【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于扩增靶多核苷酸的方法和多核苷酸
本专利技术大体上涉及扩增多核苷酸的方法。本专利技术大体上还涉及表征经扩增多核苷酸的方法，并且涉及用于扩增多核苷酸的试剂和试剂盒。
技术介绍
已经基于噬菌体的自然滚环复制过程开发了等温DNA扩增技术—滚环扩增(RCA)。RCA是可以用于快速合成环状多核苷酸分子的多个拷贝的单向核酸复制的过程。RCA广泛用于分子生物学，尤其是用于在生物检测方法中扩增信号。制作RCA模板的主要方法有三种。在第一种方法中，在随机或经设计引物退火之前，可以使用单链DNA连接酶使模板DNA环化。聚合酶用于扩增DNA，并且随着围绕环状模板进行扩增，聚合酶置换引物和延伸产物。此方法的缺点是难以使DNA环化，只能获得有关模板链的信息，并且模板从未包含在产物中，只有拷贝包含在其中。在第二种方法中，将已知序列的与单链DNA两端互补的寡核苷酸夹板退火到单链DNA，并且用双链DNA连接酶密封单链DNA两端之间的缺口，以使模板环化。聚合酶扩增始于夹板充当引物，并且随着聚合酶扩增的进行置换引物和延伸产物。此方法的缺点是需...
【技术保护点】
1.一种扩增靶多核苷酸的方法，所述方法包括：/na)提供包括5'发夹、靶多核苷酸和3'发夹的模板多核苷酸，其中所述5'发夹包括一个或多个非典型核苷酸；/nb)使所述模板多核苷酸与聚合酶和典型核苷酸接触，其中：/n(i)所述聚合酶使用所述典型核苷酸使所述模板多核苷酸从其3'端延伸以形成第一个经延伸的多核苷酸，所述第一个经延伸的多核苷酸包括在其5'端处的所述5'发夹和在其3'端处的所述5'发夹的补体，其中所述5'发夹的补体形成3'发夹；并且/n(ii)所述聚合酶使所述第一个经延伸的多核苷酸从其3'端延伸以形成第二个经延伸的多核苷酸，所述第二个经延伸的多核苷酸包括在其5'端处的所...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180514 GB 1807793.31.一种扩增靶多核苷酸的方法，所述方法包括：
a)提供包括5'发夹、靶多核苷酸和3'发夹的模板多核苷酸，其中所述5'发夹包括一个或多个非典型核苷酸；
b)使所述模板多核苷酸与聚合酶和典型核苷酸接触，其中：
(i)所述聚合酶使用所述典型核苷酸使所述模板多核苷酸从其3'端延伸以形成第一个经延伸的多核苷酸，所述第一个经延伸的多核苷酸包括在其5'端处的所述5'发夹和在其3'端处的所述5'发夹的补体，其中所述5'发夹的补体形成3'发夹；并且
(ii)所述聚合酶使所述第一个经延伸的多核苷酸从其3'端延伸以形成第二个经延伸的多核苷酸，所述第二个经延伸的多核苷酸包括在其5'端处的所述5'发夹和在其3'端处的所述5'发夹的补体，其中所述5'发夹的补体形成3'发夹。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述聚合酶使所述第二个经延伸的多核苷酸从其3'端延伸以形成第三个经延伸的多核苷酸，所述第三个经延伸的多核苷酸包括在其5'端处的所述5'发夹和在其3'端处的所述5'发夹的补体，其中所述5'发夹的补体形成3'发夹。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述聚合酶使所述第三个经延伸的多核苷酸以及任选地通过使所述第三个经延伸的多核苷酸延伸和/或通过随后的延伸产生的任何另外的经延伸的多核苷酸延伸以产生另外的经延伸的多核苷酸，所述另外的经延伸的多核苷酸包括在其5'端处的所述5'发夹和在其3'端处的所述5'发夹的补体，其中所述5'发夹的补体形成3'发夹。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述聚合酶是链置换聚合酶。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述方法是在恒定温度下执行的。
6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括制备所述模板多核苷酸的初始步骤。
7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，所述方法还包括通过将包括5'发夹的衔接子连接到靶多核苷酸的一个或多个5'端来制备所述模板多核苷酸的初始步骤。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述靶多核苷酸是双链多核苷酸，并且所述方法包括将包括5'发夹和3'发夹的双链衔接子连接到所述靶多核苷酸的两端。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述靶多核苷酸是双链多核苷酸，并且所述方法包括：将包括5'发夹的双链衔接子连接到所述靶多核苷酸的两端，以及使用聚合酶使所述靶多核苷酸的每条链的3'端延伸，以产生与所述5'发夹互补的3'发夹。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述双链衔接子是MuA底物，并且使用MuA转座酶(i)使多核苷酸断裂以产生所述靶多核苷酸，并且(ii)将所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：詹姆斯·怀特，
申请(专利权)人：牛津纳米孔科技公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB
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