一种利用单碱基编辑器SpRY-BE4制备CD163基因编辑猪的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用单碱基编辑器SpRY‑BE4制备CD163基因编辑猪的方法。本发明专利技术提供了为对猪离体成纤维细胞基因组的CD163基因进行基因编辑，使双等位基因CD163的E3外显子的第228位碱基均由C定点突变为T，且突变后形成TGA终止子使所述E3外显子提前终止表达，得到CD163双等位基因突变细胞；所述E3外显子的核苷酸序列为序列2。本发明专利技术获得的CD163双等位基因敲除猪具有抗PRRSV病毒的能力，表明本发明专利技术制备CD163双等位基因敲除猪方法可以得到抗PRRSV病毒的猪。

【技术实现步骤摘要】
一种利用单碱基编辑器SpRY-BE4制备CD163基因编辑猪的方法
本专利技术属于生物
，涉及一种利用单碱基编辑器SpRY-BE4制备CD163基因编辑猪的方法。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS)是一种全球性的、传染性强的、危害性大的猪病毒性疾病，其在所有年龄的猪中临床症状不同，但主要是导致妊娠母猪的晚期堕胎、死胎和木乃伊胎以及仔猪的呼吸道疾病。其病原体是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，此病毒主要有两个类型I和II。PRRSV是一种单股正义RNA病毒,是套式病毒目(Nidovirales)、动脉炎病毒科(Arteriviridae)、动脉炎病毒属(Arterivirus)的成员,基因组全长15kb，共包含11个开放阅读框。研究发现PRRSV的唯一天然宿主是猪，可感染猪体内已分化的血液单核细胞和猪肺泡巨噬细胞。Calvert等人通过从猪肺泡巨噬细胞构建的cDNA文库中筛选PRRSV易感的基因而找到了CD163，且CD163只在单核/巨噬本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备CD163双等位基因突变细胞的方法，为对猪离体成纤维细胞基因组的CD163基因进行基因编辑，使双等位基因CD163的E3外显子的第228位碱基均由C定点突变为T，且突变后形成TGA终止子使所述E3外显子提前终止表达，得到CD163双等位基因突变细胞；/n所述E3外显子的核苷酸序列为序列2。/n

【技术特征摘要】
1.一种制备CD163双等位基因突变细胞的方法，为对猪离体成纤维细胞基因组的CD163基因进行基因编辑，使双等位基因CD163的E3外显子的第228位碱基均由C定点突变为T，且突变后形成TGA终止子使所述E3外显子提前终止表达，得到CD163双等位基因突变细胞；
所述E3外显子的核苷酸序列为序列2。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述基因编辑采用单碱基编辑器SpRY-BE4进行；
所述单碱基编辑器SpRY-BE4包括用于点突变的rAPOBEC1-XTEN-Cas9n-UGI-NLS蛋白和sgRNA；
所述sgRNA的靶序列为序列3第1-20位。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述单碱基编辑器SpRY-BE4为如下1）和2）：
1）rAPOBEC1-XTEN-Cas9n-UGI-NLS蛋白或其mRNA或表达该蛋白的重组载体；
2）所述sgRNA；所述sgRNA的核苷酸序列为序列表中序列3或序列8。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述基因编辑为将所述rAPOBEC1-XTEN-Cas9n-UGI-NLS蛋白mRNA和所述sgRNA导入述离体猪成纤维细胞系中，得到CD163双等位基因突变细胞。


5.一种制备CD163双等位基因突变猪的方法，为将权利要求1-4任一所述方法制备的所述CD163双等位基因突变细胞通过体细胞核移植入母猪体内，生产的子代即...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈秋平，孙照霖，李垲，
申请(专利权)人：北京首农未来生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11