一种基于Notch信号通路的药物筛选模型的构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种基于Notch信号通路的药物筛选模型的构建方法和应用，包括：利用含有RBP‑JK特异性结合序列的报告系统载体，及以具有组成型Notch的活性细胞为基础，构建成稳定的以Notch信号为靶点的高通量药物筛选细胞模型。本发明专利技术以Notch信号通路为靶点，采用基于具有组成型Notch活性(即持续Notch活性)的细胞系为策略，使报告系统本身在细胞中处于高度活化状态，无需使用外加刺激，得到的稳定细胞模型可直接用于化合物的筛选；不仅大大降低了筛选的成本，同时也使整个筛选流程从细胞培养→激活Notch→加化合物→检测简化为细胞培养→加化合物→检测，缩短了筛选的周期，减少了操作步骤，提升系统稳定性、高效性及易用性，更适用于高通量药物筛选。

【技术实现步骤摘要】
一种基于Notch信号通路的药物筛选模型的构建方法和应用
本专利技术涉及医药
，更具体为一种基于Notch信号通路的药物筛选模型的构建方法和应用。
技术介绍
Notch信号通路是少数反复调节细胞增殖和凋亡的信号转导系统。研究发现，Notch信号通路与细胞的分化、增殖、凋亡、粘附及表皮细胞向间质转化有密切联系，对大多数组织的正常发育至关重要，Notch信号通路的激活经典的Notch信号通路亦称CBF-1/RBP-JK依赖途径。CBF-1/RBP-JK是转录抑制因子，能够特异性地与DNA序列“CGTGGGAA”相结合，抑制下游基因的转录，Notch蛋白的活化形式是NICD，NICD进入细胞核内发挥传递信号的作用。Notch信号在肿瘤的发生和演进过程中有重要作用，紊乱的Notch信号不仅能够直接引起肿瘤的发生，而且它可通过与其他多条信号通路的交互作用，以间接的方式最终诱导肿瘤的形成。在很多组织肿瘤的发生过程中均出现了Notch信号通路的异常，在前列腺癌、乳腺癌、子宫颈癌等多种肿瘤细胞及其衍生的细胞系中，均存在Notch受体及配体的异常表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于Notch信号通路的药物筛选模型，其特征在于：包括：利用含有RBP-JK特异性结合序列的报告系统载体，及以具有组成型Notch的活性细胞为基础，构建成稳定的以Notch信号为靶点的高通量药物筛选细胞模型。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于Notch信号通路的药物筛选模型，其特征在于：包括：利用含有RBP-JK特异性结合序列的报告系统载体，及以具有组成型Notch的活性细胞为基础，构建成稳定的以Notch信号为靶点的高通量药物筛选细胞模型。


2.根据权利要求1所述的一种基于Notch信号通路的药物筛选模型，其特征在于：所述Notch的特异性结合序列为5’-GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCCTCGATGTGGGAACGGCATTGTAGCGGTGGGAACGGCATTGTAGCGGCGCGTAGATCTGCAGAAGCTTAGACACT-3’。


3.根据权利要求1所述的一种基于Notch信号通路的药物筛选模型，其特征在于：所述报告系统载体是在含有荧光素酶报告基因的报告载体多克隆位点中插入包含有RBP-JK特异性结合序列作为报告系统载体的响应序列，构建成的报告系统载体。


4.根据权利要求1所述的一种基于Notch信号通路的药物筛选模型，其特征在于：所述具有组成型Notch的活性细胞为人乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞。


5.根据权利要求1所述的以Notch为靶点的药物筛选细胞模型的构建方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：
(1)Luciferase报告系统载体的构建：
利用分子生物学方法在含有荧光素酶报告基因的报告载体pGM-Lu多克隆位点中插入包含有RBP-JK特异性结合序列，作为报告系统载体的响应序列，构建成报告系统载体，将人工合成的5’GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCCTCGATGTGGGAACGGCATTGTAGCGGTGGGAACGGCATTGTAGCGGCGCGTAGATCTGCAGAAGCTTAGACACT-3’DNA片段，以KpnI和HindⅢ的酶切位点插入到报告载体pGM-Lu中，得到的报告系...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴亚剑，刘乃玉，张斌，
申请(专利权)人：西部医学科技集团有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31