无内源HLA基因背景的抗原递呈细胞系的构建方法、抗原递呈细胞系及其用途技术

提供一种无内源HLA基因背景的抗原递呈细胞系的构建方法，包括：使用CRISPR/Cas9基因编辑系统，对HLA分型单一的C1R抗原递呈细胞进行内源HLA‑C基因敲除，其中C1R抗原递呈细胞中包含HLA‑A、HLA‑B和HLA‑C基因，其中HLA‑A不表达，HLA‑B基本不表达；和该方法得到的无内源HLA基因背景的抗原递呈细胞系。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】无内源HLA基因背景的抗原递呈细胞系的构建方法、抗原递呈细胞系及其用途
本专利技术涉及免疫
，尤其是抗原递呈细胞
，具体涉及一种无内源HLA基因背景的抗原递呈细胞系的构建方法、抗原递呈细胞系及其用途。
技术介绍
当今世界，癌症发病率逐年上升，免疫治疗被认为是最有可能治愈肿瘤的手段之一。肿瘤特异的免疫靶点是免疫治疗安全有效的关键。传统的抗体和CAR-T疗法所针对的肿瘤细胞表面蛋白只占实体瘤所有可能靶点的20-25％，而人细胞表面的HLA分子可呈递所有的细胞内抗原让T细胞识别，因而靶向HLA分子呈递的抗原表位，可将免疫治疗可使用的靶点扩大至传统方法的4倍。因此，特定分型的HLA抗原呈递细胞对于新抗原研究极为重要，如何降低其他HLA分子的干扰也成为一个重要问题。目前常用的抗原呈递工具细胞为K562细胞，通常是直接在K562中过表达所需分型的HLA分子。现有技术的缺点在于，由于K562细胞含有自身的HLA分子，直接在K562细胞中过表达所获得，用于抗原递呈时，会有背景干扰，造成结果假阳性等。
技术实现思路
本专利技术解决了抗原递本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种无内源HLA基因背景的抗原递呈细胞系的构建方法，其特征在于，所述方法包括：使用CRISPR/Cas9基因编辑系统，对HLA分型单一的C1R抗原递呈细胞进行内源HLA-C基因敲除，其中所述C1R抗原递呈细胞中包含HLA-A、HLA-B和HLA-C基因，其中HLA-A不表达，HLA-B基本不表达。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】一种无内源HLA基因背景的抗原递呈细胞系的构建方法，其特征在于，所述方法包括：使用CRISPR/Cas9基因编辑系统，对HLA分型单一的C1R抗原递呈细胞进行内源HLA-C基因敲除，其中所述C1R抗原递呈细胞中包含HLA-A、HLA-B和HLA-C基因，其中HLA-A不表达，HLA-B基本不表达。


根据权利要求1所述的无内源HLA基因背景的抗原递呈细胞系的构建方法，其特征在于，通过向所述C1R抗原递呈细胞中导入Cas9-sgRNA蛋白复合体(RNP)的方式实现内源HLA-C基因敲除，其中sgRNA中包含一段识别序列GTGAACCTGCGGAAACTGCG(SEQ ID NO：1)。


根据权利要求2所述的无内源HLA基因背景的抗原递呈细胞系的构建方法，其特征在于，所述sgRNA由体外转录模板在体外转录获得。


根据权利要求3所述的无内源HLA基因背景的抗原递呈细胞系的构建方法，其特征在于，所述体外转录模板是通过PCR扩增包含gRNA骨架的质粒得到的，其中PCR扩增使用的引物包括所述识别序列SEQ ID NO：1和T7启动子序列。


根据权利要求1-4任一项所述的无内源HLA基因背景的抗原递呈细胞系的构建方法，其特征在于，所述方法包括：
(1)通过PCR扩增获得靶向HLA-C基因的sgRNA的体外转录模板，其中所述PCR扩增的引物包括：
HLA-C0401 gRNA FW：
TAATACGACTCACTATAGTGAACCTGCGGAAACTGCGGTTTTAGA...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵正琦，高千千，段昆，王飞，丁仁鹏，徐曲苗，董旋，朱琳楠，葛玉萍，李波，侯勇，
申请(专利权)人：深圳华大生命科学研究院，武汉华大吉诺因生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44