一种影响伊立替康所致小鼠腹泻和肠道菌群的富硒益生菌制造技术

本发明专利技术公开了一种影响伊立替康所致小鼠腹泻和肠道菌群的富硒益生菌，建立伊立替康所致腹泻小鼠模型，通过长期灌胃给予富硒益生菌，评价其对伊立替康所致小鼠腹泻及肠道菌群的影响。实验组小鼠每天灌胃给予富硒益生菌，测定小鼠体重、腹泻等级、小鼠免疫指标、肠道菌群以及回肠组织结构。结果表明，富硒益生菌能够抑制伊立替康所致的体重下降和免疫功能降低；降低小鼠腹泻发生率和平均腹泻等级，缓解伊立替康所致的小鼠腹泻；减少与β‑D‑葡糖醛酸糖苷酶相关的梭菌、大肠杆菌和拟杆菌含量，增加肠道内双歧杆菌含量；缓解伊立替康导致的小鼠肠道粘膜、细胞和腺体的损伤。

【技术实现步骤摘要】
一种影响伊立替康所致小鼠腹泻和肠道菌群的富硒益生菌
本专利技术属于微生物
，具体地说，本专利技术涉及一种影响伊立替康所致小鼠腹泻和肠道菌群的富硒益生菌。
技术介绍
伊立替康（irinotecan,CPT-11）是一种衍生自喜树碱的化合物，广泛应用于各类肿瘤疾病治疗，如非小细胞肺癌、胃癌和直肠癌等。CPT-11进入体内后能迅速在胃肠道和肝脏组织中水解为活性化合物SN-38，SN-38在肝葡萄糖醛酸化过程中代谢为无活性代谢物SN-38葡糖苷酸（SN-38G），随后被输出到肠道。但是，SN-38G可被肠道细菌β-D-葡糖醛酸糖苷酶水解为SN-38，从而导致肠毒性。CPT-11还会造成脊髓抑制毒性、中性粒细胞和白细胞减少等不良反应。双歧杆菌是活的肠道微生物，作为药物或食品补充剂有助于维持人类或其他宿主消化道的微量平衡，并且可以通过自身转化吸收微量元素，改变生理生化功能。微量元素硒（selenium,Se）是人体必需元素，与蛋白质组成硒蛋白维持生理功能，与25-30种遗传特异性酶组成硒酶维持催化功能，在生物化学和生理学上具有重要作用。高通量筛选得到耐硒长双歧杆菌优势菌株，通过16SrDNA测序及核苷酸序列BLAST分析，表明长双歧杆菌DD98菌株是一株新的长双歧杆菌（CGMCCNo.16573）。富硒长双歧杆菌是将长双歧杆菌DD98菌株接种于RCM改良培养基中，厌氧培养12h后，向培养基中加入亚硒酸钠，继续培养至24h，在高硒环境下发酵制备Se-DD98，冷冻干燥48h后得到冻干菌粉。在此前公开的专利（CN108721337A）详细阐述了富硒长双歧杆菌的详细制备过程以及对肠道粘膜的保护作用。由于CPT-11的不良反应限制其临床应用，因此本专利技术探究富硒长双歧杆菌DD98菌株对伊立替康所致小鼠腹泻和肠道菌群的影响。
技术实现思路
本专利技术针对目前CPT-11临床应用的不良反应，提供一种影响伊立替康所致小鼠腹泻和肠道菌群的益生菌。建立伊立替康所致腹泻小鼠模型，通过长期灌胃给予富硒益生菌，能够抑制伊立替康所致的体重下降和免疫功能降低；降低小鼠腹泻发生率和平均腹泻等级，缓解伊立替康所致的小鼠腹泻；减少与β-D-葡糖醛酸糖苷酶相关的梭菌、大肠杆菌和拟杆菌含量，增加肠道内双歧杆菌含量；缓解伊立替康导致的小鼠肠道粘膜、细胞和腺体的损伤。本专利技术具体实验方案如下：小鼠分为正常对照组、CPT-11组、Se-DD98低剂量组、Se-DD98高剂量组。正常对照组和CPT-11组灌胃蒸馏水，Se-DD98低剂量组灌胃菌粉（活菌数1×108CFU/kg），Se-DD98高剂量组灌胃菌粉（活菌数1×109CFU/kg）。建立伊立替康腹泻模型。第0天到第24天，各组小鼠灌胃无菌水或者菌液；第18天，正常对照组腹腔注射无菌生理盐水，其余各组每只小鼠腹腔注射150mg/kgCPT-11；第17天和第24天，每组各取6只小鼠，考察生理生化指标及肠道菌群变化。本专利技术所述的富硒益生菌是将长双歧杆菌DD98菌株接种于RCM改良培养基中，厌氧培养12h后，向培养基中加入亚硒酸钠，继续培养至24h，在高硒环境下发酵制备Se-DD98，冷冻干燥48h后得到冻干菌粉。高通量筛选得到耐硒长双歧杆菌优势菌株，通过16SrDNA测序及核苷酸序列BLAST分析，表明长双歧杆菌DD98菌株是一株新的长双歧杆菌（CGMCCNo.16573）。此前公开专利（CN108721337A）已经详细阐述了富硒益生菌的制备过程。本专利技术的第一方面，提供了富硒长双歧杆菌在制备药物中的应用，所述药物用于：（1）伊立替康的辅助治疗：和/或；（2）缓解伊立替康所致不良反应；（3）调节肠道菌群。在另一优选例中，所述药物用于缓解伊立替康所致的体重下降。在另一优选例中，所述药物用于缓解伊立替康所致免疫功能降低。在另一优选例中，所述药物用于降低小鼠腹泻发生率和平均腹泻等级，缓解伊立替康所致的小鼠腹泻。在另一优选例中，所述药物用于降低肝脏谷草转氨酶和谷丙转氨酶，缓解伊立替康所致小鼠肝脏毒性。在另一优选例中，所述肠道菌群包括：梭菌、大肠杆菌、拟杆菌含量和双歧杆菌。在另一优选例中，所述药物用于调节伊立替康注射前后的正常小鼠肠道菌群。在另一优选例中，所述药物用于缓解伊立替康导致的小鼠肠道粘膜、细胞和腺体的损伤。在另一优选例中，所述富硒长双歧杆菌为富硒长双歧杆菌DD98菌株。本专利技术的第二方面，提供了一种富硒益生菌菌粉，所述富硒益生菌菌粉为富硒长双歧杆菌DD98菌株活菌粉。在另一优选例中，所述富硒长双歧杆菌为液体制剂、粉剂或片剂。在另一优选例中，所述富硒长双歧杆菌中含硒量为0.349μg/mg。在另一优选例中，所述富硒长双歧杆菌中活菌数为5.2×108CFU/g。本专利技术的第三方面，提供了一种预防和/或治疗伊立替康所致肠道紊乱的方法，所述方法包括步骤；给需要的对象使用预防和/或治疗有效量的富硒长双歧杆菌。在另一优选例中，所述对象为肿瘤患者。在另一优选例中，所述肠道菌群紊乱为伊立替康引起的肠道菌群变化。在另一优选例中，所述富硒长双歧杆菌的使用剂量为1×108~1×1010CFU/kg，优选为1×109CFU/kg。在另一优选例中，所述对象为人。在另一优选例中，所述方法中在伊立替康治疗前给需要的对象使用预防和/或治疗有效量的富硒长双歧杆菌。在另一优选例中，所述方法中在伊立替康治疗前18天给需要的对象使用预防和/或治疗有效量的富硒益生菌；优选地，每次使用剂量为1×108CFU/kg；更优选地，每次使用剂量为1×109CFU/kg。本专利技术优点：1.本专利技术采用动物实验模型，探究长期给予富硒益生菌，对正常动物的体重、腹泻、免疫指标、肝脏指标、肠道菌群和回肠结构的影响；2.本专利技术通过小鼠腹腔注射CPT-11，探究富硒益生菌对CPT-11所致不良反应的影响，其不良反应包括体重变化、腹泻发生、免疫能力降低、肠道菌群和回肠结构的变化；3.本专利技术提供了一种影响伊立替康所致小鼠腹泻和肠道菌群的富硒益生菌，为COT-11的临床应用提供新思路。附图说明图1为本专利技术实施例2中小鼠原始体重百分比变化曲线。图2为本专利技术实施例3中富硒益生菌对小鼠腹泻发生率的影响曲线。图3为本专利技术实施例6中富硒益生菌对小鼠肠道菌群的影响对比图（图注：A梭菌；B大肠杆菌；C拟杆菌；D双歧杆菌）。图4为本专利技术实施例7中富硒益生菌对小鼠回肠组织结构的影响对比图（图注：A第17天正常对照组；B第17天伊立替康组；C第17天Se-DD98低剂量组；D第17天Se-DD98高剂量组；E第24天正常对照组；F第24天伊立替康组；G第24天Se-DD98低剂量组；H第24天Se-DD98高剂量组）。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步详细描述，但是本专利技术不限于所给出的例子。下本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种富硒益生菌在药物制备中的应用，所述药物用于：（1）化疗药物的辅助治疗：和/或；（2）缓解化疗药物所致不良反应；（3）调节肠道菌群。/n

【技术特征摘要】
1.一种富硒益生菌在药物制备中的应用，所述药物用于：（1）化疗药物的辅助治疗：和/或；（2）缓解化疗药物所致不良反应；（3）调节肠道菌群。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化疗药物是伊立替康。


3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述不良反应包括体重下降、腹泻、免疫功能下降、肠道菌群紊乱和肠道粘膜损伤。


4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肠道菌群包括双歧杆菌、大肠杆菌、拟杆菌和梭菌。


5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述富硒益生菌灌胃给...

【专利技术属性】
技术研发人员：祁艳，陈代杰，邵雷，谭俊，朱慧，周艳，
申请(专利权)人：江苏德禧生物科技有限公司，上海交通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32