一种Cyp1a1基因敲除小鼠模型的构建方法及其在脓毒症中的应用技术

本发明专利技术公开一种Cyp1a1基因敲除小鼠模型的构建方法及其在脓毒症中的应用，构建方法包括：确定小鼠待敲除基因的靶位点，设计sgRNA，其序列如SEQ ID No:2‑5所示；将有活性的sgRNA与Cas9 mRNA或Cas9 Protein共注射或共电转至小鼠受精卵细胞中，并将受精卵移植入受体母鼠孕育，获得F0代基因敲除小鼠；将F0代小鼠与野生型小鼠杂交，获得F1代Cyp1a1基因敲除小鼠。本发明专利技术成功制备了Cyp1a1基因敲除小鼠模型，并首次将其应用于脓毒症病理进程研究中，意外地发现Cyp1a1基因敲除小鼠的细菌清除能力显著增强，在应对内毒素血症与革兰氏阴性菌攻击时的生存能力提高，抗感染能力增强。本发明专利技术还首次将Cyp1a1基因敲除小鼠运用在脓毒症的代谢调控研究中，为危重症领域相关代谢机制研究提供可靠的动物模型。

【技术实现步骤摘要】
一种Cyp1a1基因敲除小鼠模型的构建方法及其在脓毒症中的应用
本专利技术涉及生物医药
，具体涉及一种Cyp1a1基因敲除小鼠模型的构建方法，以及Cyp1a1基因敲除小鼠在脓毒症中的应用。
技术介绍
脓毒症3.0将人类脓毒症定义为机体对感染反应失调所致危及生命的器官功能障碍。随着人们对脓毒症发病本质的逐步了解，已认识到脓毒症的发病与感染、炎症、凝血、神经-内分泌-免疫反应等密切相关，并涉及全身多器官、多系统的异常改变。代谢途径的紊乱、宿主的缺氧反应和免疫系统的过度驱动是脓毒症在分子水平上的病理标志。虽然脓毒症发病机理中的炎症反应机制已被很好地理解，但那些导致代谢失调和多器官功能障碍或衰竭的机制仍不清楚。在创伤和脓毒症中观察到代谢过程的变化与免疫失调有很强的相关性，这种免疫代谢紊乱严重影响患者预后。尤其对于严重创/烧伤、休克、外科手术打击引发机体代谢功能障碍的确切机制及其在脓毒症中的地位认识不足，同时临床上缺乏切实可行的代谢状态评估方法与代谢治疗手段。细胞色素P4501A1(CYP1A1)为一种羟化酶，可催化代谢多环本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Cyp1a1基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)确定小鼠待敲除基因的靶位点，设计针对Cyp1a1基因的sgRNA，所述sgRNA包括Cyp1a1-Sg1、Cyp1a1-Sg2、Cyp1a1-Sg3和Cyp1a1-Sg4，其序列分别如SEQ ID No:2、SEQ IDNo:3、SEQ ID No:4和SEQ ID No:5所示；/n(2)将有活性的sgRNA与Cas9 mRNA或Cas9 Protein共注射或共电转至小鼠受精卵细胞质或细胞核中，并将受精卵移植入受体母鼠孕育，获得F0代Cyp1a1基因敲除小鼠；/n(3)将F0代Cyp1a1基因敲除小鼠与正常...

【技术特征摘要】
1.一种Cyp1a1基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)确定小鼠待敲除基因的靶位点，设计针对Cyp1a1基因的sgRNA，所述sgRNA包括Cyp1a1-Sg1、Cyp1a1-Sg2、Cyp1a1-Sg3和Cyp1a1-Sg4，其序列分别如SEQIDNo:2、SEQIDNo:3、SEQIDNo:4和SEQIDNo:5所示；
(2)将有活性的sgRNA与Cas9mRNA或Cas9Protein共注射或共电转至小鼠受精卵细胞质或细胞核中，并将受精卵移植入受体母鼠孕育，获得F0代Cyp1a1基因敲除小鼠；
(3)将F0代Cyp1a1基因敲除小鼠与正常野生型小鼠杂交，获得F1代Cyp1a1基因敲除小鼠模型。


2.根据权利要求1所述的一种Cyp1a1基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)还包括：将设计的sgRNA进行体外扩增构建表达sgRNA的质粒，并对sgRNA体外活性测试。


3.根据权利要求1所述的一种Cyp1a1基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)还包括：提取F0代小鼠的基因组DNA进行基因型鉴定，获得F0代Cyp1a1基因成功敲除的小鼠。


4.根据权利要求1所述的一种Cyp1a1基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中小鼠和母鼠的品系为C57BL/6J。


5.根据权利要求1所述的一种Cyp1a1基因敲除小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)还包括：对F1代小...

【专利技术属性】
技术研发人员：马晓媛，王芳杰，唐婉琪，李卫，杨雪，梁华平，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军特色医学中心，
类型：发明
国别省市：重庆;50