一种双岐杆菌鉴定探针的载体的特异性引物、载体及标准曲线的构建方法技术

本发明专利技术涉及一种双岐杆菌鉴定探针的载体的特异性引物、载体及标准曲线的构建方法，所述特异性引物的序列为SEQ NO.5、SEQ NO.6。本发明专利技术载体特异性好，与双歧杆菌鉴定探针不同，该发明专利技术载体的插入序列比双歧杆菌鉴定探针产物序列特异性更好，该双歧杆菌鉴定探针只做基因序列扩增使用，配合本发明专利技术载体可制做标准曲线，且定量结果更准确。

【技术实现步骤摘要】
一种双岐杆菌鉴定探针的载体的特异性引物、载体及标准曲线的构建方法
本专利技术属于农业食品检测
，尤其是一种双岐杆菌鉴定探针的载体的特异性引物、载体及标准曲线的构建方法。
技术介绍
双歧杆菌是一个细菌属名。双歧杆菌属(Bifidobacterium)是一种革兰氏阳性、不运动、细胞呈杆状、一端有时呈分叉状、严格厌氧的细菌属，广泛存在于人和动物的消化道、阴道和口腔等生境中。双歧杆菌属的细菌是人和动物肠道菌群的重要组成成员之一，是一种重要的肠道有益微生物。作为一种生理性有益菌，双歧杆菌对人体健康具有生物屏障、营养作用、抗肿瘤作用、免疫增强作用、改善胃肠道功能、抗衰老等多种重要的生理功能。同时这种有益细菌能抑制人体有害细菌的生长，抵抗病原菌的感染，合成人体需要的维生素，促进人体对矿物质的吸收，其产生的醋酸、丙酸、丁酸和乳酸等有机酸可刺激肠道蠕动，促进排便，防止便秘、净化肠道环境、分解致癌物质，从而提高人体抗病能力。随着肠道微生物组学研究的发展，人们越来越认识到双歧杆菌的重要性。双歧杆菌在医药、食品等方面也得到了广泛地应用。因其可为人本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双岐杆菌鉴定探针的载体的特异性引物，其特征在于：所述特异性引物的序列为SEQ NO.5、SEQ NO.6。/n

【技术特征摘要】
1.一种双岐杆菌鉴定探针的载体的特异性引物，其特征在于：所述特异性引物的序列为SEQNO.5、SEQNO.6。


2.根据权利要求1所述的双岐杆菌鉴定探针的载体的特异性引物，其特征在于：所述引物序列存在于动物双歧杆菌BB-12的16SrRNA保守序列上。


3.利用如权利要求1或2所述的特异性引物构建的双岐杆菌鉴定探针的载体。


4.根据权利要求3所述的双岐杆菌鉴定探针的载体，其特征在于：构建步骤如下：
⑴双歧杆菌的培养及DNA提取
将进行增菌培养，预先将超净工作台用紫外灯照射，取双岐杆菌菌液加入到莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS液体培养基中，200rpm/min、37℃震荡过夜培养12～16h；
将增菌后的细菌以分区划线的方法接种于莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS固体平皿中，置于37℃中倒置培养12～16h；挑单个菌落，接种于装有莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS液体培养基的试管中，于200rpm/min、37℃震荡过夜培养12～16h；
提取试验菌株DNA；
⑵普通PCR扩增
在20uL体系中加入动物双歧杆菌的载体构建特异性引物，进行PCR扩增反应程序，即得双岐杆菌鉴定探针的载体：
其中，PCR扩增反应体系为：



PCR扩增反应程序：






35个循环。


5.根据权利要求4所述的双岐杆菌鉴定探针的载体，其特征在于：所述方法还包括对载体引物有效性判定的手段。


6.根据权利要求5所述的双岐杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭益文，赵一苹，郭宏，刘龙飞，丁向彬，李新，张林林，胡德宝，
申请(专利权)人：天津农学院，北京中检葆泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12