一种菊花玻璃化组培苗复壮的方法技术

本发明专利技术公开了一种菊花玻璃化组培苗复壮的方法，包括如下步骤：(1)菊花舌状花消毒接种，在诱导分化培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织，进而分化出再生植株；(2)筛选玻璃化苗复壮培养基，将分化后形成的中度玻璃化植株转接到所述玻璃化苗复壮培养基中，复壮培养后得到复壮组培苗。本发明专利技术所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法能够有效提高菊花试管苗增殖系数、良好的解决菊花增殖培养过程中发生组培苗的玻璃化现象。

【技术实现步骤摘要】
一种菊花玻璃化组培苗复壮的方法
本专利技术涉及植物生物
，具体涉及两种菊花玻璃化组培苗复壮的方法。
技术介绍
菊花(Chrysanthemummorifolium)为菊科菊属多年生宿根草本，花色花型丰富、品种多样且花期长，是我国十大传统名花和世界四大切花之一。菊花具有观赏、食用、药用等多种价值，人们最早认识菊花是从药用和饮用开始的，早在两汉时的《神农本草经》便有相关记载，因其散风清热、平肝明目和清热解毒等功效而广受喜爱。菊花传统繁殖方式多采用分株、扦插等无性繁殖方法，易受环境影响，繁殖速率低、周期长，且幼苗良莠不齐。随着市场需求的急剧增加，分株和扦插已经不能满足市场发展的需要。植物组织培养具有增殖效率高、繁殖速度快的特点，可以快速获得大量试管苗，实现菊花的规模化生产，具有很高的经济效益和社会效益。植物组织培养是将植物体的一部分接种在培养基上，使其按预定目标发育成新植株。植物组织培养由于周期短，增殖率高且能全年生产等优点，越来越多的应用于种苗生产。但长期以来，组培苗在培养过程中易出现污染、褐化、玻璃化及顽拗等现象，严重阻碍着组培技术的广泛应用。尤其是组培苗玻璃化，是植物组培过程中亟待解决的问题。菊花玻璃化组培苗矮小肿胀，整株没有节间或节间很短，叶片和嫩梢呈水浸状、半透明状或玻璃状，叶片增厚且易脆。组培苗玻璃化后因组织结构和生理功能异常，增殖系数低，生根困难，移栽难以成活，生产中的菊花玻璃化苗往往被丢弃，增加了生产成本，严重影响菊花组培苗的规模化生产。对大多数植物而言，组培苗产生玻璃化的原因是多样的，细胞分裂素浓度、培养基类型、碳源种类及含量、琼脂浓度、活性炭、高温、高湿，光照不足等因素均易导致玻璃化苗的产生。因此，降低组培苗玻璃化的常用措施有降低培养基中细胞分裂素浓度，控制适宜的温度，选择合适的碳源，使用透气性好的封口材料，适当增加琼脂浓度，及增加光照等。由于不同植物出现组培苗玻璃化的原因不尽相同，对应的预防措施也不同，有必要对菊花玻璃化组培苗展开相应的研究，形成有针对性的有效防控措施。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种成本低、操作简便的菊花玻璃化组培苗复壮的方法,能够有效提高菊花组培苗增殖系数、良好的解决菊花增殖培养过程中发生的组培苗玻璃化现象。一种菊花玻璃化组培苗复壮的方法，包括如下步骤：(1)菊花舌状花消毒接种，在诱导分化培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织，进而分化出再生植株；(2)筛选玻璃化苗复壮培养基，将分化后形成的中度玻璃化植株转接到所述玻璃化苗复壮培养基中，复壮培养后得到复壮组培苗。本专利技术所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其中，所述玻璃化苗复壮培养基为：MS基本培养基+0.2mg/L6-BA+1-5g/L活性炭+6g/L琼脂+20-40g/L蔗糖，培养容器选择100mL的玻璃三角瓶，以封口膜作为封口材料。本专利技术所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其中，所述玻璃化苗复壮培养基包括第一玻璃化苗复壮培养基和第二玻璃化苗复壮培养基，采用第一玻璃化苗复壮培养基培养10～20天后，再采用第二玻璃化苗复壮培养基培养10天，得到复壮组培苗；所述第一玻璃化苗复壮培养基为：MS基本培养基+0.2mg/L6-BA+1-5g/L活性炭+6g/L琼脂+20-40g/L蔗糖；所述第二玻璃化苗复壮培养基为：MS基本培养基+0.2mg/L6-BA+6g/L琼脂+20-40g/L蔗糖；培养容器选择100mL的玻璃三角瓶，以封口膜作为封口材料。本专利技术所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其中，步骤(1)中选取甘菊和长裂太行菊半开放到开放时期的花朵，用含少量洗洁精的自来水浸泡30min，之后用自来水冲洗60min，转至超净工作台进行灭菌处理。具体灭菌处理方法为：先用70％乙醇处理30s，无菌水冲洗3次后用4％NaClO震荡洗涤10min，最后用无菌水冲洗3-4次。接种时，将消毒后花朵置于无菌培养皿中，用镊子剥去苞片，解剖刀将总花托切去，取下花瓣，之后将分散的花瓣逐个接入固体MS培养基中，每瓶接种8-10个花瓣，进行愈伤组织的诱导培养。本专利技术所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其中，步骤(2)中所述中度玻璃化植株，具体表现为不大于1/3的叶片和茎上部玻璃化，呈透明肿胀；取所述中度玻璃化植株，剪成1.0-1.5cm小段后接入玻璃化苗复壮培养基中进行复壮培养。本专利技术所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其中，步骤(2)中玻璃化苗复壮培养基的筛选过程包括如下步骤：所用到的玻璃化苗复壮培养基以不添加任何激素的MS为基本培养基，分别以6-BA、蔗糖、琼脂、活性炭、培养容器及封口材料为试验因素，不考虑因子间的交互作用，以5因素4水平正交试验L(45)正交表设计。6-BA浓度分别设0mg/L，0.1mg/L，0.2mg/L，0.5mg/L；蔗糖用量分别为20、30、40、50g/L；琼脂用量分别为6、8、10、12g/L；活性炭用量分别为0、1、3、5g/L；不同的培养容器及封口材料设定为：200mL圆口瓶配不透气塑料盖，200mL圆口瓶配透气塑料盖，200mL圆口瓶配封口膜，100mL三角瓶配封口膜得到用于筛选的各处理培养基。将分化形成的中度玻璃化组培苗进行复壮培养，具体表现为不大于1/3的叶片和茎上部玻璃化，呈透明肿胀，剪成1.0-1.5cm小段，接种到各处理培养基中，每处理8瓶，每瓶接5株，重复3次。每隔10d进行外植体的形态观测，查看玻璃化苗恢复程度，统计恢复正常的苗数和轻度玻璃化苗数，培养30d后，统计玻璃化苗恢复率。玻璃化苗恢复率＝(轻度玻璃化苗数+已恢复正常苗数)/接种苗数×100％；轻度玻璃化表现为：上部叶片玻璃化，呈半透明水渍状，叶色较淡，茎未发生玻璃化；恢复正常的组培苗没有玻璃化，长势较为健壮。根据统计结果进行分析得到玻璃化苗复壮培养基。本专利技术所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其中，步骤(1)中所述诱导分化培养基配方为：MS基本培养基+2.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+8mg/L琼脂+30mg/L蔗糖，培养基PH值5.5-6.0，培养温度(25±1)℃，每日光照14h，10h黑暗，光照强度1600-2000Lx，每25-30d转接1次进行继代培养。本专利技术所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其中，所述菊花为甘菊或长裂太行菊。本专利技术所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其中，继代培养2～3次后进行复壮培养。本专利技术菊花玻璃化组培苗复壮的方法与现有技术不同之处在于：本专利技术菊花玻璃化组培苗复壮的方法对培养基6-BA浓度、蔗糖浓度、琼脂浓度、活性炭添加量及封口材料与甘菊和长裂太行菊玻璃化苗复壮的关系进行了研究，探索一种控制菊花试管苗玻璃化的组培复壮方法，能够有效提高菊花试管苗增殖系数、良好的解决菊花增殖培养过程中发生的组培苗玻璃化现象。下面结合附图对本专利技术的菊花玻璃化组培苗复壮的方法作进一步说明。附图说明图1为本专利技术菊花玻璃化组培苗复壮方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其特征在于：包括如下步骤：/n(1)菊花舌状花消毒接种，在诱导分化培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织，进而分化出再生植株；/n(2)筛选玻璃化苗复壮培养基，将分化后形成的中度玻璃化植株转接到所述玻璃化苗复壮培养基中，复壮培养后得到复壮组培苗。/n

【技术特征摘要】
1.一种菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)菊花舌状花消毒接种，在诱导分化培养基上进行诱导培养，获得愈伤组织，进而分化出再生植株；
(2)筛选玻璃化苗复壮培养基，将分化后形成的中度玻璃化植株转接到所述玻璃化苗复壮培养基中，复壮培养后得到复壮组培苗。


2.根据权利要求1所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其特征在于：所述玻璃化苗复壮培养基为：MS基本培养基+0.2mg/L6-BA+1-5g/L活性炭+6g/L琼脂+20-40g/L蔗糖，培养容器选择100mL的玻璃三角瓶，以封口膜作为封口材料。


3.根据权利要求1所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其特征在于：所述玻璃化苗复壮培养基包括第一玻璃化苗复壮培养基和第二玻璃化苗复壮培养基，采用第一玻璃化苗复壮培养基培养10～20天后，再采用第二玻璃化苗复壮培养基培养10天，得到复壮组培苗；
所述第一玻璃化苗复壮培养基为：MS基本培养基+0.2mg/L6-BA+1-5g/L活性炭+6g/L琼脂+20-40g/L蔗糖；
所述第二玻璃化苗复壮培养基为：MS基本培养基+0.2mg/L6-BA+6g/L琼脂+20-40g/L蔗糖；
培养容器选择100mL的玻璃三角瓶，以封口膜作为封口材料。


4.根据权利要求1所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其特征在于：步骤(1)中选取菊花半开放到开放时期的花蕾，用含少量洗洁精的自来水浸泡30min，之后用自来水冲洗60min，转至超净工作台进行灭菌处理，具体灭菌处理方法为：先用70％乙醇处理30s，无菌水冲洗3次后用4％NaClO震荡洗涤10min，最后用无菌水冲洗3-4次，接种时，将消毒后的花朵置于无菌培养皿中，用镊子剥去苞片，解剖刀将总花托切去，取下花瓣，之后将分散的花瓣逐个接入固体MS培养基中，每瓶接种8-10个花瓣，进行愈伤组织的诱导培养。


5.根据权利要求4所述的菊花玻璃化组培苗复壮的方法，其特征在于：步骤(2)中所述中度玻璃化植株，具体表现为不大于1/3的叶片和茎上部玻璃化，呈透明肿胀；取所述中度玻璃化植株，剪成1.0-1.5cm小段后接入玻璃化苗复壮培养基中进...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄丛林，黄昕蕾，刘华，罗昌，陈东亮，程曦，陈菲，苏国辉，黄敦辉，
申请(专利权)人：北京农业生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：北京;11