一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法，属于生物细胞基因工程技术领域，包括以下步骤：细胞培养基、细胞单克隆筛选、单克隆细胞染色体荧光原位杂交、分析提升CHO生产细胞株的性能的因素。本发明专利技术清楚地观察到CHO细胞株性能可以达到更高的细胞密度，细胞密度、细胞生存率及表达蛋白均有所提升，这说明本发明专利技术培养基是一个稳定平衡的整体，各成分相互作用，共同促进中国仓鼠卵巢细胞的生长，为CHO细胞株细胞生长提供了丰富的营养环境，避免了有血清添加的各种弊端，本发明专利技术培养基各组分共同作用，减少了中国仓鼠卵巢细胞生长代谢产生的有害代谢物，本发明专利技术培养基可以促进中国仓鼠卵巢细胞功能蛋白的表达和性能提升。

【技术实现步骤摘要】
一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法
本专利技术涉及一种CHO细胞株，涉及生物细胞基因工程
，特别是涉及一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法。
技术介绍
随着基因组学，分子生物学以及现代医学的不断发展，生物医药产业也逐步展现出其特有的优势并在近十年来在国内取得了快速的发展，其中重组蛋白药物，特别是抗体类药物发展最为迅速，国内已经有一大批企业以及研究机构从事抗肿瘤，心血管，免疫疾病方向的抗体开发研究工作，多个抗体药物已经上市。中国仓鼠卵巢细胞（Chinesehamsterovarycell,CHO）是表达药用生物活性大分子的首选，CHO很少分泌自身的内源蛋白，有利于蛋白的纯化。分泌表达是CHO的主要表达途径，但许多蛋白质（细胞因子等）的表达相对较低，增加细胞分泌的能力能显著促进重组蛋白的表达。在CHO细胞表达分泌性蛋白质过程中，起初会合成由15-30个疏水性氨基酸组成的信号肽，信号肽随后被细胞质中的信号识别颗粒（Signal-RecognitionParticle,SRP）所识别，识别后导致蛋白质合成暂停本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法，其特征在于：包括以下步骤：/n步骤1、配制细胞培养基；/n步骤2、细胞单克隆筛选；/n步骤3、单克隆细胞染色体荧光原位杂交；/n步骤4、分析提升CHO生产细胞株的性能的因素。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1、配制细胞培养基；
步骤2、细胞单克隆筛选；
步骤3、单克隆细胞染色体荧光原位杂交；
步骤4、分析提升CHO生产细胞株的性能的因素。


2.根据权利要求1所述的一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法，其特征在于：所述步骤1中细胞培养基的配制过程为：
A1、首先悬浮培养中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系，以CHO—K1细胞系为基础进行配制；
A2、在培养基中添加谷氨酰胺及抗结团剂、氨基酸、可溶性维生素、无机盐、白蛋白以及转铁蛋白，加入适量的注射用水至总体积的75％-80％，轻微缓慢搅拌溶解；
A3、继续加入维生素E和维生素D，并加入0.22％的聚山梨酯，搅拌溶解，得到配制的基础培养基溶液A液。


3.根据权利要求2所述的一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法，其特征在于：向所述步骤A3所得A液中加入碳酸氢钠，轻微缓慢搅拌溶解，加入适量的注射用水，搅拌配制得B液，在所得B液中用1mol/L氢氧化钠溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至7.2-7.4，配制得C液，所得C液中用0.22μm滤膜正压过滤除菌，即得细胞培养基。


4.根据权利要求1所述的一种基于基因手段提升CHO生产细胞株性能的方法，其特征在于：所述步骤2中的单克隆细胞筛选过程为：
B1、在培养基培养液中对需要克隆的细胞进行培养，待其细胞聚合至40％至80％后，进行基因转染；
B2、在基因转染后进行1周的细胞生长恢复，然后用能致死非基因转染细胞的浓度的新霉素进行10-20天筛选；
B3、在B2致死性筛选后，在转基因细胞维持生长的浓度的新霉素下，再加入含有生长因子培养液，在培养液中进...

【专利技术属性】
技术研发人员：盘其伟，胡红宇，
申请(专利权)人：深圳华柏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44