一种犬细小病毒卵黄抗体及其制备方法技术

本发明专利技术基于一株致病性较强、具有良好免疫性能的强度毒株CPV‑HuN1703株制备得到卵黄抗体，该卵黄抗体中和效价高，对于犬细小病毒病具有良好的防治作用，优于其他分离毒株所制备得到的卵黄抗体。该卵黄抗体具有安全、特异性高、治疗效果好、生产成本低等优点，可有效防治犬细小病毒引起的疾病，具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种犬细小病毒卵黄抗体及其制备方法
：本专利技术属于兽用生物制品领域，具体涉及一种犬细小病毒卵黄抗体及其制备方法。
技术介绍
：犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canineparvovirus,CPV)感染引起的以呕吐、腹泻、白细胞减少和出血性肠炎为特征的具有高度接触性的急性烈性传染病，犬细小病毒（CPV）病自发现以来一直是危害犬类健康的最严重的传染病之一，尤其对2～6月龄的幼犬危害最大，犬细小病毒分布在世界各地，能够感染犬科和鼬科动物，发病率高达70%-100%,死亡率高达50%。随着我国生活水平的提高，警犬、实验用宠物犬饲养量的增加，犬细小病毒病日益严重，对犬饲养业带来巨大的损失，也严重威胁我国养犬业的发展。犬细小病毒（CanineParvovirus，CPV）属于细小病毒科，细小病毒属成员之一，CPV结构为等轴对称的，近似球状的二十面体，直径约为18nm～26nm，外观为圆形或六边形，没有囊膜。由于CPV的结构十分紧密，对各类物理化学等刺激具有很强的抵御能力，65℃、30min处理后仍具有感染性；长时间低温环境下，其感染性不会有变化，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种犬细小病毒卵黄抗体的制备方法，其特征在于，采用灭活的犬细小病毒CPV-HuN1703株免疫蛋鸡，然后从鸡蛋蛋黄中提取纯化得到卵黄抗体，所述犬细小病毒CPV-HuN1703 株，其微生物保藏编号为CGMCC No.17583；分类命名：犬细小病毒（CanineParvovirus，CPV）；保藏时间是2019 年04 月24 日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1 号院3 号，中国科学院微生物研究所。/n

【技术特征摘要】
1.一种犬细小病毒卵黄抗体的制备方法，其特征在于，采用灭活的犬细小病毒CPV-HuN1703株免疫蛋鸡，然后从鸡蛋蛋黄中提取纯化得到卵黄抗体，所述犬细小病毒CPV-HuN1703株，其微生物保藏编号为CGMCCNo.17583；分类命名：犬细小病毒（CanineParvovirus，CPV）；保藏时间是2019年04月24日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。


2.根据权利要求1所述的犬细小病毒卵黄抗体的制备方法，所述犬细小病毒卵黄抗体的制备方法包括如下步骤：
（1）制备犬细小病毒抗原；
（2）免疫蛋鸡；
（3）从免疫鸡蛋中制备抗体原液；
（4）检测抗体效价。


3.根据权利要求2所述的犬细小病毒卵黄抗体的制备方法，其特征在于，所述制备犬细小病毒抗原的方法包括如下步骤：
步骤a，按照常规方法培养猫肾传代细胞F81：生长液为含5%胎牛血清的MEM（含青霉素钠和硫酸链霉素各100μg/mL），在37℃，5%CO2培养箱中培养传代，待细胞生长至80%汇合度时，用PBS洗涤1次后更换为无血清培养基；
步骤b，取含量为5×104TCID50/ml的犬细小病毒CPV-HuN1703株按5%的体积百分比接种到步骤a制备的长势良好的F81细胞，37℃吸附1小时，弃去吸附液，补加含有10μg/mL胰蛋白酶的MEM作为维持液继续培养；
步骤c，接毒后，每日观察3次，记录细胞病变情况，待细胞病变率达80%以上时进行收获，-80℃反复冻融三次，8000rpm离心15min，收集上清液，即为病毒液；
步骤d，将步骤c制备得到的病毒液经浓缩后，加入0.2%甲醛37℃灭活24小时得到犬细小病毒CPV-HuN1703株疫苗原液；
步骤e，将犬细小病毒CPV-HuN1703株疫苗原液和佐剂案1:1的体积比在无菌环境中搅拌混合均...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐青海，杨海，杨灿，王芳宇，何丽芳，刘会敬，唐姣玉，
申请(专利权)人：衡阳师范学院，
类型：发明
国别省市：湖南;43