一种miRNA高表达在促进脐带间充质干细胞体外增殖和成骨分化方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种miRNA高表达在促进脐带间充质干细胞体外增殖和成骨分化方面的应用。miRNAs在细胞中扮演着重要角色。本发明专利技术发现，miR‑575在hUCMSCs的增殖和成骨分化中扮演着重要角色，提高miR‑575的表达水平可以有效促进hUCMSCs的体外增殖和成骨分化，因此，可以通过干预提高hUCMSCs中miR‑575表达的方法促进其体外增殖和成骨分化，可以以miR‑575为靶标筛选具有促进hUCMSCs体外增殖和成骨分化的成分。

【技术实现步骤摘要】
一种miRNA高表达在促进脐带间充质干细胞体外增殖和成骨分化方面的应用
本专利技术属于生物领域，涉及干细胞，具体涉及一种miRNA高表达在促进脐带间充质干细胞体外增殖和成骨分化方面的应用。
技术介绍
间充质干细胞凭其自我更新能力与多向分化潜能，目前已被广泛应用于组织工程与再生医学领域，来源广泛，体外易于操作，因此间充质干细胞治疗具有广阔前景，其中，人脐带来源间充质干细胞(humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，hUCMSCs)被认为是具备更高可塑性和更低免疫原性的原始间充质干细胞群，方便易取。大量研究证实hUCMSCs经诱导培养能向多种成体细胞分化，在体外可以分化为骨细胞、软骨细胞、肝细胞、心肌细胞等，在体内可以分化为多巴胺能神经元、骨骼肌细胞、内皮细胞、胰岛细胞等。hUCMSCs在新兴转化医学中展现出广阔的应用前景。基于hUCMSCs的上述多向分化能力，hUCMSCs在骨组织工程人工骨的种子细胞来源问题上提供了新的可行性途径。微小RNA(microRNA，miRNA)是一种存在于病毒和高等生物中进化高度保守的内源性非编码RNA。每个miRNA可以调控多个靶基因，而几个miRNA可协同调控同一靶基因，miRNA实现的是一种宏观而又精细的调控，许多生理病理特征都是与miRNA介导的调控有关。研究表明，miRNA在hUCMSCs的分化调控中也具有重要作用。张燕等探究了miR-92b-3p在人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)成骨分化过程中的作用及其作用机制，发现miR-92b-3p在hUCMSCs成骨过程中表达量较对照组明显升高(P＜0.05)；过表达miR-92b-3p能促进hUCMSCs体外成骨分化及体内的异位成骨能力(P＜0.05)；而抑制miR-92b-3p则能降低hUCMSCs体外成骨分化(P＜0.05)，最后得出结论：miR-92b-3p可通过抑制DKK1表达，促进hUCMSCs成骨分化(miR-92b-3p促进人脐带间充质干细胞的成骨分化，基础医学与临床，第36卷第5期，2016年5月)。miRNAs种类繁多，更多在hUCMSCs成骨分化中扮演重要角色的miRNAs正陆续被发现。
技术实现思路
本专利技术的意图在于提供一种miRNA高表达在促进脐带间充质干细胞体外增殖和成骨分化方面的应用，所述miRNA为miR-575。技术方案如下：一种通过提高miR-575表达水平的方法在促进脐带间充质干细胞体外增殖和成骨分化方面的应用。在具体实施方式中，与Control组相比，miR-575mimic组hUCMSCs的体外增殖活性显著升高，miR-575inhibitor组hUCMSCs的体外增殖活性显著降低，miR-575NCmimic组和miR-575NCinhibitor组hUCMSCs的体外增殖活性无显著差异；与Control组相比，miR-575mimic组成骨诱导后Runx2、OCN蛋白表达水平均显著上调，miR-575inhibitor组成骨诱导后Runx2、OCN蛋白表达水平均显著下调，miR-575NCmimic组和miR-575NCinhibitor组成骨诱导后Runx2、OCN蛋白表达水平无显著差异。一种促进脐带间充质干细胞体外增殖和成骨分化的方法，在脐带间充质干细胞培养过程中添加提高miR-575表达水平的成分。在具体实施方式中，与Control组相比，miR-575mimic组hUCMSCs的体外增殖活性显著升高，miR-575inhibitor组hUCMSCs的体外增殖活性显著降低，miR-575NCmimic组和miR-575NCinhibitor组hUCMSCs的体外增殖活性无显著差异；与Control组相比，miR-575mimic组成骨诱导后Runx2、OCN蛋白表达水平均显著上调，miR-575inhibitor组成骨诱导后Runx2、OCN蛋白表达水平均显著下调，miR-575NCmimic组和miR-575NCinhibitor组成骨诱导后Runx2、OCN蛋白表达水平无显著差异。miR-575作为为靶标筛选具有促进hUCMSCs体外增殖和成骨分化的成分的用途。技术效果：miRNAs在细胞中扮演着重要角色。本专利技术发现，miR-575在hUCMSCs的增殖和成骨分化中扮演着重要角色，提高miR-575的表达水平可以有效促进hUCMSCs的体外增殖和成骨分化，因此，可以通过干预提高hUCMSCs中miR-575表达的方法促进其体外增殖和成骨分化，可以以miR-575为靶标筛选具有促进hUCMSCs体外增殖和成骨分化的培养基添加剂。附图说明图1为各组OD值和增殖率，与Control组相比，miR-575mimic组hUCMSCs的体外增殖活性显著升高，miR-575inhibitor组hUCMSCs的体外增殖活性显著降低，miR-575NCmimic组和miR-575NCinhibitor组hUCMSCs的体外增殖活性无显著差异。图2为转染后各组成骨分化相关基因的相对表达水平，与Control组相比，miR-575mimic组成骨诱导后Runx2mRNA、OCNmRNA相对表达水平均显著上调，miR-575inhibitor组成骨诱导后Runx2mRNA、OCNmRNA相对表达水平均显著下调，miR-575NCmimic组和miR-575NCinhibitor组成骨诱导后Runx2mRNA、OCNmRNA相对表达水平无显著差异。图3为成骨诱导后各组Runx2、OCN蛋白表达水平，与Control组相比，miR-575mimic组成骨诱导后Runx2、OCN蛋白表达水平均显著上调，miR-575inhibitor组成骨诱导后Runx2、OCN蛋白表达水平均显著下调，miR-575NCmimic组和miR-575NCinhibitor组成骨诱导后Runx2、OCN蛋白表达水平无显著差异。具体实施方式下面通过具体实施例和附图介绍本专利技术的实质性内容，但不作为本专利技术保护范围的限制。一、试验材料人脐带组织取自健康足月顺产胎儿，置于含有1％双抗的无菌PBS溶液中，8h内使用。α-MEM培养基、胎牛血清FBS和0.25％胰蛋白酶购自美国Gibco公司。FITC或PE标记的小鼠抗人CD90、CD105、CD73、CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR抗体及各相关同型对照购自美国eBioscince公司。miR-575mimic、miR-575NCmimic、miR-575inhibitor和miR-575NCinhibitor由上海吉玛生物技术有限公司合成。MTT试验试剂购自碧云天。人脐带间充质干细胞成骨诱导分化培养基购自广州赛业生物科技有限公司。二、试验方法1、脐带间充质干细胞的分离、培养和鉴定此部分试验内容为本领域常规操作，方法同专利技术名称为“一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过提高miR-575表达水平的方法在促进脐带间充质干细胞体外增殖和成骨分化方面的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种通过提高miR-575表达水平的方法在促进脐带间充质干细胞体外增殖和成骨分化方面的应用。


2.一种促进脐带间充质干细胞体外增殖和成骨分化的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：王蒙，谭睿，陈昕航，
申请(专利权)人：淮安泰凯睿医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32