检测小肠结肠耶尔森菌的实时荧光RAA的引物、探针、试剂盒和检测方法技术

本发明专利技术提供了一种检测小肠结肠耶尔森菌的实时荧光RAA的引物、探针、试剂盒和检测方法，引物的序列中上游引物如SEQ ID NO.1所示，下游引物如SEQ ID NO.2所示；探针的序列为如SEQ ID NO.3所示；试剂盒包括上述引物、探针、缓冲液和纯化水，RAA检测方法包括如下步骤：提取样品DNA，以样品DNA为模板，利用试剂盒进行RAA扩增，并在扩增过程中进行实时荧光检测；本发明专利技术的实时荧光RAA检测方法特异性达100％，与其他物种无交叉反应，灵敏度达5.2×10

【技术实现步骤摘要】
检测小肠结肠耶尔森菌的实时荧光RAA的引物、探针、试剂盒和检测方法
本专利技术属于分子生物学检测
，具体涉及一种检测小肠结肠耶尔森菌的实时荧光RAA的引物、探针、试剂盒和检测方法。
技术介绍
小肠结肠炎耶尔森菌广泛分布在自然界，具有“嗜冷性”，在水中和低温下(4℃)能生长，为肠道中能在4℃生长繁殖的少数细菌之一。野生动物、家畜(猪、狗和猫)、牡蛎和水源中均能检出，可通过污染食物(牛奶、猪肉等)和水经粪-口途径感染或因接触感染动物而感染。除引起胃肠道症状外，它还能引起呼吸系统、心血管系统和骨骼结缔组织等疾患，甚至可引起败血症，造成死亡。该菌还是重要的食源性致病菌，很多国家都已将该菌列为进出口食品的常规检测项目。目前，传统的小肠结肠耶尔森菌检测方法依赖形态及生化特性，因此存在操作复杂繁琐、检测周期长、自动化程度低和无法批量化处理等缺点，难以满足短保质期食品快速放行、现场执法监管、食品安全突发事件应对处理以及举办重大活动时快速检测的需求。近年来，基于免疫和核酸的各种快速检测方法发展起来，免疫方法特异性和灵敏度较差，而基于核酸的方法具有快本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测小肠结肠耶尔森菌的实时荧光RAA的引物和探针，其特征在于，所述引物的序列为：/n上游引物：TACATTGGATAATGACCCTAAAGGTTTTAAC；SEQ ID NO.1；/n下游引物：GAAAGATGGCCCCATTGTTACTGAATAGTAATC；SEQ ID NO.2；/n探针的序列为：CCGTTATGAACTCGATGATAACTGGGGAGT(FAM)-THF-AT(BHQ1)-AGGTTCGTTTGCT(C3 spacer)；SEQ ID NO.3。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测小肠结肠耶尔森菌的实时荧光RAA的引物和探针，其特征在于，所述引物的序列为：
上游引物：TACATTGGATAATGACCCTAAAGGTTTTAAC；SEQIDNO.1；
下游引物：GAAAGATGGCCCCATTGTTACTGAATAGTAATC；SEQIDNO.2；
探针的序列为：CCGTTATGAACTCGATGATAACTGGGGAGT(FAM)-THF-AT(BHQ1)-AGGTTCGTTTGCT(C3spacer)；SEQIDNO.3。


2.根据权利要求1所述的引物和探针，其特征在于，上游引物为31bp，下游引物为33bp，探针为46bp，基因探针共有4个修饰基团，分别为荧光基团、四氢呋喃、淬灭基团和C3-spacer，荧光基团为FAM，淬灭基团为BHQ1，FAM和BHQ1均在T位置修饰，FAM和BHQ1中间间隔2个碱基，四氢呋喃替换其中一个碱基，C3-sapacer位于3’端末尾。


3.一种检测小肠结肠耶...

【专利技术属性】
技术研发人员：申进玲，蒋原，郭德华，赵丽娜，杨捷琳，
申请(专利权)人：上海海关动植物与食品检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：上海;31