一种Metrnl基因条件性敲除小鼠模型制作方法技术

本发明专利技术公开一种Metrnl基因条件性敲除小鼠模型制作方法，包括以下步骤：确定基于CRISPR‑Cas9系统设计靶向动物Metrnl基因的sgRNA，将SgRNA与Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后，一起注射到小鼠受精卵中，然后将受精卵移植到假孕母鼠体内，假孕母鼠体产出F0代，对F0进行PCR鉴定，将阳性F0代与野生型小鼠交配获得F1代杂合子，F1代杂合子进行杂交，筛选Metrnl基因敲除基因的纯合子代，作为Metrnl基因敲除小鼠模型。本发明专利技术构建的Metrnl小鼠模型稳定性强，能够稳定遗传，为进一步研究心血管疾病、代谢综合征等发病机制及基因治疗提供了经济、简单、可靠的动物模型。

【技术实现步骤摘要】
一种Metrnl基因条件性敲除小鼠模型制作方法
本专利技术涉及一种生物医药
，具体涉及一种Metrnl基因条件性敲除小鼠模型制作方法。
技术介绍
Metrnl(Meteorin-like)是近年来发现的新的脂肪因子，与神经营养因子Meteorin具有很高的同源性(约40％)，但其分布和功能却与Meteorin大不相同。小鼠Metrnl位于第11号染色体qE2位点，人Metrnl位于第17号染色体q25.3位点，它在人、大鼠、小鼠中具有77％的序列同源。Metrnl在包括脂肪组织、皮肤、粘膜组织、屏障组织、肌肉及心脏组织中均有较高的表达。研究报道，Metrnl在神经轴突生长、脂肪细胞分化、能量代谢、胰岛素抵抗、巨噬细胞活化等病理生理过程中起重要作用。针对这情况，现提出一种一种Metrnl基因条件性敲除小鼠模型制作方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种Metrnl基因条件性敲除小鼠模型制作方法，利用CRISPR-Cas9基因敲除技术，敲除Metrnl基因，Metrnl基因敲除后的小鼠动脉粥样硬化发生率升高，出现本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Metrnl基因条件性敲除小鼠模型制作方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤一：确定基于CRISPR-Cas9系统设计靶向动物Metrnl基因的sgRNA；/n步骤二：将SgRNA与Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后，一起注射到小鼠受精卵中，然后将受精卵移植到假孕母鼠体内；/n步骤三：步骤二的假孕母鼠体产出F0代，对F0进行PCR鉴定，将阳性F0代与野生型小鼠交配获得F1代杂合子，F1代杂合子进行杂交；/n步骤四：筛选Metrnl基因敲除基因的纯合子代，作为Metrnl基因敲除小鼠模型；/n步骤五：根据Metrnl基因结构，选择Metrnl-201(ENSMUST000000367...

【技术特征摘要】
1.一种Metrnl基因条件性敲除小鼠模型制作方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：确定基于CRISPR-Cas9系统设计靶向动物Metrnl基因的sgRNA；
步骤二：将SgRNA与Cas9核酸酶的mRNA经体外转录后，一起注射到小鼠受精卵中，然后将受精卵移植到假孕母鼠体内；
步骤三：步骤二的假孕母鼠体产出F0代，对F0进行PCR鉴定，将阳性F0代与野生型小鼠交配获得F1代杂合子，F1代杂合子进行杂交；
步骤四：筛选Metrnl基因敲除基因的纯合子代，作为Metrnl基因敲除小鼠模型；
步骤五：根据Metrnl基因结构，选择Metrnl-201(ENSMUST00000036742.13)转录本的exon2-4为敲除区域，在intron1-2和3端UTR下游插入loxp元件，loxp之间的区域称作flox区域，flox区域约9kb；
步骤六：Metrnl-201转录本包含4个exons，翻译起始位点ATG位于exon1，翻译终止位点TGA位于exon4，选择exon2-4为敲除区域；
步骤七：采用CRISPR/Cas9技术对Metrnl基因进行修饰。


2.根据权利要求1所述的一种Metrnl基因条件性敲除小鼠模型制作方法,其特征在于，所述sgRNA序列如下：
5’-CTGACTGCTTGCATGGTGGGAGG-3’
5’-GTTCTGACTGGCTGGA...

【专利技术属性】
技术研发人员：高伟，鲁翔，王曼，王玥，赵璨，
申请(专利权)人：南京医科大学附属逸夫医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32