热不稳定蛋白酶制造技术

本发明专利技术提供了一种组合物，所述组合物包括蛋白酶或其酶活性片段，所述蛋白酶包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列或包括与SEQ ID NO:1至少约70％相同的氨基酸序列，其中i)所述组合物中游离钙的浓度≤约80μM；或ii)所述组合物中单价盐的浓度≥约20mM。在这种条件下，所述蛋白酶和其酶活性片段是可诱导地热不稳定的。本发明专利技术进一步提供了样品，所述样品包括一种或多种多肽以及蛋白酶或其酶活性片段，所述蛋白酶包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列或包括与SEQ ID NO:1至少约70％相同的氨基酸序列，其中i)所述样品中游离钙的浓度≤约80μM；或ii)所述样品中单价盐的浓度≥约20mM。本发明专利技术进一步提供了方法，所述方法包括灭活这种蛋白酶或其酶活性片段，其中所述方法包括加热所述样品以灭活所述蛋白酶或酶活性片段的步骤，并且其中i)所述样品中游离钙的浓度≤约80μM；或ii)所述样品中单价盐的浓度≥约20mM。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】热不稳定蛋白酶本专利技术涉及包括具有可诱导热不稳定性的蛋白酶的组合物以及其用途，特别是在核酸分离中的用途。蛋白酶(proteinase)(也称为肽酶(peptidase)、朊酶(protease)和蛋白水解酶)能够水解蛋白质中的肽键。蛋白酶在工业、生物技术和分子生物学研究技术中广泛用于各种各样的过程中。例如，蛋白酶用于核酸纯化期间不需要的蛋白质的消化、重组抗体片段的制备、肽测序以及蛋白质组学中的蛋白质的蛋白水解消化。为了成功地从样品中提取核酸，细胞壁/细胞膜的裂解是必要的。可以采用各种物理或化学方法，这可以通过添加朊酶来增强。然后通过应用去垢剂或表面活性剂或通过在低渗溶液中的渗透裂解来实现膜脂的去除。使用蛋白酶从样品中去除蛋白质然后被认为是最佳实践。蛋白酶通过水解肽键来消化存在于样品中的污染即不需要的蛋白质、多肽和肽。蛋白酶也降解可以存在于样品中并且可以以其它方式降解核酸的任何核酸酶和其它酶。在制备用于扩增反应(例如，PCR和RT-PCR)的核酸样品时的核酸纯化期间，蛋白质的去除尤其重要。在细胞中，核酸通常与蛋白质结合而存在。例如，真核细胞中的基因组DN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物，其包括蛋白酶或其酶活性片段，所述蛋白酶包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列或包括与SEQ ID NO:1至少约70％相同的氨基酸序列，其中/ni)所述组合物中游离钙的浓度≤约80μM；或/nii)所述组合物中单价盐的浓度≥约20mM。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180307 GB 1803654.11.一种组合物，其包括蛋白酶或其酶活性片段，所述蛋白酶包括SEQIDNO:1的氨基酸序列或包括与SEQIDNO:1至少约70％相同的氨基酸序列，其中
i)所述组合物中游离钙的浓度≤约80μM；或
ii)所述组合物中单价盐的浓度≥约20mM。


2.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物是用于应用于样品的溶液，所述样品包括一种或多种多肽，优选地所述组合物的体积≤200μl。


3.一种样品，其包括一种或多种多肽以及蛋白酶或其酶活性片段，所述蛋白酶包括SEQIDNO:1的氨基酸序列或包括与SEQIDNO:1至少约70％相同的氨基酸序列，其中
i)所述样品中游离钙的浓度≤约80μM；或
ii)所述样品中单价盐的浓度≥约20mM。


4.一种灭活样品中的蛋白酶或其酶活性片段的方法，所述蛋白酶包括SEQIDNO:1的氨基酸序列或包括与SEQIDNO:1至少约70％相同的氨基酸序列，其中所述方法包括加热所述样品以灭活所述蛋白酶或酶活性片段的步骤，并且其中
i)所述样品中游离钙的浓度≤约80μM；或
ii)所述样品中单价盐的浓度≥约20mM。


5.一种消化样品中的多肽的方法，所述方法包括以下步骤：
a)使所述样品与蛋白酶或其酶活性片段接触，所述蛋白酶包括SEQIDNO:1的氨基酸序列或包括与SEQIDNO:1至少约70％相同的氨基酸序列；
b)在允许至少部分消化所述样品中的多肽的条件下温育所述样品；以及
c)加热所述样品以灭活所述蛋白酶或其酶活性片段；其中
i)所述样品中游离钙的浓度≤约80μM；或
ii)所述样品中单价盐的浓度≥约20mM。


6.一种从样品中分离或纯化感兴趣的生物分子的方法，其中所述样品包括一种或多种污染多肽，所述方法包括：
a)使所述样品与蛋白酶或其酶活性片段接触，所述蛋白酶包括SEQIDNO:1的氨基酸序列或包括与SEQIDNO:1至少约70％相同的氨基酸序列；
b)在允许至少部分消化所述样品中的多肽的条件下温育所述样品；以及
c)加热所述样品以灭活所述蛋白酶或其酶活性片段，其中
i)所述样品中游离钙的浓度≤约80μM；或
ii)所述样品中单价盐的浓度≥约20mM；以及
d)任选地从所述样品中去除所述感兴趣的生物分子。


7.一种从通过一个或多个肽键与感兴趣的生物分子融合的第二分子中释放所述感兴趣的生物分子的方法，所述方法包括：
a)使所述样品与蛋白酶或其酶活性片段接触，所述蛋白酶包括SEQIDNO:1的氨基酸序列或包括与SEQIDNO:1至少约70％相同的氨基酸序列；
b)在允许通过消化所述肽键中的一个或多个肽键来释放所述感兴趣的生物分子的条件下温育所述样品；以及
c)加热所述样品以灭活所述蛋白酶或其酶活性片段，其中
i)所述样品中游离钙的浓度≤约80μM；或
ii)所述样品中单价盐的浓度≥约20mM；以及
任选地从所述样品中去除所述感兴趣的生物分子。


8.根据权利要求1到7中任一项所述的组合物、样品或方法，其中：
i)所述组合物或样品中游离钙的浓度≤约80μM；并且
ii)所述组合物或样品中单价盐的浓度≥约20mM。


9.根据权利要求1到8中任一项所述的组合物、样品或方法，其中
i)所述组合物或样品中游离钙的浓度≤约80μM，并且其中所述组合物或样品基本上不含EDTA，优选地基本上不含钙螯合剂；或
ii)所述组合物或样品中单价盐的浓度≥约20mM。


10.根据权利要求1到9中任一项所述的组合物、样品或方法，其中：
i)所述组合物或样品中游离钙的浓度为1到80μM；和/或
ii)所述组合物或样品中单价盐的浓度≥约20mM。


11.根据权利要求1到10中任一项所述的组合物、样品或方法，其中
i)所述组合物或样品中游离钙的浓度≤约35μM；和/或
ii)所述组合物或样品中单价盐的浓度≥约40mM。


12.根据权利要求1到11中任一项所述的组合物、样品或方法，其中所述样品的pH为6.5到9.5，优选地7.5到8.5。


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【专利技术属性】
技术研发人员：B·K·斯特里伯尼，C·佩德森，J·R·亨利克森，O·拉内斯，M·S·洛伦森，
申请(专利权)人：北极酶AS公司，
类型：发明
国别省市：挪威;NO