一种治疗慢性肾炎的脂质体-纳米粒复合体制造技术

本发明专利技术提供了一种经抗体修饰的具有脂质外壳和纳米粒核心的脂质体‑纳米粒复合体(Liposome‑nanoparticle hybrids，LNHy)，它以荷电的纳米粒作为内核，表面包被相反电荷的脂质体磷脂双分子层形成具有核‑壳的类细胞结构。该复合体具有靶向能力，可包载对慢性肾炎具有预防和/或治疗作用的抗炎药及抗纤维化药物，从而实现对慢性肾炎双调控的有效治疗作用。

【技术实现步骤摘要】
一种治疗慢性肾炎的脂质体-纳米粒复合体
本专利技术属于医药
，具体涉及一种经抗体修饰的载双药脂质体-纳米粒复合体及其用于治疗慢性肾炎的用途。
技术介绍
慢性肾炎(Chronicglomerulonephritis，CGN)是一种多病因引起的慢性肾小球病变，具有患病率高、隐匿性强等特点。部分患者首次确诊时，肾脏损害已处于不可逆转阶段。免疫炎症损伤是CGN的主要发病机制，通过诱发免疫复合体在肾小球沉积，逐步发展至肾脏纤维化，最终引发慢性肾衰竭，危及患者生命。目前，CGN尚无特效药物根治，为了控制炎症反应，需要长期服用糖皮质激素类或其他免疫抑制类药物。然而，长期服用上述药物不仅会引发严重的肾外毒性，还可能诱发终末期肾病。而且，单一使用这类药物抗炎治疗并不能逆转部分已经开始纤维化的病变组织，使得CGN难以获得良好的预后。美国肾病协会的报道指出，肾小球系膜细胞(Mesangialcells，Mcs)增生及成纤维化作为CGN的基本病理过程，是对损伤作出的早期成纤维化反应，是CGN进展到终末期肾病的基本步骤，是肾脏纤维化的早期病灶，所以Mcs是治疗CGN的理想靶点。为了建立针对Mcs病灶的肾小球肾脏靶向给药系统，Tuffin等人首次提出用免疫脂质体靶向治疗Mcs病变的可能并阐述了研究意义(Tuffin,G.,Waelti,E.,Huwyler,J.,Hammer,C.,Marti,H.P.,2005.Immunoliposometargetingtomesangialcells:apromisingstrategyforspecificdrugdeliverytothekidney.JournaloftheAmericanSocietyofNephrology:JASN16,3295-3305)；Scindia等人进一步提出利用肾小球生理结构特点，以Mcs为靶点，通过控制普通聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)化的免疫脂质体粒径大小，但结果显示这种脂质体靶向效率比较低，易蓄积在肝、脾等器官(Scindia,Y.,Deshmukh,U.,Thimmalapura,P.R.,Bagavant,H.,2008.Anti-alpha8integrinimmunoliposomesinglomerulioflupus-susceptiblemice:anovelsystemfordeliveryoftherapeuticagentstotherenalglomerulusinsystemiclupuserythematosus.Arthritisandrheumatism58,3884-3891)；Choi等人亦尝试制备系列不同粒径大小的普通PEG化金纳米粒(75±25nm)，考察其在正常小鼠体内被Mcs摄取的规律(Choi,C.H.,Zuckerman,J.E.,Webster,P.,Davis,M.E.,2011.Targetingkidneymesangiumbynanoparticlesofdefinedsize.ProcNatlAcadSciUSA108,6656-6661)。然而，以上研究不仅忽视了在肾小球损伤情况下，有效滤过区域和系膜支撑区域孔径会变化的特点，使所得到的规律不适用病理条件下治疗药物的剂型设计，而且由于网状内皮系统(RES)对普通PEG化纳米粒的大量捕获(约占给药剂量的40-80％)，使得纳米粒在Mcs的蓄积仅占给药剂量的1-4％，远未达到靶向给药的目的。国内，樊梅采用了TRX配基修饰的PEG化脂质体探索靶向Mcs的可能，结果发现不仅配基毒性较大，而且脂质体靶细胞的蓄积也很不理想(樊梅.脒修饰的载雷公藤甲素阳离子脂质体的肾小球靶向给药系统研究.硕士毕业论文.2015)。目前，如何进一步减少机体RES对载体的捕获，提高靶向效率增加其在Mcs的蓄积，仍是一个关键性的问题。在药剂学研究中，模型药物的包载与释放情况一直是研究的重点问题。本来关于肾小球靶向给药系统的相关研究报道就不多，选用了模型药物的研究报道就更少。通过仅有的研究报道以及我们的前期研究可知，无论是选用的泼尼松龙，还是雷公藤内酯醇模型药物，在采用脂质体对它们分别进行包载时，低包封率和低载药量是一直无法回避的问题。而且，一些毒性大的药物(如：雷公藤内酯醇)被包载于脂质体或者纳米粒后，药物在体内的突释也是一个问题。同时，已有研究报道中，均只考虑到单一药物抗炎治疗，而忽略了病程中的纤维化预防和逆转问题，这并不利于CGN的预后，所以采用高效靶向的“抗炎/抗纤维化”双调控可能会实现对CGN的有效治疗。
技术实现思路
为克服上述现有技术的缺陷和不足，本专利技术提供了一种经抗体修饰的具有脂质外壳和纳米粒核心的脂质体-纳米粒复合体(Liposome-nanoparticlehybrids，LNHy)，它以荷电的纳米粒作为内核，表面包被相反电荷的脂质体磷脂双分子层形成具有核-壳的类细胞结构。该复合体具有靶向能力，可包载对慢性肾炎具有预防和/或治疗作用的抗炎药及抗纤维化药物，从而实现对慢性肾炎双调控的有效治疗作用。本专利技术的目的是提供一种载双药的integrinα8修饰的脂质体-纳米粒复合体，所述复合体具有脂质外壳和纳米粒核心，可同时包载抗炎药物和抗纤维化药物，所述复合体的脂质外壳经抗体修饰，所述抗体为巯基化修饰后的抗体integrinα8。本专利技术所述的载双药的integrinα8修饰的脂质体-纳米粒复合体，其中纳米粒核心选自以下一种或多种：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolicacid)，PLGA)纳米粒核心、金纳米粒(Goldnanoparticles，AuNPs)核心、介孔二氧化硅(Mesoporoussilica，MS)纳米粒核心。本专利技术所述的载双药的integrinα8修饰的脂质体-纳米粒复合体，其中所述脂质外壳由膜材DOPE、DOTAP、胆固醇、mPEG2000-DSPE和Mal-PEG2000-DSPE制备而成。本领域技术人员熟知，DOTAP是指(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺、HSPC是指氢化大豆卵磷脂、Chol是指胆固醇、DOPE是指二油酰磷脂酰乙醇胺、mPEG2000-DSPE是指二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、Mal-PEG2000-DSPE是指磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-马来酰亚胺。本专利技术所述脂质外壳中，膜材DOPE、DOTAP、胆固醇、mPEG2000-DSPE和Mal-PEG2000-DSPE的摩尔比为1～2:0.2～0.8:0.8～1.2:0.05～0.1:0.01～0.03，优选为1.5:0.5:1:0.08:0.02。本专利技术所述的载双药的integrinα8修饰脂质体-纳米粒复合体，其中抗炎药物和抗纤维化药物以相同或不同的形式进行包载，例如可分别包载于纳米粒核心、包载于脂质外壳内部、也可包载于脂质外壳中。本专利技术所述的载双药的integrinα8修饰的脂质体-纳米粒复合体，其中抗炎药物优选为糖皮质激素(Glucocorticoid，GC)类抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种载双药的脂质体-纳米粒复合体，所述复合体具有脂质外壳和纳米粒核心，可同时包载抗炎药物和抗纤维化药物，所述复合体的脂质外壳经抗体修饰，所述抗体为巯基化修饰后的抗体Anti-α8integrin。/n

【技术特征摘要】
1.一种载双药的脂质体-纳米粒复合体，所述复合体具有脂质外壳和纳米粒核心，可同时包载抗炎药物和抗纤维化药物，所述复合体的脂质外壳经抗体修饰，所述抗体为巯基化修饰后的抗体Anti-α8integrin。


2.如权利要求1所述的复合体，其中纳米粒核心选自以下一种或多种：聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolicacid)，PLGA)纳米粒核心、金纳米粒(Goldnanoparticles，AuNPs)核心、介孔二氧化硅(Mesoporoussilica，MS)纳米粒核心。


3.如权利要求1或2所述的复合体，其中所述脂质外壳由膜材DOPE、DOTAP、胆固醇、mPEG2000-DSPE和Mal-PEG2000-DSPE制备而成。


4.如权利要求1-3任一项所述的复合体，其中所述脂质外壳中，膜材DOPE、DOTAP、胆固醇、mPEG2000-DSPE和Mal-PEG2000-DSPE的摩尔比为1～2:0.2～0.8:0.8～1.2:0.05～0.1:0.01～0.03，优选为1.5:0.5:1:0.08:0.02。


5.如权利要求1-4任一项所述的复合体，其中所述抗炎药物和抗纤维化药物以相同或不同的形式进行包载，例如可分别包载于纳米粒核心、包载于脂质外壳内部、也可包载于脂质外壳中，其中抗炎药物优选为糖皮质激素(Glucocorticoid，GC)类抗炎药，例如地塞米松、泼尼松、泼尼松龙、倍氯米松、倍他米松、可的松、氢化可的松、曲安西龙等，更优选为地塞米松，所述抗纤维化药物选自以下一种或多种：卡托普利、罗非昔布、美洛昔康、吡非尼酮、甘草甜素、丹参酮IIA、汉防己甲素、川芎嗪、商陆皂甙甲、大黄素、小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)。


6.如权利要求1-5任一项所述的复合体，其粒径控制在70～130之间。


7.如权利要求1-6任一项所述载双药的脂质体-纳米粒复合体的制备方法，包括以下步骤：
(1)制备纳米粒核心；
(2)制备脂质体-纳米粒核心复合体；
(3)制备抗体修饰的脂质体-纳米粒复合体。


8.一种包载双药物的PEG化免疫脂质体-PLGA纳米粒复合体(PEG-PLGA-LNHy/双药)，其特征在于，通过下述制备方法制备而成：
(1)纳米粒核心的制备
精密量取PLGA和抗炎药溶于有机溶剂中混合作为有机相溶液，将有机相溶液滴加到混合有少量表面活性剂的水相溶液中，室温搅拌10-30min后，于水浴旋转蒸发除去有机相，去除粒径较大的纳米粒，将溶液离心后回收上清液，再将回收上清液离心后移除上清，除去游离的抗炎药，加入去离子水重悬，即得载药的纳米粒核心溶液；
(2)载双药脂质体-纳米粒(PEG-PLGA-LNHy/抗炎药/抗纤维化药物)的制备
将脂质体的膜材DOPE、DOTAP、胆固醇(Chol)、mPEG2000-DSPE和Mal-PEG2000-DSPE溶于有机溶剂，旋转蒸发除去有机溶剂得到均一薄膜，将抗纤维化药物溶于步骤(1)获得的纳米粒核心溶液中，再将溶液加入均一薄膜，加热一段时间后水化脱膜，探头超声乳化后，用聚碳酸酯膜挤压控制粒径后，得载双药脂质体-纳米粒(PEG-PLGA-LNHy/抗炎药/抗纤维化药物)；
(3)抗体修饰的载双药脂质体-纳米粒(PEG-PLGA-LNHy/抗炎药/抗纤维化药物)的制备
将巯基化修饰后的抗体Anti–α8integrin与PEG-PLGA-LNHy/...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁志翔，刘春萍，胡游，方朋超，何黎黎，顾健，
申请(专利权)人：西南民族大学，
类型：发明
国别省市：四川;51