一种通过不定芽直接萌发途径获得水曲柳再生植株的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过不定芽直接萌发途径获得水曲柳再生植株的方法，将水曲柳种子浸泡24h，去掉外种皮，表面消毒进行预培养，此时可以加柠檬酸钾处理；之后取下胚轴接种在不定芽诱导培养基上，暗培养2d下胚轴开始膨大，5d顶端形成突起，11d形成芽点，芽点生成率最高达到82.1％；将材料转入弱光下培养，芽点先生成叶片后生成不定芽，生成率最高为91.6％；之后在正常光照下通过两步法进行伸长培养，最终获得水曲柳再生植株。该方法的建立，可用于濒危植物水曲柳的保育，提高种群数量；也可以通过转基因方式改良水曲柳繁殖体系；还可以对水曲柳不定芽发育过程中相关基因的调控网络进行研究。

【技术实现步骤摘要】
一种通过不定芽直接萌发途径获得水曲柳再生植株的方法
本专利技术属于植物良种快繁
，具体地说，涉及一种通过不定芽直接萌发途径获得水曲柳再生植株的方法。
技术介绍
水曲柳(FraxinusmandshuricaRupr.)为木犀科白蜡树属落叶乔木。是东地区重要的珍贵阔叶树种，分布范围较广。主要分布于小兴安岭、长白山、辽宁东部山地，日本的北海道、本州，朝鲜半岛等地。生长迅速、材质优良、强度适中，木材利用价值极高，是著名的军用材种和高级的家具用材。但此树种的资源历来非常贫乏，加之长期的不合理地过渡采伐利用，其资源已尽枯竭。水曲柳己被列为渐危种。水曲柳主要用种子繁殖，也可用扦插繁殖和萌蘖更新。水曲柳是表现出显著发芽缓慢的树种之一。如果播种成熟的干燥种子，需要2年左右的时间才能发芽。同时种子繁殖有受结实大小年的影响等缺点；而萌蘖更新受伐根有无、数量、采伐季节等因素的制约；扦插繁殖因采条母树的年龄不同表现出极大的差异，因此，研究者从组织培养的角度研究扩繁水曲柳。利用水曲柳叶柄、未成熟胚和成熟胚的不完整子叶和下胚轴为外植体进行愈伤组织诱导，获得愈伤组织，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过不定芽直接萌发途径获得水曲柳再生植株的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)外植体的表面消毒：将健康饱满无损害的水曲柳种子浸泡24h，去掉外种皮，用70％的酒精消毒30s后、转入10％的次氯酸钠溶液中消毒13min，无菌水冲洗5-6次，吸干水分后用刀切开种子，取出合子胚；/n(2)外植体的预培养：将步骤(1)中取出的合子胚接种在不同预培养的培养基(WPM+10-30g·L

【技术特征摘要】
1.一种通过不定芽直接萌发途径获得水曲柳再生植株的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)外植体的表面消毒：将健康饱满无损害的水曲柳种子浸泡24h，去掉外种皮，用70％的酒精消毒30s后、转入10％的次氯酸钠溶液中消毒13min，无菌水冲洗5-6次，吸干水分后用刀切开种子，取出合子胚；
(2)外植体的预培养：将步骤(1)中取出的合子胚接种在不同预培养的培养基(WPM+10-30g·L-1蔗糖+5.6-8.0g·L-1琼脂，或WPM+10-30g·L-1蔗糖+5.6-8.0g·L-1琼脂+1-10g·L-1柠檬酸钾，pH均为5.8。)上，温度为25℃，暗培养，0-7d；
(3)外植体的切割：无菌条件下将步骤(2)中预培养的胚根和胚轴一起切下，确保胚芽全部切掉；
(4)诱导水曲柳芽点的生成：将步骤(3)中切下的胚轴平放于诱导培养基(WPM+0.01-2.0mg·L-1TDZ或WPM+0.01-2.0mg·L-1TDZ+0.1-3.0mg·L-1BA，这两种培养基均含有10-30g·L-1蔗糖，5.6-8.0g·L-1琼脂，pH均为5.8)上，25℃下暗培养2-20d，获得水曲柳芽点；
(5)水曲柳芽点状态调整和保持：将步骤(4)中的芽点转入弱光下培养(半光半暗)，光照强度为10μmol·m-2·s-1，光照时间为14h...

【专利技术属性】
技术研发人员：齐凤慧，詹亚光，肖英，刘林，曾凡锁，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23