一种用于临床诊断的复合质控品及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种基于铁蛋白纳米颗粒载体连接的多个诊断标志物特异性表位多肽分子的复合质控品及其制备方法，通过抗体检测及表位分析技术我们可以将绝大多数的诊断标志物蛋白的优势表位定位出来，然后通过连接酯链接到铁蛋白分子上，形成“Fer‑Linker‑Epitope Peptide”复合物，将合成的该复合物基因序列通过特定的载体转入原核大肠杆菌重组表达，这样含有多个诊断标志物优势表位多肽分子的复合抗原（质控品）就可以同时被多个诊断试剂检测出来。本发明专利技术的质控品检测效率高，成本低，稳定性极佳，可在2～8℃条件下长期稳定保存。

【技术实现步骤摘要】
一种用于临床诊断的复合质控品及其制备方法
本专利技术涉及免疫诊断试剂的质控品
，具体为一种用于临床诊断的复合质控品及其制备方法。
技术介绍
在我国，体外诊断试剂是指：可单独使用或与仪器、器具、设备或系统组合使用,在疾病的预防、诊断、治疗监测、预后观察、健康状态评价以及遗传性疾病的预测过程中,用于对人体样本(各种体液、细胞、组织样本等)进行体外检测的试剂、试剂盒、校准品(物)、质控品(物)等。质控品是体外诊断试剂的重要而必不可少的组成部分，主要用于对体外诊断试剂进行质量控制。在实际的临床应用过程中，检验人员使用体外诊断试剂检测病人的样本（血清，尿液等），在此之前，需要对试剂进行质量验证以确保检测结果的准确性。质控品是指经过一系列严格的量值溯源体系，有确定的靶值及允许的偏差范围的一类质量稳定的生物化学制品。体外诊断试剂在使用之前需要先测试配套的质控品，若结果显示在允许的偏差范围内则判定试剂质量合格，可用于检测病人样本并报告正确的结果；若结果显示超出了允许的偏差范围则判定试剂盒质量不合格，不可用于检测病人样本，否则会导致错误的诊断结果。在免疫诊断试剂产品中，质控品通常是用抗原（靶蛋白）按照一定的流程配置的，并对其进行赋值和稳定性的验证。传统的质控品多为单一项目的质控品，且多使用靶蛋白分子序列全长作为配置质控品的原料，这样的制备方法效率低下，成本高，且通常稳定性较差（需要制成冻干品以提高稳定性）。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术中免疫诊断试剂的质控品为单一项目的质控品，制备效率低的缺陷，提供一种复合质控品。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案：一种基于铁蛋白纳米颗粒载体连接的多个诊断标志物特异性表位多肽分子的复合质控品及其制备方法，其基本原理如下：通过抗体检测及表位分析技术我们可以将绝大多数的诊断标志物蛋白的优势表位（一个表位通常是由5~7个氨基酸组成的多肽）定位出来，然后通过连接酯（Linker）链接到铁蛋白（Fer）分子上，形成“Fer-Linker-EpitopePeptide”复合物，并合成的该复合物基因序列通过特定的载体转入原核大肠杆菌重组表达，这样含有多个诊断标志物优势表位多肽分子的复合抗原（质控品）就可以同时被多个诊断试剂检测出来。本专利技术的质控品检测效率高，成本低，稳定性极佳，可在2～8℃条件下长期稳定保存。通常，这里的Linker是指GGG3（谷氨酸-谷氨酸-谷氨酸-丝氨酸），Peptide是指经过表位分析鉴定方法测出的一段5~7个氨基酸多肽，如PCT（降钙素原）蛋白序列如下，其序列如SEQIDNO.13所示：APFRSALESSPADPATLSEDEARLLLAALVQDYVQMKASELEQEQEREGSSLDSPRS-KR-CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP-GKKR-DMSSDLERDHRPHVSMPQNAN鉴定的优势表位为：MKASEL。该方法制备的复合质控品相比于传统的单一品种质控品有如下优势：一、产品使用更加高效便捷：复合质控品含有多个诊断标志物的优势表位，可以实现一个质控品多个项目同时检测的高效率，在制备和使用两个过程中都避免了重复操作。二、成本更低：一方面使用的原料仅为一个片段分子而非蛋白全长，节约了表达全长蛋白的成本；另一方面省去了冻干及重复制备的成本，极大降低了平均到单个质控品的制备成本。三、稳定性极佳：由于铁蛋白分子量大，结构稳定（常被用着疫苗的连接载体），整个复合质控品分子展现了极佳的液体稳定性，可在2~8度条件下长期稳定保存。附图说明附图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1是“Fer-Linker-EpitopePeptide”复合物的模型图。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例一种用于临床诊断的复合质控品，包括铁蛋白和与铁蛋白通过连接酯链接的若干个诊断标志物特异性表位多肽分子。铁蛋白是由24个单体自组装形成的球形聚体，是分子结构非常稳定纳米颗粒蛋白，其中C、Nterminal和loopzone均可以用于插入外源基因片段，可将外源多肽或蛋白稳定的展示在球形颗粒的表面，基于上述原理，铁蛋白载体作为纳米颗粒疫苗载体，药物呈递，活体成像等领域被广泛关注。本研究中我们利用分子生物学方法将多诊断标志物的优势表位序列在基因层面上串联到铁蛋白上，利用原核大肠杆菌表达系统表达出含有多诊断标志位优势表位的铁蛋白复合质控品。具体制备方法：铁蛋白载体氨基酸序列，其序列如SEQIDNO.1所示。MLSKDIIKLLNEQVNKEMNSSNLYMSMSSWCYTHSLDGAGLFLFDHAAEEYEHAKKLIIFLNENNVPVQLTSISAPEHKFEGLTQIFQKAYEHEQHISESINNIVDHAIKSKDHATFNFLQWYVAEQHEEEVLFKDILDKIELIGNENHGLYLADQYVKGIAKSRKS多诊断标志物预测的优势表位如下：PCT：MKASEL，其序列如SEQIDNO.2所示；IL6：QNRFESSEEQ，其序列如SEQIDNO.3所示；Myo：ATKHKIPVK，其序列如SEQIDNO.4所示。CRP：APLTKPL，其序列如SEQIDNO.5所示。PGI：GSFLYYA，其序列如SEQIDNO.6所示。PGII；GTNFVY，其序列如SEQIDNO.7所示。BNP：CFGRKMDRI，其序列如SEQIDNO.8所示。SAA：ANYIGSDKY，其序列如SEQIDNO.9所示。将各诊断标志物优势表位序列串联插入到铁蛋白的序列中，插入后的序列如SEQIDNO.10所示：MHHHHHHGSMKASELGGGGSLSKDIIKLLNEQVNKEMNSSNLYMSMSSWCYTHGSQNRFESSEEGSSLDGAGLFLFDHAAEEYEHAKKLIIFLNENNGSATKHKIPVKGSAPLTKPLGSFLYYAVPVQLGSGTNFVYGSTSISAPEHKFEGLTQIFQKAYEHEQHISESINNIVDHAIKSGSGTNFVYGSCFGRKMDRIGSANYIGSDKYGSKDHATFNFLQWYVAEQHEEEVLFKDILDKIELIGNENHGLYLADQYVKGIAKSRKS将上述序列用密码子优化软件在大肠杆菌表达系统中优化，优化后序列如SEQIDNO.11所示：CATATGCACCATCATCATCACCATGGTAGCATGAAAGCAAGCGAATTAGGTGGTGGTGGTAGCCTGAGCAA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于临床诊断的复合质控品，其特征在于，包括铁蛋白和与铁蛋白通过连接酯链接的若干个诊断标志物特异性表位多肽分子；/n所述诊断标志物特异性表位多肽分子为以下任意一种或多种：/nPCT的诊断标志物特异性表位多肽MKASEL、/nIL6的诊断标志物特异性表位多肽QNRFESSEEQ、/nMyo的诊断标志物特异性表位多肽ATKHKIPVK、/nCRP的诊断标志物特异性表位多肽APLTKPL、/nPGI的诊断标志物特异性表位多肽GSFLYYA、/nPGII的诊断标志物特异性表位多肽GTNFVY、/nBNP的诊断标志物特异性表位多肽CFGRKMDRI、/n或SAA的诊断标志物特异性表位多肽为ANYIGSDKY；/n所述的连接酯为谷氨酸-谷氨酸-谷氨酸-丝氨酸。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于临床诊断的复合质控品，其特征在于，包括铁蛋白和与铁蛋白通过连接酯链接的若干个诊断标志物特异性表位多肽分子；
所述诊断标志物特异性表位多肽分子为以下任意一种或多种：
PCT的诊断标志物特异性表位多肽MKASEL、
IL6的诊断标志物特异性表位多肽QNRFESSEEQ、
Myo的诊断标志物特异性表位多肽ATKHKIPVK、
CRP的诊断标志物特异性表位多肽APLTKPL、
PGI的诊断标志物特异性表位多肽GSFLYYA、
PGII的诊断标志物特异性表位多肽GTNFVY、
BNP...

【专利技术属性】
技术研发人员：芮兵，
申请(专利权)人：南京佰抗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32