【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于益生微生物的基因表达系统关于联邦资助研究的声明无。相关申请的引用本申请要求2017年9月13日提交的美国临时申请62/558,346和2018年7月27日提交的美国申请16/048,147的优先权日的权益，其全部内容通过引用以其整体并入本文。序列表本申请包含已经以ASCII格式电子提交并且在此通过引用以其整体并入的序列表。创建于2018年6月21日的所述ASCII副本命名为1642-001-US_SL.TXT，并且大小为29,323字节。背景当一个人饮用酒精时，从血流去除酒精的主要途径是经由醇脱氢酶在肝脏中氧化成乙醛。乙醛随后经由乙醛脱氢酶在肝脏中氧化成乙酸。当大量和/或快速消耗酒精时，高度毒性的中间乙醛能够积累并且随后释放回血流中，血流中的乙醛由于其高溶解性可以在全身起作用。乙醛不仅是一种已知的致癌物，它的毒性作用也是酒精宿醉的许多影响被充分研究和记载的原因。事实上，去除乙醛已经被证明降低宿醉症状。PMID:16554376(PubMedID)。相反，当身体将乙醛氧化成乙酸(acetate)的能力受化学(例如用双硫仑(disulfiram))或遗传(例如东亚群体中常见的乙醛脱氢酶基因中的单核苷酸多态性)抑制时，则经历极度放大的宿醉症状。先前已经存在若干降低、消除或预防宿醉的影响的尝试。一些已经试图通过酶的方式或以其他方式降低吸收的乙醇的量或增加乙醇从身体去除的速率(专利公布US2009-0060894A1)。然而，这些方法具有至少两个潜在缺陷：(1)它们的作用方法影响饮用者的血液酒...
【技术保护点】
1.一种用于预防或治疗酒精宿醉的方法，所述方法包括向有相应需要的受试者的肠施用有效量的包含重组细菌的组合物，所述重组细菌经重组工程化以组成性地表达醛脱氢酶。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170913 US 62/558,346;20180727 US 16/048,1471.一种用于预防或治疗酒精宿醉的方法，所述方法包括向有相应需要的受试者的肠施用有效量的包含重组细菌的组合物，所述重组细菌经重组工程化以组成性地表达醛脱氢酶。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述重组细菌包含：
a)包含表达构建体的多核苷酸，所述表达构建体包含与编码醛脱氢酶的异源核苷酸序列可操作地连接的鞭毛蛋白基因启动子，其中所述鞭毛蛋白基因启动子包含一种或更多种遗传修饰，所述一种或更多种遗传修饰降低CsrA对从所述鞭毛蛋白基因启动子转录的mRNA的翻译的阻遏；和
b)σ因子阻遏物的遗传修饰，其中所述修饰降低对从所述鞭毛蛋白基因启动子的σ因子转录起始的抑制。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述细菌属于选自以下的属：芽孢杆菌属(Bacillus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、肠球菌属(Enterococcus)、埃希氏菌属(Escherichia)、乳杆菌属(Lactobacillus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、片球菌属(Pediococcus)、片球菌属和链球菌属(Streptococcus)。
4.如权利要求2所述的方法，其中(1)所述细菌属于芽孢杆菌属，(2)所述鞭毛蛋白基因启动子是经修饰的芽孢杆菌属hag启动子，所述hag启动子包含CsrABS1结合位点和/或CsrABS2结合位点的一种或更多种遗传修饰，(3)所述σ因子是SigD，并且(4)SigD阻遏物是FlgM。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述hag启动子包含在12碱基对BS1结合位点中或在所述结合位点的任一侧上的形成BS1的茎-环二级结构的茎的周围碱基中的一种或更多种遗传修饰。
6.如权利要求4所述的方法，其中所述hag启动子包含CsrABS1识别序列AGGA的修饰。
7.如权利要求4所述的方法，其中所述hag启动子包含核苷酸序列GCACAAGAACGT[SEQIDNO:2]。
8.如权利要求4所述的方法，其中所述一种或更多种遗传修饰包括对所述CsrABS2结合位点的一个或更多个点突变。
9.如权利要求4所述的方法，其中所述hag启动子包含通过消除允许氢键合的互补性来破坏BS2的茎环结构的一种或更多种遗传修饰。
10.如权利要求4所述的方法，其中所述hag启动子包含所述BS2结合位点的修饰，其中所述修饰包括核苷酸序列ATTTAGGGAGGAA[SEQIDNO:3]。
11.如权利要求1所述的方法，其中所述醛脱氢酶是细菌醛脱氢酶。
12.如权利要求4所述的方法，其中所述醛脱氢酶选自(1)来自钩虫贪铜菌(Cupriavidusnecator)的AcoD和(2)来自大肠杆菌(E.coli)的AldB。
13.如权利要求4所述的方法，其中flgM基因中的遗传修饰包括所述flgM基因的全部或部分缺失。
14.如权利要求4的方法，其中flgM基因中的遗传修饰破坏二级结构或三级结构。
15.如权利要求4所述的方法，其中所述表达构建体位于细菌染色体中。
16.如权利要求1所述的方法，所述方法包括在饮用酒精期间向所述受试者施用所述组合物。
17.如权利要求1所述的方法，所述方法包括在开始饮用酒精前最多24小时向所述受试者施用所述组合物。
18.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物经口服施用。
19.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物还包含选自以下的生理学上可接受的载体：乳酸发酵食品、发酵乳制品、抗性淀粉、膳食纤维、碳水化合物、蛋白质和糖基化蛋白质、水、胶囊填充剂和胶状物质。
20.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含约104个至约1012个菌落形成单位的所述重组细菌。
21.一种重组微生物，所述重组微生物包含：
a)包含表达构建体的多核苷酸，所述表达构建体包含与编码主题多肽的异源核苷酸序列可操作地连接的鞭毛蛋白基因启动子，其中所述鞭毛蛋白基因启动子包含一种或更多种遗传修饰，所述一种或更多种遗传修饰降低CsrA对从所述鞭毛蛋白基因启动子转录的mRNA的翻译的阻遏；和
b)flgM基因的遗传修饰，所述flgM基因的遗传修饰降低对SigD转录起始的抑制。
22.如权利要求21的重组微生物，所述重组微生物组成性地表达所述多肽。
23.如权利要求21所述的重组微生物，其中所述微生物是益生的。
24.如权利要求21所述的重组微生物，其中所述微生物属于选自以下的属：芽孢杆菌属、双歧杆菌属、肠球菌属、大肠杆菌、乳杆菌属、明串珠菌属、片球菌属、片球菌属和链球菌属。
25.如权利要求21所述的重组微生物，其中所述微生物属于芽孢杆菌属。
26.如权利要求21所述的重组微生物，其中所述微生物是枯草芽孢杆菌(B.subtilis)。
27.如前述权利要求中任一项所述的重组微生物，其中所述鞭毛蛋白基因启动子是hag启动子。
28.如权利要求27所述的重组微生物，其中所述hag启动子包含一种或更多种遗传修饰，所述一种或更多种遗传修饰降低CsrA对从所述鞭毛蛋白基因启动子转录的mRNA的翻译的阻遏，其中所述遗传修饰包括CsrABS1结合位点和/或CsrABS2结合位点的修饰(例如，核苷酸取代、插入或缺失)。
29.如权利要求28所述的重组微生物，其中所述一种或更多种遗传修饰包括对CsrABS1识别序列AGGA的一种或多于一种(例如两种、三种或四种)遗传修饰，例如修饰为序列AGAA。
30.如权利要求28所述的重组微生物，其中所述一种或更多种遗传修饰包括在12碱基对BS1结合位点中或在所述结合位点的任一侧上的形成BS1的茎-环二级结构的茎的周围碱基中的一种或更多种遗传修饰。
31.如权利要求28所述的重组微生物，其中所述一种或更多种遗传修饰包括所述BS1结合位点gcacaaggacgt中的一种或多于一种(例如，至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种、至少7种、至少8种、至少9种、至少10种、至少11种、至少12种)...
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