一种白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法技术

本发明专利技术涉及一种白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法，其包括S1、预冻，预冻条件为：冷阱温度≤‑80℃，气压为一个大气压，用时30～40min升温至‑55℃～‑45℃，并维持230～260min；S2、升华干燥，S2.1、一阶升华，一阶升华条件为：冷阱温度≤‑80℃，真空度8‑10pa，用时55～70min升温至‑35～‑30℃，并维持300～330min；S2.2、二阶升华，二阶升华条件为：冷阱温度≤‑80℃，真空度8‑10pa，用时30～40min升温至‑25～‑20℃，并维持1500～1600min；S3、解析干燥，解析干燥条件为：冷阱温度≤‑80℃，真空度0pa，用时60～90min升温至26～30℃，并维持400～600min，制得CRM197蛋白冻干粉。本发明专利技术具有CRM197蛋白冻干粉的各项质量与冻干前皆无明显差异，同时具有较高的稳定性的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法
本专利技术涉及疫苗冻干的
，尤其是涉及一种白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法。
技术介绍
CRM197是白喉毒素的无毒变异体，与天然白喉毒素相比，CRM197蛋白在结构上仅是A片段上第52位的甘氨酸残基被谷氨酸残基取代，从而使得其酶催化活性丧失，因而不能对细胞产生毒性作用；但由于其B片段的蛋白序列及结构未发生任何变化，没有毒性的CRM197蛋白仍然可与敏感细胞的受体结合。即CRM197蛋白在丧失酶活性及毒性的同时仍保留白喉毒素的免疫原性，且其与其它多种白喉毒素及变异体相比，具有完全无毒，完整性最高、突变最少、结构最接近，受体阻断能力最强的优点。因此CRM197成为一种理想的多糖结合疫苗载体蛋白。但是针对CRM197蛋白的保存，现有技术基本采用液体冻存的方式进行保存，与液体冻存前的CRM197蛋白原液降相比，其质量明显降低且稳定性不高。现有中国专利授权公告号为：CN103627758B的专利文件公开了一种CRM197蛋白的生产方法，包括1)采用白喉棒杆菌(Coryn本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、预冻/n将白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白半成品原液，按照0.5mL/cm

【技术特征摘要】
1.一种白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白的冻干方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、预冻
将白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白半成品原液，按照0.5mL/cm2平铺于冻干不锈钢盘中，将所述冻干不锈钢盘置于真空冷冻干隔板上，预冻条件为：冷阱温度≤-80℃，气压为一个大气压，用时30～40min升温至-55℃～-45℃，并维持230～260min；
S2、升华干燥
S2.1、一阶升华
所述冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上，一阶升华条件为：冷阱温度≤-80℃，真空度8-10pa，用时55～70min升温至-35～-30℃，并维持300～330min；
S2.2、二阶升华
所述冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上，二阶升华条件为：冷阱温度≤-80℃，真空度8～10pa，用时30～40min升温至-25～-20℃，并维持1500～1600min；
S3、解析干燥
所述冻干不锈钢盘仍置于真空冷冻干燥机隔板上，解析干燥条件为：冷阱温度≤-80℃，真空度0pa，用时60～90min升温至26～30℃，并维持400～600min，制得CRM197蛋白冻干粉；
所述白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白半成品原液包括以下原料组分：CRM197蛋白溶液、
蔗糖、氢氧化钠、盐酸、注射用水；
所述白喉毒素无毒突变体CRM197蛋白半成品原液的配制方法为：量取一定量CRM197蛋白溶液，按照测定的蛋白浓度，计算出蛋白总量M；按照9M的重量称量蔗糖，溶解于CRM197蛋白溶液中，使用注射用水稀释至蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：马伟，曹方，王丹雅，郭阳漾，
申请(专利权)人：艾美卫信生物药业浙江有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33