末端脱氧核苷酸转移酶的变体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的变体，该变体(i)包含如SEQ ID N°2中列出的氨基酸序列或功能等同序列，以及在对应于残基C302的位置处的至少一个氨基酸取代或功能等同残基，其中该位置参考SEQ ID N°1中列出的氨基酸序列编号，(ii)能够在没有模板的情况下合成核酸片段，以及(iii)能够将修饰的核苷酸掺入到核酸片段中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】末端脱氧核苷酸转移酶的变体及其用途专利
本专利技术涉及末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的变体及其用于在没有模板的情况下酶促合成核酸序列的用途。更特别地，本专利技术涉及适于掺入修饰的核苷酸的此类变体，用于合成具有确定的或受控的序列的核酸分子。背景在过去的40年中，基于固相亚磷酰胺化学的核酸的从头化学合成方法得到了广泛使用和完善。该技术由四步链延伸循环构成，每个循环将一个碱基添加到附接到固体支持基质的生长的寡核苷酸链上。尽管在过去的几十年期间，该技术一直是合成核酸的首选方法，但其具有一些明显的限制：其需要使用多种溶剂和试剂，并且由于化学反应效率的限制，合成的寡核苷酸的长度通常不超过150-200个碱基。此外，这些短片段需要被进一步组装以提供期望的DNA序列。化学合成的一种替代方法包括使用将可逆的终止剂(terminator)修饰的核苷酸添加到生长的单链的核酸链中的非模板依赖性DNA聚合酶。这允许以受控的方式每个循环添加一种类型的核苷酸。一些天然的酶能够在缺乏模板的情况下作用于天然核苷酸，并且因此能够以不受控制的方式催化核酸的合成。然而，它本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的变体，所述变体(i)包含如SEQ ID N°2中列出的氨基酸序列或功能等同序列，以及在对应于残基C302的位置处的至少一个氨基酸取代或功能等同残基，其中所述位置参考SEQ ID N°1中列出的氨基酸序列编号，(ii)能够在没有模板的情况下合成核酸片段，以及(iii)能够将修饰的核苷酸掺入到所述核酸片段中。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180108 EP 18305006.11.一种末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的变体，所述变体(i)包含如SEQIDN°2中列出的氨基酸序列或功能等同序列，以及在对应于残基C302的位置处的至少一个氨基酸取代或功能等同残基，其中所述位置参考SEQIDN°1中列出的氨基酸序列编号，(ii)能够在没有模板的情况下合成核酸片段，以及(iii)能够将修饰的核苷酸掺入到所述核酸片段中。


2.根据权利要求1所述的TdT的变体，其中所述取代选自C302G/R/P/A/V/S/N/Q/D，优选地选自C302G/R。


3.根据权利要求1或2所述的TdT的变体，其中所述变体还在对应于选自M192、L260、R336、D379、R454和E457的残基的位置处包含至少一个氨基酸取代或功能等同残基。


4.根据权利要求3所述的TdT的变体，其中所述变体还在对应于选自M192、L260、R336、D379、R454和E457的残基的位置处包含至少两个氨基酸取代，优选地至少三个，更优选地至少四个，甚至更优选地至少五个，并且更优选地六个氨基酸取代。


5.根据权利要求3或4所述的TdT的变体，其中所述取代选自M192R/Q/G/A/V/D/N/H/E、L260P/M/E/N/F/K/D/A/G、R336N/L/K/H/G/D/A/P、D379V/A/G/N/E/R/H/K/T、R454P/N/A/L/K/H/G/D和E457N/T/S/L/V/K/H/G/D，优选地选自M192R/Q、L260P、R336L/N、D379V、R454P/N和E457N/L/T/S。


6.根据前述权利要求中任一项所述的TdT的变体，其中所述变体还在对应于选自T340、G413、H416、E418、W450和A510的残基的位置处包含至少一个取代或功能等同残基，所述取代优选地选自T340S/N/Q/C/G/M/K/D、G413L/S/P/R、H416D、E418A/V、W450Y/F/...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊莉斯·钱皮恩，米哈伊尔·索斯金，托马斯·伊贝尔特，马克·德拉吕，
申请(专利权)人：DNA斯克瑞普特公司，巴斯德研究所，国家科学研究中心，
类型：发明
国别省市：法国;FR