ABC转运蛋白在农业害螨防治及Bt抗性治理上的应用制造技术

本发明专利技术公开了ABC转运蛋白在农业害螨防治及Bt抗性治理上的应用。属于生物技术领域。与现有技术相比，本发明专利技术取得的有益效果为：(1)特异性干扰农业害螨专一基因，对高等动物和人类安全；(2)杀螨具有专一性，对非靶标生物安全；(3)对环境无毒无害。

【技术实现步骤摘要】
ABC转运蛋白在农业害螨防治及Bt抗性治理上的应用
本专利技术涉及生物
，更具体的说是涉及ABC转运蛋白在农业害螨防治及Bt抗性治理上的应用。
技术介绍
农业害螨属于节肢动物门，蛛形纲，蜱螨亚纲，真螨目的小型及微型动物，广泛分布于各种农林作物上，是当今世界农林作物上的主要害虫，其危害主要表现在对棉花、林果、玉米等农作物的危害上。近些年棉田生态环境和农田生态环境也逐步发生了改变，致使害螨连年爆发，成为限制农作物高产优质的关键因子。多年以来，我国对农业害螨的防治一向以化学防治为主。由于化学杀虫剂的频繁使用，一方面大量误伤天敌，使次要害虫攀升为主要害虫或某些害虫的再度大爆发，另一方面致使害螨的抗药性逐渐增强，迫使增加农药剂量或采用剧毒杀虫剂，严重破坏自然环境，最终招致恶性循环。通常昆虫对某种农药产生抗药性约3-4年，而相比螨类生活周期短，其繁殖能力强、虫口密度高，对某种农药抗药性的产生仅需1-2年，并且可能产生交叉抗性。所以，迫切需要发展新型、安全、高效的方法来控制害螨的危害。RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是指通过内源性或外源性双链RNA(doublestrandRNA,dsRNA)的介导，能特异性降解相应序列的mRNA，导致靶标基因表达的沉默，产生相应的功能缺失现象。然而，尽管基于RNA干扰的害虫防治新方法具有很大优势，实现基于RNA干扰的害虫有效治理的关键是筛选出合适的对害虫高效致死的靶点。然而，筛选靶标基因合成dsRNA后，可能存在脱靶效应，即沉默了非目标基因；可能为部分沉默；也可能在应用不同方式导入害虫体内后，无沉默效应。可见，筛选出对害虫高效致死的靶点存在一定的难度。综上，如何提供一种基于RNAi的靶点来实现对农业害螨的防治及Bt抗性治理的是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了ABC转运蛋白作在农业害螨防治及Bt抗性治理上的应用。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：ABC转运蛋白在农业害螨防治及Bt抗性治理上的应用，作用机理为ABC转运蛋白作为RNAi靶点。优选的，所述RNAi靶点为ABCA1、ABCA2、ABCA7、ABCC16、ABCC17、ABCC18或ABCC22，其编码的蛋白质的氨基酸序列如下：ABCA1编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；ABCA2编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；ABCA7编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；ABCC16编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示；ABCC17编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示；ABCC18编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.6所示；ABCC22编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.7所示。优选的，所述农业害螨为土耳其斯坦叶螨。优选的，ABC转运蛋白作为RNAi靶点可以降低农业害螨对Cry1Ac活化毒素和Cry2Ab活化毒素的敏感性。优选的，ABC转运蛋白作为RNAi靶点可以延长农业害螨的发育历期，并降低各发育历期的存活率经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术取得的有益效果为：(1)特异性干扰农业害螨专一基因，对高等动物和人类安全；(2)杀螨具有专一性，对非靶标生物安全；(3)对环境无毒无害。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1附图为本专利技术实施例1步骤(3)合成产物凝胶电泳检测结果图，其中，M为DNAMarker2000；dsA1、dsA2、dsA7、dsC16、dsC17、dsC18和dsC22分别为土耳其斯坦叶螨dsABCA1、dsABCA2、dsABCA7、dsABCC16、dsABCC17、dsABCC18和dsABCC22；图2附图为本专利技术实施例2敏感品系土耳其斯坦叶螨dABCA基因沉默后对Bt活化毒素敏感性测定结果，其中同一毒素处理数据后的不同字母表示差异是否显著(p＜0.05)；图3附图为本专利技术实施例2抗性品系土耳其斯坦叶螨dABCA基因沉默后对Bt活化毒素敏感性测定结果，其中同一毒素处理数据后的不同字母表示差异是否显著(p＜0.05)；图4附图为本专利技术实施例2敏感品系土耳其斯坦叶螨dABCC基因沉默后对Bt活化毒素敏感性测定结果，其中同一毒素处理数据后的不同字母表示差异是否显著(p＜0.05)；图5附图为本专利技术实施例2抗性品系土耳其斯坦叶螨dABCC基因沉默后对Bt活化毒素敏感性测定结果，其中同一毒素处理数据后的不同字母表示差异是否显著(p＜0.05)；具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。dsRNA合成试剂盒是HiScribeTMT7invitroTranscriptionKit(购自Biolabs公司)；未提及的实验方法和试剂为常规实验方法和试剂，在此不再一一赘述。实施例1土耳其斯坦叶螨dsRNA-ABC的体外合成(1)土耳其斯坦叶螨ABC基因dsRNA的引物设计使用Primer5.0分别设计ABCA1、ABCA2、ABCA7、ABCC16、ABCC17、ABCC18和ABCC22基因的dsRNA合成引物，在所设计的dsRNA合成引物前面加T7启动子，并在其后加GG(GG可以增加dsRNA合成量)。具体见表1。表1土耳其斯坦叶螨ABC基因的dsRNA合成引物注：引物序列中斜体字母表示T7启动子序列。(2)土耳其斯坦叶螨dsRNA-ABC模板合成以ABC基因为模板，用步骤(1)dsRNA合成引物进行PCR扩增。PCR反应体系如表2。表2PCR反应体系试剂量10xPCRBuffer(2.5mM)2.5μLdNTPMixture(Mg2+Plus)2.0μLdsRNA-上游引物(10mM)1.0μLdsRNA-下游引物(10mM)1.0μLDNA模板2.0μLTaqDNA聚合酶(250U)0.5μLddH2016μLTotal25μL扩增条件：94℃预变性1min；94℃30s，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.ABC转运蛋白在农业害螨防治及Bt抗性治理上的应用，其特征在于，作用机理为ABC转运蛋白作为RNAi靶点。/n

【技术特征摘要】
1.ABC转运蛋白在农业害螨防治及Bt抗性治理上的应用，其特征在于，作用机理为ABC转运蛋白作为RNAi靶点。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述RNAi靶点为ABCA1、ABCA2、ABCA7、ABCC16、ABCC17、ABCC18或ABCC22，其编码的蛋白质的氨基酸序列如下：
ABCA1编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；
ABCA2编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；
ABCA7编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示；
ABCC16编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示；
AB...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵伊英，刘峰，包建红，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65