一种腐生型兰花的快繁和离体保存方法技术

本发明专利技术提供了一种腐生型兰花的快繁和离体保存方法，涉及植株繁育技术领域。所述快繁和离体保存方法以人工授粉后获得的带种子的果荚为对象，通过消毒、种子无菌萌发获得原球茎，并对其进行诱导获得根状茎，再以根状茎为对象进一步建立大根兰的离体保存体系，半年内的增殖系数达1：4，离体保存继代周期达2年左右。本发明专利技术所述快繁和离体保存方法有效地解决了腐生型兰花组培快繁问题，延长了其离体保存周期，有利于进一步对腐生型兰科种质资源的保存和开发利用，为今后的资源挖掘奠定基础。

Rapid propagation and in vitro preservation of saprophytic orchid

【技术实现步骤摘要】
一种腐生型兰花的快繁和离体保存方法
本专利技术属于植株繁育
，具体涉及一种腐生型兰花的快繁和离体保存方法。
技术介绍
大根兰(Cymbidiummacrorhizon)为兰科兰属植物，不具绿叶，是该属植物中唯一的腐生型物种，分布在我国的四川、云南、贵州和广西海拔400～2100米的林下或林缘。通常，兰花植物的种子极为细小，长约0.05～6.0mm，宽约0.01～0.9mm，每个果实所含种子数量从几千粒到几百万粒不等，但因其种子不含胚乳，在自然条件下萌发率却很低。传统上对兰科物种仍多采用分株方式进行繁殖，但效率不高。因腐生兰需要依靠与真菌共生获得养分生长，分株繁殖更是难上加难。腐生兰花具有重要的药用价值，但因其腐生的特性，野外资源储量不大。目前兰科的腐生型物种当中仅天麻实现了人工繁殖并创造了巨大价值，其他腐生兰的人工培养尚未见有成功。随着生态环境的改变和人为活动的干扰加剧，腐生兰生境极易遭到破坏，导致其处于极易灭绝的状态。“国兰”通常指的是兰属的物种，例如，春兰、寒兰和建兰等，大根兰是兰属中唯一的不能光合自养的腐生兰，对其开展相关研究，将对进一步深入研究该属的物种演化关系、基因功能缺位、新品种培育和资源利用具有重要意义。解决腐生型兰科植物的资源保护和利用等问题，关键的是先解决其种子非共生萌发、增殖培养和离体保存等问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种腐生型兰花的快繁和离体保存方法，实现人工组培快繁和种质资源的离体保存，为后续资源研究、开发、可持续利用和种质资源的交换等提供技术支持。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种腐生型兰花的快繁和离体保存方法，包括以下步骤：(1)对开花的腐生型兰花进行人工异株授粉，选择授粉后160～200d的未开裂果荚作为外植体；(2)将清洗、消毒后的外植体剥开，使种子散布在无菌萌发培养基表面进行暗培养，长出假根后得萌发种子；所述无菌萌发培养基包括以下组分的水溶液：花宝1号3g/L、维生素B60.5mg/L、维生素B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L/、肌醇100mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、椰子汁50～100mL/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L；(3)待所述萌发种子的根状茎长至0.8～1.2cm时，将所述根状茎转接至根状茎诱导和增殖培养基上进行暗培养，得快繁苗；所述根状茎诱导和增殖培养基包括以下组分的水溶液：花宝1号3g/L、维生素B60.5mg/L、维生素B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、6-BA5～10mg/L、KT2～5mg/L、椰子汁100～200mL/L、蔗糖30g/L、琼脂5.6g/L和活性炭1g/L；(4)将所述萌发种子的根状茎或所述快繁苗的根状茎移植于离体保存培养基中进行离体保存，所述离体保存培养基包括：花宝1号3g/L、维生素B60.5mg/L、维生素B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L。优选的，步骤(1)所述腐生型兰花包括大根兰(Cymbidiummacrorhizon)。优选的，步骤(2)所述清洗、消毒包括：用纱布擦洗所述外植体的表面，在无菌环境中用体积百分含量为75％的酒精浸泡1min，再用质量百分含量为0.2％的HgCl2水溶液浸泡10min，之后用无菌水冲洗5次。优选的，步骤(2)所述暗培养的时间为50～120d。优选的，步骤(2)和步骤(3)所述暗培养的温度均为25±2℃。优选的，步骤(4)所述离体保存的温度为25±2℃。本专利技术提供了一种腐生型兰花的快繁和离体保存方法，以人工授粉后获得的果荚为对象，通过消毒、种子无菌萌发获得原球茎，并对其进行诱导获得假根(根状茎)，并以根状茎为对象进一步建立大根兰的离体保存体系，半年内的增殖系数达1：4，离体保存继代周期达2年左右。本专利技术所述快繁和离体保存方法有效地解决了腐生型兰花组培快繁问题，延长了其离体保存周期，有利于进一步对腐生型兰科种质资源的保存和开发利用，为今后的资源挖掘奠定基础。附图说明图1为大根兰种子无菌萌发过程，其中A表示大根兰种子；B表示培养26d时，大根兰种子的胚开始膨大；C表示培养43d时，胚突破种皮；D/E表示培养54d时，出现假根；F表示培养到120d时，分化出根状茎；图2为经增殖诱导获得的大根兰无菌根状茎。具体实施方式本专利技术提供了一种腐生型兰花的快繁和离体保存方法，包括以下步骤：(1)对开花的腐生型兰花进行人工异株授粉，选择授粉后160～200d的未开裂果荚作为外植体；(2)将清洗、消毒后的外植体剥开，使种子散布在无菌萌发培养基表面进行暗培养，长出假根后得萌发种子；所述无菌萌发培养基包括以下组分的水溶液：花宝1号3g/L、维生素B60.5mg/L、维生素B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L/、肌醇100mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、椰子汁50～100mL/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L；(3)待所述萌发种子的根状茎长至0.8～1.2cm时，将所述根状茎转接至根状茎诱导和增殖培养基上进行暗培养，得快繁苗；所述根状茎诱导和增殖培养基包括以下组分的水溶液：花宝1号3g/L、维生素B60.5mg/L、维生素B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、6-BA5～10mg/L、KT2～5mg/L、椰子汁100～200mL/L、蔗糖30g/L、琼脂5.6g/L和活性炭1g/L；(4)将所述萌发种子的根状茎或所述快繁苗的根状茎移植于离体保存培养基中进行离体保存，所述离体保存培养基包括：花宝1号3g/L、维生素B60.5mg/L、维生素B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L。本专利技术对开花的腐生型兰花进行人工异株授粉，选择授粉后160～200d的未开裂果荚作为外植体。本专利技术所述腐生型兰花优选包括大根兰(Cymbidiummacrorhizon)。本专利技术优选在野外选择生长健壮的大根兰(Cymbidiummacrorhizon)开花植株进行人工异株授粉，更优选的选择完全展开1～2d的花朵进行授粉，采用消毒的竹牙签挑取花粉粒粘在另一株花的柱头上，然后做好标记。本专利技术在所述授粉后180d左右，大根兰的果荚变成淡黄绿色但未开裂，内含大量发育完整的种子，取该时期的果荚作为后续实验的外植体。本专利技术将清洗、消毒后的外植体剥开，使种子散布在无菌萌发培养基表面进行暗培养，长出假根后得萌发种子；所述无菌萌发培养基包括以下组分的水溶液：花宝1号3g/L、维生素B60.5mg/L、维生素B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L/、肌醇100mg/L、NAA0.1～0.5mg/L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种腐生型兰花的快繁和离体保存方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对开花的腐生型兰花进行人工异株授粉，选择授粉后160～200d的未开裂果荚作为外植体；/n(2)将清洗、消毒后的外植体剥开，使种子散布在无菌萌发培养基表面进行暗培养，长出假根后得萌发种子；所述无菌萌发培养基包括以下组分的水溶液：花宝1号3g/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L/、肌醇100mg/L、NAA 0.1～0.5mg/L、椰子汁50～100mL/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L；/n(3)待所述萌发种子的根状茎长至0.8～1.2cm时，将所述根状茎转接至根状茎诱导和增殖培养基上进行暗培养，得快繁苗；所述根状茎诱导和增殖培养基包括以下组分的水溶液：花宝1号3g/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、6-BA 5～10mg/L、KT 2～5mg/L、椰子汁100～200mL/L、蔗糖30g/L、琼脂5.6g/L和活性炭1g/L；/n(4)将所述萌发种子的根状茎或所述快繁苗的根状茎移植于离体保存培养基中进行离体保存，所述离体保存培养基包括：花宝1号3g/L、维生素B6 0.5mg/L、维生素B1 0.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、NAA 0.1～0.5mg/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L。/n...

【技术特征摘要】
1.一种腐生型兰花的快繁和离体保存方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对开花的腐生型兰花进行人工异株授粉，选择授粉后160～200d的未开裂果荚作为外植体；
(2)将清洗、消毒后的外植体剥开，使种子散布在无菌萌发培养基表面进行暗培养，长出假根后得萌发种子；所述无菌萌发培养基包括以下组分的水溶液：花宝1号3g/L、维生素B60.5mg/L、维生素B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L/、肌醇100mg/L、NAA0.1～0.5mg/L、椰子汁50～100mL/L、蔗糖20g/L和琼脂5.6g/L；
(3)待所述萌发种子的根状茎长至0.8～1.2cm时，将所述根状茎转接至根状茎诱导和增殖培养基上进行暗培养，得快繁苗；所述根状茎诱导和增殖培养基包括以下组分的水溶液：花宝1号3g/L、维生素B60.5mg/L、维生素B10.1mg/L、烟酸0.5mg/L、甘氨酸2mg/L、肌醇100mg/L、6-BA5～10mg/L、KT2～5mg/L、椰子汁100～200mL/L、蔗糖30g/L、琼脂5.6g/L和活性炭1g/L；
(4)将所述萌发种子的根状茎或所述快繁苗的根状茎移植于离体保存培养基中...

【专利技术属性】
技术研发人员：何俊，浦秀丽，李村富，杨俊波，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53