使用3’-O-氨基-2’-脱氧核糖核苷三磷酸单体的多核苷酸酶促合成制造技术

技术编号:40197612 阅读:31 留言:0更新日期:2024-01-27 00:01
本发明专利技术涉及对采用3’‑O‑氨基‑核苷三磷酸单体的多核苷酸酶促合成方法的改善,其中作为O‑取代的羟胺或多羟胺的醛清除剂减少或防止生长的多核苷酸链的伪加帽,从而增加全长产物的得率。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】


技术介绍

1、对多核苷酸合成的酶促方法的兴趣增加,这不仅是因为在许多领域,如合成生物学、crispr-cas9应用和高通量测序,对合成多核苷酸的需求增加,还因为多核苷酸合成的化学方法的局限性,如产物长度的上限、湿度敏感单体的使用和环境不友好溶剂的使用,jensen et al,biochemistry,57:1821-1832(2018)。

2、目前,用于dna和rna合成的大多数酶促方法采用无模板聚合酶,其用于实现重复循环的将3’-o-保护的核苷三磷酸延伸到引发剂或延伸链并去保护,直到获得期望序列的多核苷酸,例如hiatt和rose,国际专利公开wo96/07669。champion et al已经设计制造了tdt变体,该变体有效地整合到由steven benner开发的生长多核苷酸链可逆保护的3’-o-氨基核苷三磷酸单体中(champion et al,美国专利10752887和国际专利公开wo2020/099451;benner et al,美国专利7544794、8034923、8212020、10472383,以及hutter et本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.合成多核苷酸的方法,所述方法包括以下步骤:

2.如权利要求1所述的方法,其中通过至少一种合成试剂将所述有效量的至少一种醛清除剂递送至所述反应混合物。

3.如权利要求1-2中任一项所述的方法,其中所述有效量的所述醛清除剂通过所述合成试剂递送至包含3’-O-氨基核苷三磷酸或不依赖模板的聚合酶或二者的混合物的反应混合物。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述多核苷酸是DNA,并且其中所述不依赖模板的聚合酶是末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法,其中所述醛清除剂是O-取代的单羟胺或多羟胺。

...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.合成多核苷酸的方法,所述方法包括以下步骤:

2.如权利要求1所述的方法,其中通过至少一种合成试剂将所述有效量的至少一种醛清除剂递送至所述反应混合物。

3.如权利要求1-2中任一项所述的方法,其中所述有效量的所述醛清除剂通过所述合成试剂递送至包含3’-o-氨基核苷三磷酸或不依赖模板的聚合酶或二者的混合物的反应混合物。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法,其中所述多核苷酸是dna,并且其中所述不依赖模板的聚合酶是末端脱氧核苷酸转移酶(tdt)。

5.如权利要求1-...

【专利技术属性】
技术研发人员:阿德里安·霍根
申请(专利权)人:DNA斯克瑞普特公司
类型:发明
国别省市:

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1