用于可激发和不可激发细胞中Ca制造技术

本发明专利技术提供了红移的低亲和力Ca

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于可激发和不可激发细胞中Ca2+成像的低亲和力红色荧光指示剂
本专利技术通常涉及低亲和力的荧光Ca2+指示剂，该指示剂可靶向内质网、肌质网和/或线粒体。
技术介绍
在心脏细胞中，肌质网(SR)负责Ca2+诱导的Ca2+释放(CICR)的放大，这使得电压依赖性Ca2+进入触发肌丝收缩。由于收缩与SR的运动有关，必须采用比率型(ratiometric)(与强度型(intensiometric)相对)的成像方法来校正运动伪影。亚细胞区室(例如线粒体、内质网(ER)和SR)的钙离子(Ca2+)浓度范围跨度为低至微摩尔到高至毫摩尔。在具有高Ca2+浓度的区室中，经优化以用于检测细胞质Ca2+(通常为0.1μM至10μM)的荧光指示剂变得饱和，变得对Ca2+浓度的生理相关变化无反应。为解决此问题，已进行大量的研究工作来开发低亲和力的Ca2+指示剂，包括基因编码的荧光蛋白(FP)。与基于合成染料的指示剂相比，基于FP的指示剂随其相应的DNA编码序列递送至细胞，并且可包括在特定组织中表达或靶向特定亚细胞区室的其他序列。r>低亲和力指示剂的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测细胞中Ca

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180302 US 62/637,8081.一种检测细胞中Ca2+水平变化的方法，其中，所述方法包括：
a.获得包含细胞的样品，所述细胞经工程化以表达一种以上低亲和力的Ca2+指示剂，所述指示剂选自：LAR-GECO1.5、LAR-GECO2和LAR-GECO3、LAR-GECO4、LAREX-GECO1、LAREX-GECO2、LAREX-GECO3和LAREX-GECO4，或具有与前述任一项基本相似的氨基酸序列的多肽；
b.使细胞暴露于激发光；以及
c.通过可视化或成像细胞来检测ER、SR和/或线粒体的Ca2+水平的变化。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述样品包括细胞培养物、干细胞或哺乳动物血浆。


3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述样品包含稳定的永生化细胞系的细胞培养物。


4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述细胞培养物包括HL1细胞系。


5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述指示剂是比率型的。


6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述指示剂是强度型的。


7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中，所述指示剂与另一种荧光指示剂组合使用。


8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述方法使用单波长双色成像方法。


9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述另一种荧光指示剂是细胞质钙指示剂。


10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中，所述指示剂靶向具有细胞器特异性靶向序列的细胞器。


11.一种低亲和力的荧光Ca2+多肽，其中，所述低亲和力的荧光Ca2+多肽选自：LAR-GECO1.5、LAR-GECO2和LAR-GECO3、LAR-GECO4、LAREX-GECO1、LAREX-GECO2、LAREX-GECO3和LAREX-GECO4，或具有与前述任一项基本相似的氨基酸序列的多肽。


12.根据权利要求11所述的多肽，其中，所述多肽的氨基酸序列为SEQIDNO：4、6、8、10、12、14、16或18之一。


13.根据权利要求11或12所述的多肽，其中，所述多肽还包含细胞器特异性靶向序列。

【专利技术属性】
技术研发人员：张郁芬，吴嘉辉，M·J·丹尼尔斯，R·E·坎贝尔，
申请(专利权)人：阿尔伯塔大学理事会，牛津大学校董会，
类型：发明
国别省市：加拿大;CA