一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用。其技术方案为：一种山莴苣苦素的制备方法，包括如下步骤：对毛菊苣根进行脱水处理，再依次进行醇冷提、浓缩、萃取纯化、过柱纯化。一种山莴苣苦素作为抗炎成分的应用，包括如下步骤：对毛菊苣根进行脱水处理，再依次进行醇冷提、浓缩、萃取纯化、柱纯化，得到山莴苣苦素，将山莴苣苦素用于抗炎药物。本发明专利技术提供了一种山莴苣苦素的制备方法及其作为抗炎成分的应用，解决了现有技术中无法从毛菊苣中提取出山莴苣苦素的方法且没有在抗炎方面的应用的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用
本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种山莴苣苦素及其作为抗炎成分的应用。
技术介绍
毛菊苣是新疆特色药材，原产于地中海、中亚和北非，在欧洲栽培甚多。中药菊苣具有清肝利胆，健胃消食，利尿消肿，抗菌消炎之功效，常用于湿热黄疸，胃痛食少和水肿尿少。维药毛菊苣在抗炎方面的研究已经取得了较大的进展，研究结果提示毛菊苣具有较好的抗炎活性，可以广泛用于各种炎症疾病。但相对于其他中药，对毛菊苣抗炎效果的研究有一定的滞后。以往的研究中有关毛菊苣提取物、活性成分的抗炎作用缺乏系统性，对抗炎机制研究较少。特别是在相对应的炎症疾病适应症上的研究匮乏(具抗炎作用维药的研究进展，刘燕，中国中药杂志，2014)，且原药材毛菊苣的抗炎作用并不明显，需要从毛菊苣中分离纯化出具有抗炎效果的成分才能更好的发挥毛菊苣的抗炎功效。以往对毛菊苣抗炎成分的研究多集中于毛菊苣水提物上。毛菊苣水提物是一种具有多种水溶性成分的混合物，没有分离得到毛菊苣中具有抑制炎症作用的单一化合物，对混合物的药理和毒理研究较为困难，从而限制了毛菊苣水提物在临床上的运用，毛菊苣中还含有大量的非水溶性成分，非水溶性成分对原药毛菊苣实现抗炎作用也具有一定贡献，但现有技术的方案缺少对非水溶性成分的抗炎效果研究。进一步探究毛菊苣抗炎单体成分，对于开发维药，指导临床，都具有重要意义。
技术实现思路
本专利技术克服了现有技术的不足，提供一种山莴苣苦素的制备方法及其作为抗炎成分的应用，解决了现有技术中无法从毛菊苣中提取出山莴苣苦素的方法且没有在抗炎方面的应用的问题。为解决上述的技术问题，本专利技术采用以下技术方案：一种山莴苣苦素的制备方法，包括如下步骤：S1：预处理：对毛菊苣根进行脱水处理；S2：醇冷提：用乙醇对脱水处理后的毛菊苣根进行浸泡处理，收集浸泡处理后的滤液；S3：浓缩：将步骤S2中的滤液浓缩得稠浸膏；S4：萃取纯化：将稠浸膏分散到水中，得混悬液；使用正丁醇对混悬液进行萃取，取水层；将所述正丁醇层浓缩得正丁醇浸膏；S5：过柱纯化：将步骤S4中的正丁醇部位浸膏用正相硅胶划段，用15:1～1:1的二氯甲烷-甲醇依次洗脱，用TLC板展开，经硫酸乙醇加热至120℃显色，并划分成依次为DT1-71-1、DT1-71-2/3、DT1-71-4/5、DT1-71-6/7、DT1-71-8的五段；将DT1-71-1过反相的得到化合物DT1-71-20和DT1-71-15—19和DT1-71-21—24；将DT1-71-20上硅胶柱Ⅰ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅰ，将洗脱液Ⅰ蒸干得干粉Ⅰ；将所述干粉Ⅰ溶于甲醇后上硅胶柱Ⅱ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅱ，将洗脱液Ⅱ蒸干的干粉Ⅱ；将干粉Ⅱ溶于甲醇后上ODS填料，甲醇洗脱得洗脱液Ⅲ，将洗脱液Ⅲ蒸干得干粉Ⅲ；将干粉Ⅲ溶于甲醇后上SephadexLH-20填料，甲醇洗脱得洗脱液Ⅳ，将洗脱液Ⅳ蒸干得干粉Ⅳ；将干粉Ⅳ溶于甲醇后上硅胶柱Ⅲ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅴ，将洗脱液Ⅴ蒸干得干粉Ⅴ；将所述干粉Ⅴ溶于甲醇后上ODS填料，甲醇洗脱后得洗脱液Ⅵ，将洗脱液Ⅵ蒸干得干粉Ⅵ，所述干粉Ⅵ即为单体山莴苣苦素。从毛菊苣中提取分离得到山莴苣苦素，并且上述提取制备方法简单，成本低，可以获得高纯度的山莴苣苦素。用乙醇冷浸的方法可以使山莴苣苦素充分溶出，并且相对于传统提取方法，减少了提取过程中乙醇对环境的污染，提高了安全性。传统乙醇蒸馏提取法会产生大量乙醇蒸汽，污染环境，且对操作者的健康有一定影响。且乙醇易燃易爆，属于易制毒试剂监管范围，加热乙醇进行毛菊苣提取物制备有可能会导致安全事故的发生。另外，乙醇冷浸的方法对设备要求较低，只需要提供浸泡药材的设备，有助于扩大生产，提高山莴苣苦素产量。其中，脱水处理是指脱去毛菊苣根内部的水分。由本专利技术的方法提取纯化制备的干粉Ⅵ为白色粉末。对干粉Ⅵ进行光谱分析，对HNMR(pyridine-d5,400MHz)的光谱分析结果进行了统一分析，结果显示使用本法提取获得的化合物(干粉Ⅵ)为山莴苣苦素。山莴苣苦素的系统名为：[(3aR,4S,9aS,9bR)-9-(hydroxymethyl)-6-methyl-3-methylidene-2,7-dioxo-4,5,9a,9b-tetrahydro-3aH-azuleno[4,5-b]furan-4-yl]2-(4-hydroxyphenyl)acetate。作为本专利技术的优选方案，在所述步骤S1中，对毛菊苣根进行脱水处理是采用晾干的方式，脱水处理后的毛菊苣根的含水量为1～10％。在提取之前进行脱水处理，可以减少植物内部水分对后续提取效率的影响。作为本专利技术的优选方案，在所述步骤S2中，用脱水处理后的毛菊苣根的质量的3～5倍的95％乙醇对脱水处理后的毛菊苣根进行浸泡处理5次，收集5次浸泡处理后的滤液。采用上述95％乙醇用量可以充分溶出植物中的山莴苣苦素。5次浸泡可以保证植物中的绝大部分山莴苣苦素被浸出，提高原药材的利用率。作为本专利技术的优选方案，在所述步骤S3中，用减压蒸馏装置在压力0～0.1MPa和温度40～50℃的条件下，将步骤S2中的滤液浓缩得稠浸膏；所述稠浸膏的浓度为0.1～0.4g/ml。在压力0～0.1MPa和温度40～50℃的条件下，将滤液浓缩成稠浸膏，既可以保证目的化合物的分子完整性，又可以除去原有的溶剂(乙醇)，便于后面的萃取步骤进行。作为本专利技术的优选方案，在步骤S4中，将1体积份的稠浸膏分散到3体积份的水中，得混悬液；使用1体积份的正丁醇对1体积份的混悬液进行萃取；使用1体积份的乙酸乙酯对1体积份的水层进行萃取。将1体积份的稠浸膏分散到3体积份的水中，可以使浸膏充分混悬在水中。使用1:1的萃取溶剂比例，可以保证目的化合物被充分分配到有机相中。作为本专利技术的优选方案，在步骤S4中，在压强0.1～0.2MPa和温度40～80℃的条件下将所述正丁醇层蒸馏浓缩得正丁醇浸膏，所述正丁醇浸膏的浓度为0.2～0.6g/ml。在压力0～0.1MPa和温度40～50℃的条件下，将滤液浓缩成稠浸膏，既可以保证目的化合物的分子完整性，又可以除去原有的溶剂(正丁醇)，便于后面的柱纯化步骤进行。作为本专利技术的优选方案，在步骤S5中，硅胶柱Ⅰ、硅胶柱Ⅱ和硅胶柱Ⅲ的孔径范围均为200～300目；硅胶柱Ⅰ的硅胶类型为硅胶H、硅胶G和硅胶HF中的任意一种；硅胶柱Ⅱ的硅胶类型为硅胶H、硅胶G和硅胶HF中的任意一种；硅胶柱Ⅲ的硅胶类型为硅胶H、硅胶G和硅胶HF中的任意一种。硅胶具有优良的机械强度和表面易改性等特性，是目前应用最广泛的色谱柱填料。硅胶H、硅胶G和硅胶HF均为现有技术中常见的色谱柱填料。作为本专利技术的优选方案，在步骤S5中，梯度洗脱时，用氯仿和甲醇组成的混合物进行梯度洗脱。顺次进行步骤S5中梯度洗脱操作可以纯化分离出纯度高且杂质少的目的化合物山莴苣苦素。作为本专利技术的优选方案，在步骤S5中，所述SephadexLH-20填料的颗粒直径的范围18～111μm。SephadexLH-2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1：预处理：对毛菊苣根进行脱水处理；/nS2：醇冷提：用乙醇对脱水处理后的毛菊苣根进行浸泡处理，收集浸泡处理后的滤液；/nS3：浓缩：将步骤S2中的滤液浓缩得稠浸膏；/nS4：萃取纯化：将稠浸膏分散到水中，得混悬液；使用正丁醇对混悬液进行萃取，取水层；将所述正丁醇层浓缩得正丁醇浸膏；/nS5：过柱纯化：将步骤S4中的正丁醇部位浸膏用正相硅胶划段，用15:1～1:1的二氯甲烷-甲醇依次洗脱，用TLC板展开，经硫酸乙醇加热至120℃显色，并划分成依次为DT1-71-1、DT1-71-2/3、DT1-71-4/5、DT1-71-6/7、DT1-71-8的五段；将DT1-71-1过反相的得到化合物DT1-71-20和DT1-71-15—19和DT1-71-21—24；将DT1-71-20上硅胶柱Ⅰ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅰ，将洗脱液Ⅰ蒸干得干粉Ⅰ；将所述干粉Ⅰ溶于甲醇后上硅胶柱Ⅱ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅱ，将洗脱液Ⅱ蒸干的干粉Ⅱ；将干粉Ⅱ溶于甲醇后上ODS填料，甲醇洗脱得洗脱液Ⅲ，将洗脱液Ⅲ蒸干得干粉Ⅲ；将干粉Ⅲ溶于甲醇后上Sephadex LH-20填料，甲醇洗脱得洗脱液Ⅳ，将洗脱液Ⅳ蒸干得干粉Ⅳ；将干粉Ⅳ溶于甲醇后上硅胶柱Ⅲ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅴ，将洗脱液Ⅴ蒸干得干粉Ⅴ；将所述干粉Ⅴ溶于甲醇后上ODS填料，甲醇洗脱后得洗脱液Ⅵ，将洗脱液Ⅵ蒸干得干粉Ⅵ，所述干粉Ⅵ即为单体山莴苣苦素。/n...

【技术特征摘要】
1.一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：预处理：对毛菊苣根进行脱水处理；
S2：醇冷提：用乙醇对脱水处理后的毛菊苣根进行浸泡处理，收集浸泡处理后的滤液；
S3：浓缩：将步骤S2中的滤液浓缩得稠浸膏；
S4：萃取纯化：将稠浸膏分散到水中，得混悬液；使用正丁醇对混悬液进行萃取，取水层；将所述正丁醇层浓缩得正丁醇浸膏；
S5：过柱纯化：将步骤S4中的正丁醇部位浸膏用正相硅胶划段，用15:1～1:1的二氯甲烷-甲醇依次洗脱，用TLC板展开，经硫酸乙醇加热至120℃显色，并划分成依次为DT1-71-1、DT1-71-2/3、DT1-71-4/5、DT1-71-6/7、DT1-71-8的五段；将DT1-71-1过反相的得到化合物DT1-71-20和DT1-71-15—19和DT1-71-21—24；将DT1-71-20上硅胶柱Ⅰ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅰ，将洗脱液Ⅰ蒸干得干粉Ⅰ；将所述干粉Ⅰ溶于甲醇后上硅胶柱Ⅱ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅱ，将洗脱液Ⅱ蒸干的干粉Ⅱ；将干粉Ⅱ溶于甲醇后上ODS填料，甲醇洗脱得洗脱液Ⅲ，将洗脱液Ⅲ蒸干得干粉Ⅲ；将干粉Ⅲ溶于甲醇后上SephadexLH-20填料，甲醇洗脱得洗脱液Ⅳ，将洗脱液Ⅳ蒸干得干粉Ⅳ；将干粉Ⅳ溶于甲醇后上硅胶柱Ⅲ，通过梯度洗脱得洗脱液Ⅴ，将洗脱液Ⅴ蒸干得干粉Ⅴ；将所述干粉Ⅴ溶于甲醇后上ODS填料，甲醇洗脱后得洗脱液Ⅵ，将洗脱液Ⅵ蒸干得干粉Ⅵ，所述干粉Ⅵ即为单体山莴苣苦素。


2.根据权利要求1所述的一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，在所述步骤S1中，对毛菊苣根进行脱水处理是采用晾干的方式，脱水处理后的毛菊苣根的含水量为1～10％。


3.根据权利要求1所述的一种山莴苣苦素的制备方法，其特征在于，在所述步骤S2中，用脱水处理后的毛菊苣根的质量的3～5倍的95％乙醇对脱水处理...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦冬梅，邹楠，蔡钢，王淑秀，苏林洁，党婷，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：新疆;65