显著差异。
3.如权利要求2所述的检测试剂,其特征在于,所述对照样本为非肺癌患者样本。
4.一种用于肺癌早期诊断的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含有权利要求1至3任一项所述的检测试剂。
5.一种使用权利要求1至3任一项所述检测试剂在制备通过如下方法进行肺癌早期诊断的试剂盒中的用途,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
S1、采集疑似为肺癌患者的血液或体液样本,分离并纯化样本中的外泌体;
S2、分离并纯化外泌体中的ecDNA;
S3、对ecDNA生物标志物C-myc、EGFR和CyclinD1的组合进行表达检测和关联性分析。
6.如权利要求5所述的用途,其特征在于,所述步骤S1包括使用含有沉淀剂和洗涤剂A的沉淀法分离并纯化样本中的外泌体;所述沉淀剂包括终浓度为10%至60%的PEG10000;所述洗涤液A包括终浓度为0.1至30mmol/L的KH2PO4和终浓度为0.3-28mmol/L的Na2H2PO4。
7.如权利要求6所述的用途,其特征在于,所述所述沉淀剂包括终浓度为15%的PEG10000;所述洗涤液A包括终浓度为1mmol/L的KH2PO4和终浓度为4mmol/L的Na2H2PO4。
8.如权利要求5所述的用途,其特征在于,所述步骤S2包括使用含有裂解液、洗涤液B、洗涤液C、洗脱液、磁珠悬液、蛋白酶K、外切酶、ATP和EDTA的磁珠法分离并纯化外泌体中的ecDNA;所述裂解液包括终浓度为1至5mol/L的异硫氰酸胍、终浓度为5至10mmol/L的柠檬酸钠、终浓度为0.01至1g/ml的Polidocanol和体积百分比为5至45%的乙醇;所述洗涤液B包括终浓度为...
【专利技术属性】
技术研发人员:马跃,张亚楠,
申请(专利权)人:上海思路迪生物医学科技有限公司,
类型:发明
国别省市:上海;31
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