一种增强稻瘟病抗性的miRNA的克隆与应用制造技术

本发明专利技术公开了一种增强稻瘟病抗性的miRNA的克隆与应用，属于植物基因工程技术领域。本发明专利技术miRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术发明专利技术人鉴定并证实了miRNA‑T34可以通过抑制LOC_Os02g39410和LOC_Os01g46500的表达以调节水稻基础免疫反应，从而正向调控稻瘟病抗性。结合利用过表达miRNA技术上调miRNA‑T34，可以显著提高水稻对稻瘟病的抗性，具有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种增强稻瘟病抗性的miRNA的克隆与应用
本专利技术属于植物基因工程
，具体涉及一种增强稻瘟病抗性的miRNA的克隆与应用。
技术介绍
稻瘟病是由稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)引起的一种破坏性病害，在水稻区常造成巨大的经济损失(Yietal，2004)。实践证明，鉴定和利用广谱抗性基因进行水稻抗病育种是防治稻瘟病最为经济有效的策略(Dengetal，2006)。截至目前，研究人员先后用从不同抗病品种中鉴定出80多个稻瘟病抗性基因，已鉴定和克隆的基因分别以单基因或基因簇的形式分布在除3号染色体外的其它11条染色体上，且多个抗病基因成簇分布，主要存在于第6、11、12染色体。尽管全国各地选育出一批抗病或耐病的高产品种，但是新选育品种的抗源在总体上略呈单一化；长期单一化使用个别抗病基因会使得对应的无毒基因发生变异，使得部分用于品种选育的抗性基因在经过多代传递后，其抗性不能持久，并在适宜于稻瘟病菌的环境条件下，可造成大面积爆发。因此，需要多途径拓宽抗源，结合多基因聚合育种及生物技术等手段培育持久抗病新品种。<br>miRNAs是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种增强稻瘟病抗性的miRNA，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种增强稻瘟病抗性的miRNA，其特征在于：其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。


2.编码权利要求1所述的增强稻瘟病抗性的miRNA的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。


3.权利要求1所述的增强稻瘟病抗性的miRNA相应的前体，其特征在于：其核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。


4.编码权利要求1所述的增强稻瘟病抗性的miRNA相应的前体的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQIDNO:4所示。


5.权利要求1所述的增强稻瘟病抗性的miRNA和/或其相应的前体在提高水稻对稻瘟病抗性中的应用。


6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：利用基因工程技术，通过促进所述的miRNA在水稻中的过表达，从而提高水稻对稻瘟病菌的抗性。


7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的基因工程技术为过表达miRNA技术。


8.一种利用过表达miRNA技术培育抗稻瘟病水稻的方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)以水稻叶总RNA为模板，反转录得到cDNA，再以所得cDNA为模板，分别以T34-OX-F和T34-OX-R为引物，PCR扩增得到目的片段；
(2)将纯化的目的片段用HindⅢ和BamHⅠ双酶切，再与经同样双酶切的pOX载体连接，获得连接产物；
(3)将连接产物直接转化大肠杆菌感受态细胞，挑选单菌落培养，提取质粒进行HindⅢ、BamHI酶切鉴定及菌落PCR鉴定，将以上两种检测结果符合要求的转化子继续进行测序鉴定，获得成功构建的过表达载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：王加峰，侯艳，郭涛，陈淳，杨瑰丽，肖武名，黄翠红，王慧，陈志强，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44