一种人甲状旁腺激素真核表达重组质粒载体及其构建方法技术

本发明专利技术涉及基因药物领域，具体提供了一种人甲状旁腺激素真核表达重组质粒载体及其构建方法。该构建方法包括如下步骤：人工合成甲状旁腺激素（hPTH1‑84aa)基因（SEQ ID NO.1）,经PCR扩增获得甲状旁腺激素基因片段，用限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切PCR产物后,与经相同酶切的真核表达载体质粒PHY‑810连接,将连接好的表达载体转化感受态细菌,涂板筛选得到人PTH基因真核表达重组质粒载体（图1：PHY‑PTH）。本发明专利技术所构建的真核表达重组质粒载体使细胞高表达PTH，可用于针对甲状旁腺功能减退症和骨质疏松的基因治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种人甲状旁腺激素真核表达重组质粒载体及其构建方法
本专利技术涉及基因药物领域，特别涉及针对甲状旁腺功能减退基因治疗的重组质粒载体构建。
技术介绍
甲状旁腺素是由人甲状旁腺分泌的活性多肽类激素，其主要生理功能是通过调节骨细胞和肾细胞维持血钙平衡，刺激肾对钙的重吸收、磷的分泌和骨的重建,是调节钙磷代谢的重要肽类激素。甲状旁腺机能减退症是由于疾病、衰老和手术损伤引起的甲状旁腺激素分泌不足所导致的一种钙磷代谢调节障碍性疾病。疾病、衰老导致的甲状旁腺机能减退症以脱钙、骨骼再生障碍、骨质疏松为特征；手术损伤引起的甲状旁腺机能减退症又分为暂时型和永久型，主要临床特征以低血钙导致的低钙抽搐和心血管系统功能障碍为特征。由于疾病、衰老导致的甲状旁腺机能减退症，多见于老年化、孕产妇、更年期妇女、长期使用糖皮质激素的自免疾病患者和肿瘤患者。临床上表现为骨质疏松，随着老年化趋势凸显，发病率持续攀升，中国目前的骨质疏松人数达到2.5亿。手术损伤引起的甲状旁腺(PTG)损伤是急性继发性甲状旁腺机能减退症主要原因。我国每年由于甲状旁腺损伤导致甲旁功能减退达到本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人甲状旁腺激素真核表达载体重组质粒，其组成部件特征为：目的基因为人甲状旁腺激素（PTH1-84aa)基因（SEQ ID NO. 1）；质粒载体为PHY-810，载体原件：CMV-MCS-3xFlag-SV40-Neo；双酶切位点为BamHI酶切位点和XhoI酶切位点，重组质粒载体大小为5888bp。/n

【技术特征摘要】
1.一种人甲状旁腺激素真核表达载体重组质粒，其组成部件特征为：目的基因为人甲状旁腺激素（PTH1-84aa)基因（SEQIDNO.1）；质粒载体为PHY-810，载体原件：CMV-MCS-3xFlag-SV40-Neo；双酶切位点为BamHI酶切位点和XhoI酶切位点，重组质粒载体大小为5888bp。


2.根据权利要求1所述的人甲状旁腺激素真核表达载体重组质粒,其构建方法特征在于包括如下步骤：（1）人工合成人甲状旁腺激素（PTH1-84aa)基因（SEQIDNO.1）；（2）以所合成的PTH基因为模板，设计引物，P1含有BamHI酶切位点,P2含有XhoI酶切位点；（3）经PCR扩增PTH基因片段；（4）PCR扩增PTH基因片段用限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切后,与经相同酶切的载体PHY-810连接；（4）将连接好的表达载体转化感受态细菌,涂板筛选、酶切测序鉴定，得到人PTH基因真核表达载体重组质粒（PHY-PTH）。


3.根据权利要求1所述的人甲状旁腺激素真核表达载体重组质粒，其结构特征在于人甲状旁腺激素基因克隆位点位于BamHI—XhoI之间，在不增加重组质粒载体bp数量的前提下，避开N端活性功能区，在C端连接flag-tag,使PTH与3xFlag融合表达，有利于提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可溶性和稳定性，提高PTH功效和延长其作用...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵振林，樊敏，黄晨宸，赵晨野，
申请(专利权)人：深圳市瑞普逊科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44