含细胞外基质的组合物、三维组织体形成用临时支架材料及三维组织体形成剂以及从三维组织体中回收细胞的方法技术

本发明专利技术涉及含细胞外基质的组合物、三维组织体形成用临时支架材料及三维组织体形成剂以及从三维组织体中回收细胞的方法。所述含细胞外基质的组合物包含片段化的细胞外基质成分和水性介质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含细胞外基质的组合物、三维组织体形成用临时支架材料及三维组织体形成剂以及从三维组织体中回收细胞的方法
本专利技术涉及含细胞外基质的组合物、三维组织体形成用临时支架材料及三维组织体形成剂。本专利技术还涉及从三维组织体中回收细胞的方法。
技术介绍
近年来，开发了在生物体外构建细胞的三维组织体的技术。例如，提出了通过培养将培养细胞的表面整体用粘附膜包覆的包覆细胞来制造三维组织体的方法(专利文献1)、在以聚乳酸等为材料的支架上播种细胞来制造三维组织体的方法(非专利文献1)等。另外，本专利技术者们迄今为止提出了如下方法等：一种制造三维组织体的方法(专利文献2)，其包含：将用包含胶原成分、纤连蛋白成分等细胞外基质成分的被膜涂布的细胞三维地配置而形成三维组织体；一种三维组织体的制造方法(专利文献3)，其包含：形成在细胞的表面形成有被膜的包覆细胞、和将包覆细胞三维地配置，其中，包覆细胞的形成包含：使细胞浸渍于含有被膜成分的液体中、和利用透液性膜将所浸渍的细胞和含有被膜成分的液体分离。这样的三维组织体期待作为实验动物的替代品、移植材料等的用途。在细胞三维培养的方法中，研究了如上述那样使用能够粘附细胞的支架材料的方法、不使用支架材料而使细胞层叠的方法等各种方法，但在任一细胞培养方法中，一般都是在胶原成分等细胞外基质成分的共存化下与细胞一起培养。这是因为，除了细胞外基质成分被认为作为在细胞间质中物理性地支撑组织结构的材料起作用以外，在细胞的产生、分化、形态形成等方面也承担生物学上的重要作用。现有技术文献r>专利文献专利文献1：日本特开2012-115254号公报专利文献2：国际公开第2015/072164号专利文献3：国际公开第2016/027853号专利文献4：日本专利6029102号公报专利文献5：日本专利5870408号公报非专利文献非专利文献1：NatureBiotechnology,2005,Vol.23,NO.7,p.879-884
技术实现思路
专利技术所要解决的课题在从外部供给细胞外基质成分来培养细胞的情况下，所构建的三维组织体中必然包含从外部供给的细胞外基质成分(外源性细胞外基质成分)。使外源性细胞外基质成分与细胞共存，在体外(invitro)进行细胞的三维培养的阶段，具有有用的方面，但另一方面在对所构建的三维组织体进行各种分析、解析、评价等的阶段，如果是自然的状态，则本来不存在的外源性细胞外基质成分有可能对三维组织体本来的功能造成影响。作为避免这样的影响的方法，例如考虑在三维组织体形成后，仅将外源性成分除去的方法。例如，专利文献4中使用了显示在25℃以上的温度下成为凝胶状态且在0℃以上且15℃以下的温度下成为溶胶状态的热可逆性的溶胶-凝胶转变的载体材料。专利文献4中进行如下方法：在凝胶化的载体材料上形成三维组织体，然后，通过冷却该载体材料使其溶胶化，除去溶胶化的载体材料，由此回收三维组织体。然而，专利文献4的方法中，由于是人工制作出显示热可逆性的溶胶-凝胶转变的载体材料的材料，因此担心在培养过程中会对三维组织体造成影响。此外，专利文献4中另行投入有胶原成分作为外源性细胞外基质成分，因此所回收的三维组织体中仍然含有外源性细胞外基质成分。另外，例如在投入有胶原成分作为外源性的细胞外基质成分的情况下，如果为了分解胶原而利用胶原酶进行处理，则能够溶解外源性的胶原成分，但有可能对基于细胞自身以及由该细胞分泌的内源性的胶原成分的组织结构造成损伤。本专利技术是鉴于上述情况而完成的，其目的在于提供一种显示热可逆性的溶胶-凝胶转变的含细胞外基质的组合物。用于解决课题的手段本专利技术者们反复进行了深入研究，结果发现，通过以下所示的专利技术，能够解决上述课题。即，本专利技术提供例如以下的(1)～(11)。(1)一种含细胞外基质的组合物，其包含片段化的细胞外基质成分和水性介质。(2)根据(1)所述的含细胞外基质的组合物，其中，片段化的细胞外基质成分包含片段化的胶原成分。(3)根据(1)或(2)所述的含细胞外基质的组合物，其中，片段化的细胞外基质成分的至少一部分为纤维状。(4)根据(1)～(3)中任一项所述的含细胞外基质的组合物，其中，片段化的细胞外基质成分的平均长度为100nm～400μm。(5)根据(1)～(4)中任一项所述的含细胞外基质的组合物，其中，以所述含细胞外基质的组合物总量为基准计，细胞外基质成分的含量为1mg/mL以上且100mg/mL以下。(6)根据(1)～(5)中任一项所述的含细胞外基质的组合物，其中，片段化的细胞外基质成分为天然来源。(7)根据(1)～(6)中任一项所述的含细胞外基质的组合物，其中，在35.5℃±2℃下从溶胶状态发生凝胶化，在4.5℃±2℃下从凝胶状态发生溶胶化。(8)一种三维组织体形成用临时支架材料，其包含(1)～(7)中任一项所述的含细胞外基质的组合物。(9)一种三维组织体形成剂，其为细胞外基质成分含有率高的三维组织体的形成剂，其包含(1)～(7)中任一项所述的含细胞外基质的组合物。(10)一种三维组织体，其包含(1)～(7)中任一项所述的含细胞外基质的组合物。(11)一种从三维组织体中回收细胞的方法，所述三维组织体包含片段化的细胞外基质成分及细胞，所述方法包含：将三维组织体冷却，使片段化的细胞外基质成分溶胶化的工序；和将溶胶化的片段化的细胞外基质成分除去的工序。专利技术效果根据本专利技术，能够提供显示热可逆性的溶胶-凝胶转变的含细胞外基质的组合物。使用本专利技术的含细胞外基质的组合物形成的三维组织体通过在培养开始后经过一定期间后进行冷却，能够使外源性细胞外基质成分溶胶化，因此能够不对三维组织体自身造成损伤地从三维组织体除去外源性细胞外基质成分。附图说明图1是片段化胶原成分的显微镜照片。图2是表示包含片段化胶原成分和磷酸缓冲生理盐水的组合物在4℃下的500nm的透过率(transmittance)的测定结果的图表。图3(A)是表示含片段化胶原的溶液及市售的含胶原的溶液在37℃下的500nm的透过率的测定结果的图表，图3(B)是表示含片段化胶原的溶液及市售的含胶原的溶液在4℃下的500nm的透过率的测定结果的图表。图4是表示4℃或37℃下的含片段化胶原的溶液的照片。图5(A)是表示37℃及4℃下的市售的含胶原的溶液的照片，图5(B)是表示37℃及4℃下的含片段化胶原的溶液的照片。图6(A)～(C)是表示包含片段化胶原成分及细胞的三维组织体的显微镜照片。图7(A)～(B)是表示细胞的回收结果的显微镜照片。图8是表示含有2质量％、3质量％或5质量％的片段化胶原成分的溶液的溶胶-凝胶转变的图表。图9(A)～(C)分别是表示猪来源、牛来源、或人来源的含片段化胶原的溶液的溶胶-凝胶转变的照片。图10是表示片段化胶原成分的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含细胞外基质的组合物，其包含片段化的细胞外基质成分和水性介质。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180427 JP 2018-0873211.一种含细胞外基质的组合物，其包含片段化的细胞外基质成分和水性介质。


2.根据权利要求1所述的含细胞外基质的组合物，其中，所述片段化的细胞外基质成分包含片段化的胶原成分。


3.根据权利要求1或2所述的含细胞外基质的组合物，其中，所述片段化的细胞外基质成分的至少一部分为纤维状。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的含细胞外基质的组合物，其中，所述片段化的细胞外基质成分的平均长度为100nm～400μm。


5.根据权利要求1～4中任一项所述的含细胞外基质的组合物，其中，以所述含细胞外基质的组合物总量为基准计，所述细胞外基质成分的含量为1mg/mL以上且100mg/mL以下。


6.根据权利要求1～5中任一项所述的含细胞外基质的组...

【专利技术属性】
技术研发人员：北野史朗，入江新司，松崎典弥，
申请(专利权)人：凸版印刷株式会社，国立大学法人大阪大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP